于公义
- 作品数：25 被引量：52H指数：4
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- 相关领域：医药卫生生物学轻工技术与工程化学工程更多>>
- RP—HPLC法测定工程菌发酵液中的乙酸含量被引量：4
- 1996年
- 采用了ＲＰ—ＨＰＬＣ法，选用简便的样品预处理方法，测定了温度诱导型ｒｈＩＬ—２工程菌发酵液中的乙酸量，得到了较好的分离结果。并测出ｒｈＩＬ—２在培养过程中确有代谢副产物乙酸的积累，在升温诱导后乙酸量急剧增加．
- 冯尔玲吴军于公义
- 关键词：基因工程菌发酵液乙酸RP-HPLC
- 工程菌E.coli MM2的固定化细胞制备
- 1994年
- 固定化细胞技术是七十年代兴起的一门应用技术。固定化细胞具有细胞密度高、易进行连续生产且稀释率高、不易被污染、产物易分离、可降低设备规模等优点,已成为生物合成、生物转化的有效工具,得到广泛应用。近十年来,人们把固定化细胞技术应用到工程菌的培养中取得了一些有价值的结果。用工程菌制得的固定化细胞裂解青霉素生产6-APA,已达工业化生产水平。据文献报道,工程菌固定化后可大大提高重组质粒的稳定性,并且外源基因能稳定地表达。
- 方宏清冯尔玲赵四青于公义
- 关键词：固定化细胞E.COLI工程菌外源基因细胞密度
- RP-HPLC法测定工程菌发酵液中的乙酸含量被引量：1
- 1994年
- 随着基因工程的发展,工程菌发酵工艺越来越受到重视,工程菌在含有葡萄糖的培养基发酵过程中,往往有乙酸产生。乙酸的产量与比生长速率有关,乙酸的存在对工程菌的生长及表达物有影响。本文采用了RP-HPLC法,选用简便的样品预处理方法,测定了温度诱导型IL-2工程菌发酵液中的乙酸量,得到了较好的分离效果。发现该菌在培养过程中确有乙酸积累,并在升温诱导后乙酸量急剧增加。 1 材料和方法 1.1
- 冯尔玲吴军于公义
- 关键词：RP-HPLC法工程菌比生长速率乙酸钠丙酮酸
- 丙肝抗原决定簇与CTB的融合、表达及融合蛋白的纯化
- 1994年
- 通过固相化学合成法合成了编码丙型肝炎病毒(HCV)结构区和非结构区的4个抗原决定簇基因,这些抗原决定簇基因片段以不同方式串联后与ctxB基因融合,构建了12种表达不同嵌合蛋白的重组质粒,各重组质粒转化大肠杆菌后均能高效分泌性表达融合蛋白,表达产量在10～50μg/ml之间,随所融合的抗原决定簇不同而不同,表达水平主要与抗原决定簇的氨基酸组成有关,而与抗原决定簇的大小及串联次数关系不大。融合蛋白通过亲和层析纯化,达到了电泳纯,为进一步研究融合蛋白的抗原性及用作抗-HCV ELISA诊断试剂抗原打下了基础。
- 曹诚马清钧于公义石成华李平李杰之张艳红张京生
- 关键词：基因融合抗-HCVELISA丙型肝炎病毒
- 霍乱毒素B亚单位工程菌MM2在含乳酸培养基中的高表达
- 2000年
- 确定了工程菌MM2中霍乱毒素B亚单位(CTB)在含乳酸培养基中的高表达方案。采用两阶段控制培养温度(30℃→37℃)可提高CTB产量4倍,提高后期pH值(72→84)可提高CTB比表达水平214倍,中间补加乙酸钠可提高CTB产量65%。在5L发酵罐培养菌密度OD600达30,CTB产量达1867mg/L,产物在培养液中以多聚体形式存在,具有抗原性。
- 方宏清邓兵兵赵四清于公义马清钧
- 关键词：大肠杆菌霍乱毒素B亚单位温度乳酸
