马小倩
- 作品数：12 被引量：23H指数：3
- 供职机构：中南大学湘雅三医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金湖南省自然科学基金湖南省科技重大专项更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 新生猪胰岛保存运输的实验研究被引量：1
- 2012年
- 探索新生猪胰岛较长时间有效保存运输的方法,使不同胰岛应用单位间分享胰岛资源成为可能.用胶原酶消化、分离得到新生猪胰岛,培养5 d后收集,将所得胰岛置于自行设计制作的保存运输系统内,分别于置入后2、4、5、7 h,分次取出胰岛进行双硫腙(DTZ)染色、吖啶橙荧光染色、体外葡萄糖刺激胰岛素分泌实验,确定胰岛细胞的功能和活性,并使用流式细胞仪检测凋亡情况.使用本研究的保存运输方法,在5 h以内,胰岛的功能和活性无明显受损,超过5 h,胰岛明显凋亡,功能、活性显著降低.在脱离培养箱环境情况下,本方法5 h内可以有效保存胰岛.
- 叶斌董琼马小倩聂唯
- 关键词：胰岛活性
- 人脐带间充质干细胞条件培养基对缺氧胰岛的保护作用
- 2018年
- 为了探讨人脐带间充质干细胞(human umbilical cord-derived mesenchymal stem cells, hUC-MSCs)通过旁分泌作用对缺氧胰岛的保护,将新生猪胰岛细胞团(neonatal porcine islet cell clusters, NICCs)分别用人脐带间充质干细胞条件培养基(human umbilical cord-derived MSC-conditioned medium, hu-MSC-CM)及常规RPMI1640培养基(对照组)置于20%O_2和1%O_2的环境中培养。通过荧光激活细胞分类器、Seahorse线粒体应激实验检测不同培养基对缺氧NICCs活性、功能的影响,利用Western-blot检测缺氧时NICCs生存相关蛋白质的表达水平。实验结果显示,缺氧时hu-MSC-CM组中NICCs细胞得率、活性及功能较对照组均有明显改善(P<0.05);实验组中缺氧诱导因子1α(hypoxia-inducible factor 1α, HIF-1α)表达上调,凋亡及自噬相关蛋白质表达下降。实验结果表明间充质干细胞通过旁分泌作用能有效提高缺氧胰岛的活力和功能。
- 伍君子马小倩杨策军容鹏飞聂唯王维
- 关键词：缺氧
- TRAF4调控人结直肠癌细胞增殖的机制研究被引量：3
- 2015年
- 目的:研究TRAF4影响结直肠癌细胞增殖的分子机制。方法:MTS和软琼脂集落形成实验检测基因沉默TRAF4后对结直肠癌细胞生长及相关信号通路的影响,检测TRAF4表达下调后结直肠癌细胞的糖酵解变化及己糖激酶II的表达和结直肠细胞对5-Fu的敏感性。结果:基因沉默TRAF4抑制结直肠癌细胞的停泊依赖和停泊非依赖增殖,抑制EGF诱导的Akt活化,下调结直肠癌细胞糖酵解,抑制己糖激酶II的表达,增加结直肠癌细胞对5-Fu的敏感性。结论:TRAF4通过调控糖代谢影响结直肠癌细胞增殖。
- 李伟罗霞马小倩
- 关键词：结直肠癌AKT糖酵解
- 体外扩增后脐血来源Treg细胞的有效性及安全性研究被引量：1
- 2016年
