习静
- 作品数：6 被引量：6H指数：2
- 供职机构：兰州大学基础医学院医学生物化学与分子生物学研究所更多>>
- 发文基金：甘肃省自然科学基金中央高校基本科研业务费专项资金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 早期胃腺癌原代细胞适配子的筛选与鉴定被引量：2
- 2013年
- 胃腺癌是消化道最常见的恶性肿瘤之一,由于没有针对早期胃腺癌有效的诊断方法,目前胃腺癌手术治疗还主要针对中晚期患者,预后差.本文应用cell-SELEX技术,筛选早期胃腺癌原代细胞的适配子,为早期胃腺癌的诊断提供新的思路.从早期胃腺癌组织中分离得到早期胃腺癌原代细胞,应用体外合成全长88 bp中间含52 bp随机序列的单链DNA文库,通过对PCR扩增条件的优化,借助生物素-链霉亲和素磁珠系统,经cell-SELEX反复筛选,可获得针对早期胃腺癌原代细胞的特异性适配子.经12轮cell-SELEX筛选,ssDNA文库与早期胃腺癌原代细胞的亲和力由1 560上升到4 336,表明亲和力较高的适配子得到逐步富集.经克隆和测序,应用软件分析可知,30个克隆子中编号为C17和C27的2个序列完全一致,具同源性,二级结构预测可知单链DNA形成不同的茎环结构可能是适配子与早期胃腺癌原代细胞作用的结构基础.特异性分析显示,胃腺癌原代细胞组与正常胃粘膜上皮细胞、空白对照组之间荧光强度值差异非常显著(P<0.01);正常胃粘膜上皮细胞组与空白对照组之间差异不显著(P>0.05).经亲和力测定,各适配子与早期胃腺癌原代细胞的解离系数达到nmol/L,具有很高的亲和力.利用cell-SELEX技术成功筛选到早期胃腺癌原代细胞的适配子,为胃腺癌的早期诊断与治疗药物靶点方面的研究奠定了实验基础.
- 郭鹏习静张雪燕姚海燕马驰马鑫杨敏冯慧婷侯纯荣徐先云韩跃武
- 关键词：胃肿瘤腺癌适配子
- 慢性粒细胞白血病ssDNA适配子检测条件的优化及检测方法的评价研究
- 目的对前期建立利用K562细胞ssDNA适配子检测方法条件的优化及评价研究,该方法对临床慢性粒细胞白血病的诊断应用价值。 方法以合成的核苷酸适配子为模板并设计引物根据引物的Tm值,设置不同的退火温度,循环次数及引物浓度等...
- 习静
- 关键词：敏感性
- 慢性粒细胞白血病ssDNA适配子PCR扩增条件的优化
- 2013年
- 目的优化慢性粒细胞白血病(Chronic myelogenous leukemia,CML)ssDNA适配子的PCR扩增条件。方法以合成的核苷酸适配子为模板并设计引物,根据引物解链温度(Tm值)设置不同的退火温度(38.0、39.2、41.2、44.2、48.3、51.5、53.6、55.0℃)、循环次数(12、16、20、24、28、30、35、38、40)及非限制性与限制性引物比例(1∶1、30∶1、50∶1、70∶1、80∶1、100∶1),进行PCR扩增,优化CML ssDNA适配子对称PCR及间接不对称PCR扩增条件,并验证优化的PCR条件的重复性。结果对称PCR扩增的最佳退火温度为44.2℃,最佳循环次数为30次;间接不对称PCR的最佳循环次数为38次,非限制性引物与限制性引物浓度比例为50∶1时,可获得理想的ssDNA和较少的dsDNA;优化的PCR条件重复性较好。结论优化了CML ssDNA适配子的PCR扩增条件,为筛选到特异性的ssDNA适配子提供了参考,也为后续试验奠定了基础。
- 习静郭鹏韩跃武刘文伟张雪燕
- 关键词：慢性粒细胞白血病聚合酶链反应
- 诊断慢性粒细胞白血病的电化学生物传感器的研究被引量：2
