黄晓东
- 作品数：4 被引量：9H指数：3
- 供职机构：中国药科大学生命科学与技术学院更多>>
- 发文基金：国家教育部博士点基金国家自然科学基金教育部科学技术研究重点项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 一种新的鲨鱼肝刺激多肽(sHSP)刺激肝细胞增殖和保护受损β细胞作用(英文)被引量：3
- 2007年
- 目的:从鲨鱼肝脏中分离纯化得到了一种鲨鱼肝刺激多肽(sHSP)。方法:将天然健康的条纹斑竹鲨鱼肝脏经过粗提,超滤,柱层析得到sHSP。通过采用MTT法,利用人肝癌SMMC-7721细胞和STZ损伤的小鼠胰岛β细胞瘤细胞来检测其生物活性。结果:通过MALDI-TOF-MS检测,sHSP的分子量为4 899 .715 Da ,其紫外特征吸收波长为273.1 nm。通过MTT法检测sHSP的刺激肝细胞再生的生物活性,结果显示,sHSP剂量为100μg.mL-1时,刺激指数为3.85 ,并且具有热稳定性和耐酸碱性。对STZ损伤的NIT-1β细胞,sHSP具有保护细胞完整性和修复细胞形态的作用。结论:我们从鲨鱼肝脏中分离纯化得到了一种能够显著刺激人肝癌细胞SMMC-7721再生,并且可以部分对抗STZ导致的NIT-1β细胞毒性损伤的活性肽。
- 宋丽娜黄晓东雷红李谦欧瑜黄凤杰吴梧桐
- 关键词：纯化MTT法
- 重组水蛭素Ⅲ的中试工艺研究被引量：4
- 2007年
- 从大肠杆菌中大规模纯化重组水蛭素Ⅲ,进行重组水蛭素Ⅲ中试发酵工艺和纯化中试工艺研究,连续大量纯化3批,并对纯化终产品进行鉴定。通过菌种活化,一级、二级种子液制备,30L发酵罐补料-批式发酵水蛭素产量达到6000ATU/ml,发酵液经还原性SDS-PAGE分析表明在14000u处有单一条带,为重组水蛭素Ⅲ二聚体。经大孔树脂层析、DEAE-纤维素层析、制备型反相高效液相层析等3步纯化后重组水蛭素Ⅲ的比活达8270ATU/mg。经分析型反相高效液相色谱分析,纯度达95%以上,总收率达到39%以上。通过实验建立了稳定的发酵和纯化工艺流程。
- 陆霞黄晓东汤沛霈欧瑜吴梧桐
- 关键词：发酵纯化中试工艺
- HPLC-ESI-ITMS在药品质量控制中确证胰岛素和胰岛素B链C端氨基酸序列的应用研究
- 2007年
- 在药品质量控制中应用HPLC-ESI-IT(Ion Trap)MS分别确证胰岛素和胰岛素B链的C端氨基酸序列。取胰岛素标准品溶液或者胰岛素B链溶液适量,加入羧肽酶P及羧肽酶Y溶液适量降解胰岛素或者胰岛素B链C端,在预定的时间点取出酶降解反应液适量,加入等体积1%甲酸停止反应,混旋均匀后制成供试液,供HPLC-ESI-ITMS分析测定。采用Zorbax Prosphere C18柱(2.1 mm×150 mm,300A,5μm)分离,以流动相进行梯度洗脱[A相:水-乙腈-三氟乙酸(98∶2∶0.02),B相:乙腈-水-三氟乙酸(98∶2∶0.02)]。柱后修饰“TFAfix”溶液为丙酸-异丙醇(2∶8)的混合溶液。ESI-ITMS测定供试液中梯度多肽系列(彼此相差1个C端氨基酸残基)的分子质量,计算出分子质量最相近的相邻两肽段的系列分子质量差值,即可得到待测样品C端系列氨基酸残基质量的实验值。胰岛素的B链C端的第1个氨基酸残基丙氨酸残基可以被准确地确证;同样还原修饰的胰岛素B链C端的第1个氨基酸残基丙氨酸残基也能被准确地确证。本研究在nmol样品水平准确地确证胰岛素和胰岛素B链各一个C端氨基酸,符合重组DNA制品中试产品的质量控制要求。本实验方法不必将胰岛素经还原修饰将A链从B链裂解,直接确证胰岛素的C端氨基酸残基,避免还原修饰和纯化的烦琐操作,方法简便。
- 黄晓东樊夏雷吴梧桐李忠红
- 关键词：胰岛素
- 重组水蛭素Ⅲ口服制剂给药系统的初步研究被引量：3
- 2007年
- 目的探讨重组水蛭素Ⅲ(以下简称rHV3)的口服制剂。方法采用在体原位肠袢法研究小肠和结肠在吸收促进剂作用下对rHV3的吸收情况,寻找促进rHV3肠道吸收的吸收促进剂和吸收位置;合成蛋白酶抑制剂——壳聚糖-EDTA轭合物(chitosan-EDTAconjugates,CEC),考察rHV3在胃蛋白酶和胰蛋白酶中的稳定性;将rHV3和促吸收剂、CEC乳化,考察其抗凝血作用。结果吸收促进剂能提高rHV3在肠道内的吸收水平,其中在0.5%EDTA-Na2的作用下rHV3经由小肠给药产生的抗凝血作用最强;CEC在消化酶的存在下对rHV3有保护作用;乳化微粒与单用rHV3的抗凝血作用有显著性差异。结论重组水蛭素Ⅲ和促吸收剂以及CEC形成的乳化微粒经灌胃能够发挥其抗凝血作用。
- 崔莉欧瑜袁瑞瑛黄晓东吴梧桐
- 关键词：促吸收剂酶抑制剂乳化