- 通过检测扩增后调节性T细胞(regulatory T cells,Tregs)的有效性和安全性,研究脐血来源的CD4^+CD25^+Foxp3^+Treg细胞的临床运用前景。实验中,新鲜分离的Treg细胞通过CD3/CD28抗体包被微磁珠进行体外扩增,以检测脐血来源Treg细胞的体外增殖能力,同时利用流式细胞术检测新鲜分离的Treg细胞与扩增后细胞的表型。随后,采用混合淋巴实验(mixed lymphocyte reaction,MLR)检测Treg细胞的功能,利用刺激实验检测扩增后Treg细胞的免疫原性,并且利用NOD-Prkdc^(scid)IL2rg^(null)免疫缺陷小鼠进行体内安全性检测。结果显示,4周后脐血来源的Treg细胞能够扩增到1 000倍以上,与新鲜分离的Treg细胞相比,扩增后的细胞CD45RA表达降低,CD45RO和CD39表达升高;同时,MLR结果显示扩增后的Treg细胞具有较强的抑制能力,并且免疫原性低;此外,体内结果显示扩增后的Treg细胞不会引起移植物抗宿主反应。实验结果初步表明,脐血来源体外扩增后的Treg细胞不仅在数量和功能上能够满足临床移植的需要,并且免疫原性低安全性高。
- 马小倩李桑王维
- 关键词：体外扩增
- 超声分子靶向显像体外胰岛移植立即经血液介导的炎症反应
- 2015年
- 目的:探讨采用赖氨酸-甘氨酸-天冬氨酸-丝氨酸(Lys-Gly-Asp-Ser,KGDS)血栓靶向超声造影剂显示体外胰岛移植立即经血液介导的炎症反应(immediately blood-mediated inflammatory reaction,IBMIR)可行性,为无创、实时、动态地研究和评价IBMIR探索一种新的分子影像学方法。方法:7 m L新鲜全血+1 000胰岛当量(islet equivalent quantit y,IEQ)新生猪胰岛体外制作IBMIR模型。实验分为3组,均重复3次:A组对照组,不加造影剂;B组加普通超声造影剂;C组加靶向超声造影剂。将上述各组Loops管道固定于摇床,并浸于37℃的水浴中。采用超声造影模式实时观察Loops管内的回声,记录超声发现血栓出现的时间;并采用Line成像模式存储在硬盘,脱机分析血栓超声增强强度。实验开始后10,30,60 min 3个时间点,经70μm过滤网过滤Loops管内血液,测定过滤液体的凝血系统[凝血酶抗凝血酶复合物(thrombin-antithrombin complex,ATA),D-二聚体(D-dimer)]、补体系统(C3a,C5b-9)及胰岛素含量等指标,过滤网内血块做病理学检测。结果:A组没有加入造影剂,超声不能发现血栓形成;B组、C组加入超声造影剂后超声可以发现血栓,其中B组加入自制普通超声造影剂,血栓在超声图像上显示为周边及内部无增强,呈充盈缺损改变,发现血栓时间为(7.3±0.5)min,相应血栓超声增强强度的灰阶值为31.22±3.56;C组加入靶向超声造影剂,超声清晰显示环状增强的血栓,发现血栓时间为(13.2±0.6)min,其超声增强强度的灰阶值为75.85±5.21。B组、C组血栓灰阶值及发现时间比较差异均有统计学意义(P<0.05)。血液学检测证实各实验组均发生了IBMIR;病理结果显示胰岛与新鲜全血接触后,其表面形成血栓壳,加入带荧光的靶向超声造影剂,荧光显微镜可以清楚观察到胰岛周边呈明亮的荧光光环,与血栓壳位置、形态、范围完全吻合。结论:超声分子影像技术可以靶向显像体外IBMIR,为无
- 高峰梁琪李俊玲董琼马小倩王维
- 关键词：胰岛
- 不同路径肝素对门静脉胰岛移植术后立即经血液介导炎症反应的影响被引量：2
- 2022年
- 目的:临床上肝素主要作为抗凝药物使用,也具有一定的抗炎作用。目前糖尿病患者门静脉胰岛移植术后主要通过四肢的外周静脉而不是门静脉输注肝素,达到抗凝、保护移植物的目的。本研究采用动物实验探讨经门静脉与耳缘静脉输注肝素对门静脉胰岛移植术后立即经血液介导炎症反应(instant blood mediated inflammatory reaction,IBMIR)的影响,为临床胰岛移植手术抗凝方式的选择提供决策依据。方法:选择日龄3~5 d新生猪(Xeno-1型)50只,取出胰腺后分离并提纯胰岛。选择1.5~2.0月龄非糖尿病模型长白猪10只作为受体,外科手术暴露门静脉,将新生猪胰岛(12000 IEQ/kg)通过门静脉移植于长白猪肝脏。