- 重组大肠杆菌高密度培养研究进展被引量：6
- 1996年
- 大肠杆菌是基因工程中常用的宿主菌，许多有价值的多肽和蛋白在大肠杆菌中已成功地进行了表达，表达水平有些高达细胞总蛋白的３０％以上，为了提高单位体积设备产物的产量，除了提高表达水平外，还需提高重组大肠杆菌的培养密度。大肠杆菌高密度培养的早期工作主要是以宿主菌为模型进行研究的，而近年来，重组大肠杆菌高密度高表达的研究已经有了较大进展。本文着重综述了培养基成分、溶氧、比生长速率和代谢副产物乙酸等因素对工程菌生长和表达的影响，及提高菌密度和表达水平的培养方法。
- 吴军于公义
- 关键词：大肠杆菌
- 碳源和IPTG诱导对工程菌MM2表达CTB的影响被引量：1
- 1996年
- 研究了不同碳源如葡萄糖、乳酸和乙酸以及IPTG诱导对工程菌MM2表达霍乱毒素B亚单位(CTB)的影响。在YC培养基中分别加入0.048mol/L的葡萄糖、0.102mol/L的乳酸和0.167mol/L的乙酸,它们在完全氧化后可产生相同的能量。结果表明,加入葡萄糖会大幅度降低ctb基因的表达水平,其原因和培养过程中pH值下降有关;加入乳酸可提高ctb基因表达水平1.15倍,且不抑制菌体生长;加入乙酸可提高ctb基因的表达水平0.9倍,但对菌体生长有抑制作用。不同时间及不同浓度的IPTG诱导未能提高ctb基因的表达水平,说明lac启动子对ctb基因的表达没有影响或影响很小。
- 方宏清赵四清于公义
- 关键词：霍乱毒素碳源大肠杆菌
- r-IL2工程菌透析培养研究
- 1996年
- 为了去除乙酸对rIL-2工程菌生长及基因表达的抑制作用,用医用人工肾作为透析器建立了一套透析培养装置,通过该装置对rIL-2工程菌进行了透析培养的研究,结果表明透析液、pH、透析培养的持续时间段对工程菌的生长及rIL-2的表达有较大影响。通过选择高浓度的无机盐透析液及诱导后期的透析培养方法使菌密度在50 A_(600nm)时rIL-2表达水平仍大于40％。
- 夏晓兵于公义
- 关键词：乙酸
- 霍乱毒素B亚单位工程菌MM2的表达与lac启动子的关系被引量：3
- 1997年
- 研究了不同碳源(葡萄糖、乳酸和乙酸)以及IPTG诱导对工程菌MM2表达霍乱毒素B亚单位(CTB)的影响,ctb基因位于lac启动子的下游。在YC培养基中分别加入0.048mol/L的葡萄糖、0.102mol/L的乳酸和0.167mol/L的乙酸,它们在完全氧化后可产生相同的能量。结果表明,加入葡萄糖会大幅度降低ctb基因的表达水平,其原因和培养过程中pH值下降有关;加入乳酸可提高ctb基因表达水平1.15倍,且不抑制菌体生长;加入乙酸可提高ctb基因的表达水平0.9倍,但对菌体生长有抑制作用。不同时间及不同浓度的IPTG诱导未能提高ctb基因的表达水平,说明lac启动子对ctb基因的表达没有影响或影响很小。
- 方宏清赵四清于公义马清钧
- 关键词：疫苗
- MM3工程菌的大规模发酵培养工艺研究
- 1997年
- 首先在50L发酵罐上研究了MM3工程菌的发酵培养工艺。确定了接种量、搅拌转速、pH和补料速率等参数,活菌数可达每毫升211亿。以溶氧为放大准则可成功地将该工艺在200L国产发酵罐上再现。说明该工艺具有可放大性,可在全国各药厂推广应用。
- 王叙甫方宏清陈明王焕金谢妍阎明凡张群伟冯尔玲于公义
- 关键词：疫苗大肠杆菌发酵
