黄夏宁
- 作品数：10 被引量：23H指数：2
- 供职机构：华中科技大学同济医学院公共卫生学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金广州市科技计划项目广东出入境检验检疫局科技计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学理学更多>>
- 微囊藻毒素-RR的纯化及鉴定被引量：2
- 2013年
- 将固相萃取和凝胶色谱技术相结合,建立了以野外采集的水华蓝藻为原料提取和纯化微囊藻毒素-RR(MC-RR)的有效方法。用70%的甲醇溶液溶解35 g藻浆,经离心等系列处理,得粗提液,旋转蒸发去除甲醇;粗提液经HLB柱固相萃取后,得到7.5 mL洗脱液,然后将其浓缩至2 mL,再用Sephadex LH-20凝胶色谱柱分离纯化,洗脱液分管收集,用紫外分光光度计测定每管洗脱液在238 nm的吸收值,并绘制洗脱曲线。使用高效液相色谱对峰值组分进行鉴定,同时利用紫外分光光度计对毒素的光谱特征进行鉴定。最终获得3.65 mg纯度超过90%的MC-RR样品,产品得率为74.1%。其紫外吸收光谱在238 nm处有特征吸收,证明所纯化的样品为MC-RR。
- 张永路黄夏宁肖雯晴钟晴谷康定
- 关键词：固相萃取凝胶色谱纯化
- 水中微量藻类毒素免疫亲和层析法分离
- 2012年
- 微囊藻毒素-LR（microcystin-LR,MC-LR）是淡水水华过程中由某些种系蓝藻产生的一类天然毒素,其毒性作用表现为肝脏毒性和肿瘤促进作用等,对人体健康危害极大。中国颁布执行的GB5749-2006《生活饮用水卫生标准》规定了水中MC-LR的限值为0.001 mg/L。目前,水中MC-LR常用检测方法有ELISA方法和高效液相色谱法。
- 明小燕黄夏宁刘诚彭小雪谷康定
- 关键词：微囊藻毒素-LR
- 武汉市区主要湖泊微囊藻毒素-LR污染现状调查被引量：6
- 2011年
- 目的了解武汉市区主要湖泊水中微囊藻毒素的污染状况及随时间变化的规律。方法于2008年6—10月及2009年4、5月,对武汉市内南湖、东湖、沙湖、北湖、菱角湖、中山湖、莲花湖、墨水湖、月湖9个主要湖泊11个采样点(东湖设3个采样点)进行水样的采集。水样经过滤、反复冻融等处理,分离细胞内和游离藻毒素。通过反相C18柱吸附浓缩样品中游离藻毒素,采用间接竞争ELISA法检测水样中藻毒素浓度。结果湖水中游离藻毒素浓度大多从6月起逐渐升高,到8—10月可达顶峰,最高可达0.121 2 ng/ml,但均未超标;细胞内藻毒素浓度为0.239 8～16.726 7 ng/ml,大多在7、8月较高,而9月稍低,4、5月最低。结论武汉市主要湖泊水样中游离藻毒素浓度普遍在8月达到最高,可能由于藻细胞开始大量死亡崩解而释放出过量游离藻毒素所致。
- 刘诚彭小雪明小艳黄夏宁谷康定
- 关键词：湖泊微囊藻毒素
- 微囊藻毒素-LR对小鼠单核细胞和淋巴细胞的影响
- 2013年
- 目的探讨微囊藻毒素-LR（MC—LR）对小鼠血液中单核细胞和淋巴细胞的影响及毒性效应，筛查血液中早期灵敏效应指标。方法1月龄SPF级雄性昆明小鼠按体重采用随机数字表法分为5组，每组7只，分别分为对照组、低剂量组、中低剂量组、中高剂量组、高剂量组，每天给予1次腹腔注射染毒，分别给予生理盐水及3．125、6．250、12．500、25．000μ一、kg剂量的MC—LR。染毒7d后采用放射免疫方法检测重要相关细胞因子，KCl-SDS沉淀法检测淋巴细胞DNA-蛋白质交联（DNAprotein crosslinks，DPC）情况，流式细胞仪检测单核细胞吞噬功能及单核细胞和淋巴细胞的活性氧变化（reactive oxygen species，ROS），并分析其变化情况。结果中低、中高和高剂量MC—LR染毒组小鼠白细胞介素-6[分别为（346．837±25．536）、（360．847±37．886）、（434．245±35．858）pg／ml]均高于对照组[（232．775±32．816）pg／ml]（t值分别为-7．258、-6．760、-10．966，P值均〈0．05）；高剂量组肿瘤坏死因子-d含量[（10．782±0．966）fmol／ml]低于对照组[（16．878±3．378）fmol／m1]（t=4．591，P〈0．05）。中低和高剂量组淋巴细胞DPCI分别为（242．576±7．