移植术前10 min所有受体均团注肝素50 U/kg,团注肝素后实验组通过门静脉输注肝素[10 U/(kg·h),5只]、对照组通过耳缘静脉输注肝素[10 U/(kg·h),5只]。分别于术前、术后1、3及24 h采集两组动物上腔静脉血液,实验组于术后1、3 h采集门静脉血液。检测实验组与对照组术前、术后1、3 h上腔静脉血液补体C3a、C5a、凝血酶-抗凝血酶复合物(thrombin-antithrombin complex,TAT)、β-血小板球蛋白(β-thromboglobulin,β-TG)和D-二聚体(D-dimer)水平,以及活化部分凝血活酶时间(activated partial thromboplastin time,APTT);检测术后1、3 h实验组门静脉、上腔静脉血液抗Xa(anti-Xa)、抗IIa(anti-IIa)水平。术后24 h取两组动物肝组织行病理检查,观察肝内胰岛炎性细胞浸润和周围血栓的形成情况。结果:实验组与对照组术前C3a、C5a、TAT、β-TG、D-dimer水平及APTT的组间差异均无统计学意义(均P>0.05)。术后1、3 h实验组C3a、TAT及D-Dimer水平均低于对照组,术后3 h实验组C5a低于对照组(均P<0.05)。术后1、3 h实验组门静脉血液anti-Xa、anti-IIa水平均高于上腔静脉(均P<0.05)。病理结果显示肝血管内存在胰岛细胞团。实验组胰岛周围少量血栓形成、少量中
- 张声旺颜海雄马小倩郑薇王维
- 关键词：胰岛门静脉肝素
- CTLA4在T调节细胞诱导异种抗原免疫耐受中的机制研究被引量：4
- 2016年
- 目的:通过靶向CTLA4 siRNA探讨CTLA4在T调节细胞诱导异种抗原免疫耐受中是否发挥功能及其作用机制。方法:体外扩增培养利用磁珠分选出的T调节细胞,AO/PI染色计算活率并通过细胞计数作出生长曲线,流式细胞仪检测扩增后细胞表型;采用Alex488染料标记siRNA,通过流式细胞仪检测siRNA的转染效率;实时定量PCR检测靶向CTLA4 siRNA的沉默效率;流式细胞术检测CTLA4在蛋白水平的变化;混合淋巴实验检测CTLA4表达下调后,T调节细胞的功能变化。结果:经过4周体外扩增,T调节细胞能够增长约1 200倍,并具有高活率和高纯度;siRNA的转染效率为61.8%±4.5%;Realtime PCR和流式细胞术检测CTLA4在mRNA水平和蛋白水平均有不同程度下降,其结果与对照组相比差异显著(P<0.05);混合淋巴实验结果显示T效应细胞在受到异种抗原刺激时会发生增殖,Treg细胞能够抑制这种增殖,但是CTLA4表达下调后明显减弱了T调节细胞的抑制能力。进一步,在DC细胞参与的混合淋巴实验中发现Treg能够通过DC抑制T效应细胞对异种抗原的应答,而si CTLA4-Treg不能通过DC抑制T效应细胞增殖。结论:CTLA4在Treg介导的异种免疫应答中发挥着重要作用,这种作用方式可能是通过直接作用于T效应细胞或者间接通过DC细胞作用于T效应细胞发挥作用。靶向CTLA4 siRNA能够下调Treg细胞CTLA4的表达,影响Treg细胞抑制异种抗原引起T效应细胞应答的能力。
- 马小倩王佳王维
- 关键词：细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4小分子RNA异种抗原
- 白藜芦醇对胰腺癌细胞增殖和凋亡影响的研究被引量：4
- 2015年