- 2012年
- 目的建立一种检测慢性粒细胞白血病的方法。方法此实验在已经筛选出慢性粒细胞白血病(CML)K562细胞5个特异性、结合率较高的核酸适体的基础上,构建了一种检测方法:采用两种纳米金属材料分别标记5个适体,将标记后的10个适体,两两组合与CML K562同时结合,一个作为捕获分子,一个作为测定分子与CML K562结合后,经氧化还原反应将测定分子上的金属转化成离子状态,利用电化学工作站检测对应的电流。结果筛选出了最佳组合(P2-S3-P1-S5)实现对CML K562的检测,得到了检测细胞数目与DPV电流值的拟合曲线方程。结论得到一种检测下限可达到50个细胞的诊断慢性粒细胞白血病的电化学生物传感器。
- 刘文伟张雪燕习静韩跃武
- 关键词：核酸适体纳米材料电化学生物传感器
- K562细胞ssDNA适配子检测方法对慢性粒细胞白血病诊断价值的研究被引量：2
- 2014年
- 目的评价K562细胞ssDNA适配子检测方法(简称适配子检测法)对慢性粒细胞白血病(CML)的临床诊断价值。方法采集18例CML患者、22例其他白血病患者、20名健康体检者(正常对照组)的血液标本各5 mL,分离粒细胞,用建立的适配子检测法检测荧光强度,绘制受试者工作特征(ROC)曲线。结果 CML组荧光强度为492.26±41.67,与其它白血病组(466.86±33.23)及正常对照组(469.33±37.13)比较,差异无统计学意义(P值分别为0.078、0.243);其它白血病组和正常对照组比较,差异亦无统计学意义(P=0.835)。适配子检测法诊断CML的ROC曲线下面积为0.702,最佳阳性临界值为475.13,灵敏度为83.33%、特异性为54.76%、阳性预测值为44.11%、阴性预测值为88.46%。结论适配子检测法对CML的诊断具有较低的准确性,实际应用还有一定的局限性。
- 查成喜邢福军张雪燕郭鹏习静韩跃武
- 关键词：慢性粒细胞白血病
- 慢性粒细胞白血病ssDNA适配子检测方法的评价
- 2013年
- 目的评价慢性粒细胞白血病(chronic myeloid leukemia,CML)ssDNA适配子检测方法的临床诊断应用价值。方法基于前期构建的方法,用ssDNA适配子与K562细胞及临床CML标本结合进行检测,在优化的检测条件下,以美国临床实验室标准化组织(Clinical and Laboratory Standard Institude,CLSL)的相关标准为依据,对该方法进行方法学评价,并对方法进行临床诊断性能的评价。结果建立的方法回归方程为:y=1 476.4+495.31 x,r2=0.976 6,拟合度较高;该方法敏感性较高,特异性较强,检测高、中、低浓度的K562细胞的批内变异系数均小于5%,日间变异系数均大于5%;该方法测得的不同浓度CML标本的总平均回收率为78.7%;测得的溶血、黄疸及血脂标本的平均干扰率均>10.0%;ROC曲线下面积为0.867,ssDNA适配子检测CML组、非慢粒类型白血病组、健康对照组标本的敏感度为75%,特异度为77%,阳性似然比为3.26,阴性似然比为0.32,漏诊率为25%,可靠度为0.306,可用度为0.52。结论 CML ssDNA适配子检测方法本身灵敏度高,检测阈值低,特异性强;在临床诊断性能研究中,该方法特异性高,但敏感性较低,具有一定的临床诊断价值。但该方法抗干扰能力弱,重复性较差,且可靠度<0.5,其临床应用还有一定的局限性。
- 习静徐攀郭鹏韩跃武陈雪丽张萍王瑞玲袁琳陈丹马驰
- 关键词：慢性粒细胞白血病