545）、（241．472±2．793）ng／ml]高于对照组[（228．657±4．130）ng／ml]（t值分别为-4．282、-6．801，P值均〈0．05）；低、中低、中高和高剂量组淋巴细胞DCF荧光强度（依次为3299．37±120．54、3281．38±58．34、3308．06±136．12、3346．92±108．69）均低于对照组（3770．81±131．39）（t值分别为6．995、9．007、6．472、6．577，P值均〈0．05）。低、中低、中高和高剂量单核细胞DCF荧光强度（依次为3271．51±140．79、3270．05±117．92、3326．90±114．39、3292．49±145．97）均低于对照组（3841．72±130．92）（t值分别为7．847、8．584、7．835、7．411，P值均〈0．05）。其他检测指标未见明�
- 黄夏宁张永路叶晓艳肖雯晴钟晴谷康定
- 关键词：小鼠单核细胞淋巴细胞
- 曲酸诱导CHO-K1细胞凋亡的研究被引量：1
- 2010年
- 目的研究曲酸诱导细胞凋亡的作用。方法采用0、500、1000、1500、2000、2500μg/ml的曲酸染毒CHO-K1细胞,每种浓度条件下分别培养细胞24、48、72、96h,采用流式细胞仪检测细胞凋亡情况。结果流式细胞仪检测结果显示,细胞培养24、48h,未呈现明显的细胞凋亡现象;细胞培养72h,细胞凋亡也非常微弱,其剂量-效应关系不明显。但细胞培养96h,曲酸剂量与细胞凋亡比例呈现明显的剂量-效应关系,曲酸浓度为0、500、1500、2500μg/ml,凋亡早期的细胞比例分别为0.1%,7.3%,45.4%和62.2%。结论曲酸培养CHO-K1细胞96h呈现明显的诱导细胞凋亡效应,而在染毒早期几乎不呈现诱导效应。
- 陈永红黄夏宁邹志飞谷康定刘慧智
- 关键词：曲酸细胞凋亡
- 微囊藻毒素-RR产毒藻株的分离培养及经口急性毒性研究
- 2014年
- 目的 自天然水体中筛选分离微囊藻毒素-RR（microcystin-RR,MC-RR）产毒藻株并对其培养特征、产毒性质与急性毒性进行初步探讨.方法 采用毛细吸管法从水华样本中分离微囊藻株,经BG11培养基扩大培养,反复分离纯化藻种.用PCR方法筛查微囊藻毒素合成酶基因,再将藻毒素合成酶基因呈阳性的藻株扩大培养,用高效液相色谱（high performance liquid chromatography,HPLC）鉴定其毒素种类及产毒能力;藻细胞起始浓度为1.5×10^5个/ml,光照强度2 000 lx,光暗比12 h∶12 h,（25±1）℃的条件下,监测藻液在680 nm处的吸光度值而测定藻株生长曲线.采用序贯法测定MC-RR对小鼠的经口染毒半数致死量（LD50）,并检测染毒后小鼠的血清酶学、脏器系数及脏器病理改变.结果 接种的198份样品中,分离到5株微囊藻毒素合成酶基因检测呈阳性的微囊藻株,其中一株经高效液相色谱检测鉴定以产MC-RR为主;经形态学与系统发育分类初步确定为铜绿微囊藻,该藻株对数生长期为55 ～60 d,整个生长周期为81 d,藻细胞最大浓度为5.52×10^ 7个/ml.小鼠MC-RR的经口染毒LD50为（12.10±1.35）mg/kg;观测不同作用时间的血清酶学等变化,发现丙氨酸氨基转移酶（ALT）、天冬氨酸氨基转氨酶（AST）、碱性磷酸酶（ALP）、乳酸脱氢酶（LDH）与对照组比较差异具有统计学意义[染毒45 min时小鼠ALT值为（157.08±20.38） U/L,AST值为（333.00±68.53）U/L,ALP值为（392.70±89.59） U/L,LDH值为（1 071.13±160.22） U/L;4 h时ALT值为（514.68±156.87） U/L,AST值为（593.15±40.41） U/L,ALP值为（618.55±208.76） U/L,LDH值为（2 281.72±866.67） U/L;对照组ALT值为（40.30±4.89） U/L,AST值为（142.70±26.59）U/L,ALP值为（56.90±11.89）U/L,LDH值为（509.50 ±94.75） U/L;染毒45 min时各血清酶学变化的t值分别为-11.20、-5.77、-7.38、-6.60,染毒4h时各血清酶学变化的t值分别为-6.04、-20.21、-5.35、-4.07,P�
- 肖雯晴张永路高敏黄夏宁钟晴王卫光谷康定