- 为了研究白藜芦醇对人胰腺癌细胞增殖和存活的影响,利用不同浓度白藜芦醇处理PANC-1和Bx PC-3细胞,通过MTS和软琼脂集落实验检测白藜芦醇对胰腺癌细胞的停泊依赖和停泊非依赖增殖的抑制。同时,采用免疫印迹的方法,检测不同浓度白藜芦醇对胰腺癌细胞增殖相关信号通路的调控,及不同时间点凋亡激活相关蛋白分子的表达。结果发现白藜芦醇能剂量依赖性抑制PANC-1和Bx PC-3细胞增殖,并且这种增殖抑制作用与表皮生长因子受体(epithelial growth factor receptor,EGFR)及下游信号通路的抑制有关。一定浓度的白藜芦醇能诱导胰腺癌细胞发生凋亡,caspase3和caspase7被剪切活化。通过检测Bcl-2(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)促存活家族蛋白,证实白藜芦醇能有效抑制Mcl-1(myeloid cell leukemia-1,Mcl-1)的表达,并不改变Bcl-2和Bcl-XL的表达。实验结果初步表明,白藜芦醇抑制胰腺癌的增殖与存活与EGFR信号通路及促存活蛋白Mcl-1的表达下调有关。
- 李伟罗霞马小倩
- 关键词：胰腺癌白藜芦醇MCL-1
- 人类间充质干细胞来源的外泌体对猪胰岛抗缺氧能力的影响被引量：2
- 2018年
- 目的探讨来自人类脐带源间充质干细胞条件培养基(human umbilical cord-derived MSCconditioned medium,Hu-MSC-CM)中的外泌体能否增加新生猪胰岛细胞(neonatal porcine islet cell clusters,NICCs)在缺氧环境下的生存和功能。方法 NICCs在低氧条件下(1%O_2)分别用含外泌体的条件培养基、去除外泌体的条件培养基和常规培养基进行培养。荧光激活细胞分选仪和细胞外通量测定法分别检测外泌体对细胞活性和功能的影响,实时定量PCR检测NICCs中缺氧耐受相关基因HIF-1α、PDH2及VEGF的表达。结果与常规培养基组和去除外泌体的条件培养基组相比,含外泌体的条件培养基组培养的NICCs其存活率、活性和功能均有所提高[IEQ:7 800±210比5 894±188、4 740±273,P <0.001;β细胞存活率(%):77.2±7.0比68.8±1.8、61.5±5.1,P <0.05]。含外泌体的条件培养基组孵育的NICCs细胞中HIF-1α、PDH2及VEGF基因表达均显著高于另外两组。结论人类脐带源MSC-条件培养基可以减轻NICCs在缺氧过程中导致的功能障碍,外泌体在诱导低氧抵抗方面发挥重要作用。
- 聂唯马小倩马小倩杨策军容鹏飞杨策军
- 关键词：间充质干细胞低氧活性
- 经肝动脉及经门静脉异种胰岛移植治疗1型糖尿病恒河猴被引量：4
- 2012年
- 背景:经门静脉及经肝动脉是胰岛移植治疗1型糖尿病的2种途径,经门静脉途径并发症较多,经肝动脉移植创伤小,并发症少,但缺乏深入研究。目的:对经肝动脉及经门静脉异种胰岛移植治疗糖尿病恒河猴模型的疗效进行比较。方法:将18只恒河猴糖尿病模型分成经肝动脉组(n=6)、经门静脉组(n=9)及对照组(n=3)。经肝动脉组采用Seidinger技术肝动脉插管经导管植入处理好的新生猪胰岛(50000胰岛当量/kg);经门静脉组在超声引导下门静脉穿刺经导管植入处理好的新生猪胰岛(50000胰岛当量/kg);对照组2只经门静脉穿刺注入门静脉组等量生理盐水,1只经肝动脉注入肝动脉组等量生理盐水。各组均使用相同免疫抑制方案。结果与结论:肝动脉组及门静脉组外源性胰岛素的用量较移植前分别平均减少约59.53%,48.39%,2组间外源性胰岛素减少的百分比差异无显著性意义(P>0.05);肝动脉组及门静脉组血清猴C-肽一直保持在较低的水平,而血清猪C-肽的水平逐渐升高,2组之间血清猪C-肽浓度差异无显著性意义(P>0.05),但门静脉组因移植后不同并发症出现4/9只糖尿病猴死亡,而肝动脉组仅因穿刺点渗血死亡1只,提示经肝动脉肝内移植途径操作较经门静脉途径更安全、简便,并发症及不良反应小,移植物均能长期成活并发挥生理功能。
- 叶斌廖坚聂唯梁琪董琼马小倩王维刘晟
- 关键词：胰岛移植门静脉肝动脉C-肽恒河猴