- 关键词：急性毒性试验
- 饮用水中病毒浓缩与检测方法的建立及应用被引量：1
- 2012年
- 目的建立饮用水中病毒浓缩与检测方法并对实际水样进行人腺病毒污染状况监测。方法以f2噬菌体为水中肠道病毒代表，投加于受试水样中，评价NanoCeram滤芯对原水和饮用水初次浓缩及不同浓度PEG8000对初次浓缩液进行二次浓缩的效果。采用T以克隆制备人腺病毒荧光定量PCR标准品，对所得质粒测序，应用Blast序列类似性检索工具将其与目的基因片段进行一致性检测，建立荧光定量PCR检测人腺病毒的方法。应用上述方法，于2011年对武汉两家自来水厂原水和饮用水采用NanoCeram滤芯进行现场初次浓缩，聚乙二醇（PEG）／NaCl法进行二次浓缩，提取浓缩液中病毒DNA后进行荧光定量PCR检测，监测原水和饮水中人腺病毒污染状况。结果所建立的NanoCeram滤芯初次浓缩法对原水中的f2噬菌体回收率为（51．63±26．60）％，对饮用水中的￡噬菌体回收率为（50．27±14．35）％。当PEG8000浓度达到0．13kg／L时，二次浓缩回收率可达（90．09±10．50）％。所构建的人腺病毒荧光定量PCR标准品与目的基因片段序列一致度为99％，可用于人腺病毒的绝对定量。2011年，武汉市两家自来水厂原水中的人腺病毒浓度范围为（4．13×103～2．20×103）拷贝／L，出厂水中的人腺病毒浓度范围为（5．57×10。～7．52×105）拷贝／L，饮用水处理过程对人腺病毒的清除率为（75．49±11．71）％。结论NanoCeram滤芯联合PEG／NaCl法可对水环境中病毒进行有效浓缩，应用所建立的荧光定量PCR法检测发现自来水厂原水中存在人腺病毒，目前的水处理措施不能将其完全去除。
- 叶晓艳肖雯晴黄夏宁张永路曹玉广谷康定
- 关键词：饮水腺病毒科环境监测聚合酶链反应
- 曲酸遗传毒性的研究被引量：12
- 2011年
- 目的:研究曲酸遗传毒性及有关作用机制。方法:采用小鼠骨髓细胞微核实验检测染色体损伤。用不同质量浓度曲酸(0、500、1000、1500、2000、2500μg/mL)诱导CHO-K1细胞,单细胞凝胶电泳实验检测CHO-K1细胞DNA损伤。结果:1/2LD50、1/4LD50和1/8LD50不同剂量曲酸诱导昆明小鼠微核实验结果显示,各质量浓度受试组与阴性对照组差别无显著性。单细胞凝胶电泳结果显示:曲酸作用质量浓度为1000μg/mL,作用时间为6h时,即出现轻微DNA损伤;当曲酸作用质量浓度增大到2500μg/mL时,出现明显的DNA损伤。在24h内,或其他同一作用时间段,随着曲酸作用质量浓度增加,DNA损伤也呈增加趋势。实验未发现有明显的时间-效应关系。结论:体内小鼠骨髓细胞微核实验未观察到曲酸明显的遗传毒性,但体外实验高质量浓度曲酸在一定时间可导致DNA损伤。
- 陈永红黄夏宁邹志飞谷康定王岚刘慧智
- 关键词：曲酸微核实验单细胞凝胶电泳
- 微囊藻毒素-LR暴露标志物及凋亡效应的研究
- 第一部分微囊藻毒素-LR暴露生物标志物的研究
目的：通过检测动物血液和组织中微囊藻毒素-LR单体及复合物，结合筛查血液细胞可能发生的形态、功能和分子生物学的变化及血液生化指标改变，初步确立能够反映机体暴露藻类毒素...
- 黄夏宁
- 关键词：微囊藻毒素-LR动物实验流式细胞术高效液相色谱-质谱联用微囊藻毒素-LR荧光定量PCR
- 文献传递
- 曲酸对Vero及CHO-K1细胞毒性作用被引量：1
- 2010年
- 目的探讨曲酸对传代细胞的毒性效应。方法用不同浓度曲酸染毒Vero及CHO-K1传代细胞株,采用噻唑蓝MTT显色法于不同染毒时间终点观察细胞毒性变化。结果细胞与受试物接触24 h之内,曲酸浓度<750μg/mL,Vero细胞株对曲酸反应与阴性对照无明显差异,但随着剂量加大,毒性反应逐渐增强;随着作用时间延长,曲酸对细胞的毒性不断加大,细胞培养48 h,曲酸半数抑制效应(IE50)为2 000μg/mL;细胞培养>72 h,曲酸IE50≤500μg/mL;改变起始染毒方式,对细胞毒性效应无明显影响;CHO-K1细胞株经>1 000μg/mL曲酸染毒后,培养24 h,出现轻微抑制现象;培养48h,细胞毒性作用明显,培养72,96 h毒性反应最强烈。结论曲酸对受试细胞株具有明显毒性作用,且有明显剂量-效应和时间-效应关系。
- 陈永红邹志飞黄夏宁谷康定王岚刘慧智
- 关键词：曲酸毒性作用
