韩静
- 作品数：24 被引量：55H指数：4
- 供职机构：第三军医大学新桥医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划重庆市科技攻关计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 人卵巢癌微血管内皮细胞对PDGF-BB刺激的反应被引量：1
- 2007年
- 目的:探讨人卵巢癌微血管内皮细胞与HUVEC在生物学特性及对血管生成因子刺激反应的差异。方法:分离纯化人卵巢癌微血管内皮细胞,以HUVEC为对照,用PDGF-BB刺激两种内皮细胞,利用免疫细胞化学和RT-PCR技术观察刺激后两种内皮细胞增殖、PCNA及VEGF表达的变化。结果:PDGF-BB(20ng/ml)能促进两种内皮细胞的增殖、PCNA和VEGF的表达,人卵巢癌微血管内皮细胞增殖和PCNA表达增强的幅度弱于HUVEC;而VEGF蛋白及mRNA表达增强的幅度高于HUVEC(P<0.05)。结论:人卵巢癌微血管内皮细胞与HUVEC对PDGF-BB刺激的反应有显著差异,为深入研究卵巢癌血管生成机制和抗血管生成治疗提供了实验模型。
- 杨鹰阎萍韩静连艳
- 关键词：卵巢癌血管内皮细胞细胞培养血小板源性生长因子
- 基于分子信标技术对活细胞内miR-155检测用于肺癌诊断被引量：2
- 2016年
- 目的探讨激光共聚焦检测miR-155 MB对肺癌活细胞中miR-155的识别成像功能。方法设计锁核酸修饰的miR-155分子信标(MB),同时设计不和任何序列结合的随机序列分子信标(RS MB)作为阴性对照;采用液相分子杂交试验验证其灵敏性和特异性,并进一步在肺肿瘤组织水平上验证。以纳米壳聚糖(CS)作为载体转染miR-155 MB,检测miR-155 MB对肺癌细胞中miR-155识别成像功能;同时采用miR-155抑制剂antagomir抑制miR-155的表达后检测miR-155 MB对肺癌细胞中miR-155的识别成像功能。结果液相分子杂交实验中miR-155+miR-155 MB组荧光强度为miR-155 MB组的58倍,RS+RS MB组荧光强度为RS MB组的43倍(P<0.05)。在肺鳞癌、腺癌组织中,激光共聚焦可检测到较强的荧光信号,阴性对照组未检测到明显荧光信号。纳米壳聚糖转染miR-155 MB后,可在肺癌活细胞中检测到较强的荧光信号,antagomir抑制miR-155的表达后,发现荧光信号明显降低(P<0.05)。结论利用分子信标技术可以实现通过识别肺癌活细胞中的miR-155并成像肺癌细胞,从而为发现肺癌细胞并用于肺癌诊断提供了新的理论基础。
- 朱海振郑召鹏江飞龙韩静李雪涛陈光朋李杭陈正堂
- 关键词：分子信标MICRORNA
- 人肺腺癌厄洛替尼耐药细胞PC9/ER的建立及奥曲肽改善耐药机制研究被引量：6
- 2015年
- 目的探讨人肺腺癌耐厄洛替尼细胞系PC9/ER的耐药机制,及奥曲肽(OCT)改善PC9/ER耐药的可能机制。方法采用CCK-8法检测PC9/ER的耐药指数,奥曲肽(OCT)对PC9/ER改善耐药的倍数,Western bolt方法比较PC9、PC9/ER及OCT作用后PC9/ER细胞IGF-1R、p-IGF-1R、Akt、p-Akt的表达。实时荧光定量PCR法检测IGF-1,IGF-1R的mRNA表达量。酶联免疫吸附方法(ELISA)检测OCT作用后IGF-1的表达变化。结果 PC9/ER的耐药指数为10.4。厄洛替尼和OCT对PC9/ER的抑制作用增强,改善倍数为9.62。单独用药OCT可抑制PC9/ER细胞IGF-1,联合用药可抑制PC9/ER细胞IGF-1R、p-IGF-1R、Akt、p-Akt蛋白的表达。结论 OCT可通过抑制IGF-1,进而通过抑制IGF-1R、PI3KAkt信号通路来提高PC9/ER对厄洛替尼的敏感性。
- 江飞龙韩静朱海振陈光朋孙建国陈正堂
- 关键词：肺腺癌奥曲肽厄洛替尼耐药
- YAP1在人肺腺癌细胞厄洛替尼耐药中的作用被引量：4
- 2016年
- 目的探讨Yes相关蛋白1(YAP1)基因在肺腺癌耐厄洛替尼(ER)中的作用及可能机制。方法在PC-9细胞与耐ER PC-9细胞(PC-9/ER)中,实时荧光定量PCR(RT-q PCR)检测YAP1 mRNA表达;Western印迹与间接免疫荧光分别检测YAP1蛋白表达与定位。以YAP1抑制剂维替泊芬(VP)作用PC-9/ER细胞后,比较处理前后YAP1 mRNA和蛋白表达改变、Yap1下游AKT、p-AKT分子表达变化、Cell Counting Kit 8(CCK-8)法计算PC-9/ER耐药指数改变。结果 PC-9/ER耐药指数为99.80±25.81;与PC-9细胞相比较,YAP1 mRNA和YAP1蛋白在PC-9/ER中表达增高;VP抑制效率为(50.96±5.86)%,同时下调了下游AKT、p-AKT蛋白的表达;PC-9/ER细胞的ER半数抑制浓度(IC50)由(11.10±2.72)降低为(1.47±0.32)μmol/L(P=0.024),耐药指数降为原来的1/8。结论 YAP1介导耐ER肺腺癌的作用机制可能是通过PI3K/AKT信号通路,YAP1可能成为肺癌治疗的靶标。
- 王江王旭东赵凤仪韩静孙华科孙建国陈正堂
- 关键词：维替泊芬肺腺癌厄洛替尼耐药靶向治疗
- ABCG2在非小细胞肺癌厄洛替尼耐药中的作用被引量：3
- 2014年
- 目的探讨ABCG2在非小细胞肺癌厄洛替尼耐药中的作用。方法厄洛替尼不同浓度(1、5、25μmol/L)处理A549细胞及其获得性耐厄洛替尼细胞(A549/ER)12、24、48 h后,荧光实时定量PCR观察ABCG2 mRNA表达变化,Western blot检测p-AKT、ABCG2蛋白表达变化。PI3K/AKT通路激活剂(IGF-1)和抑制剂(LY294002)分别作用于A549细胞及A549/ER细胞24 h后,荧光实时定量PCR和Western blot方法分别检测ABCG2 mRNA及p-AKT、ABCG2蛋白表达变化。流式细胞仪检测加入IGF-1和LY294002后ABCG2外排作用。结果与未加入厄洛替尼的A549、A549/ER细胞相比,厄洛替尼(1、5、25μmol/L)作用12、24、48 h后,随着剂量的增加和作用时间的延长,ABCG2的表达与p-AKT水平呈正相关。加入IGF-1 24 h后,A549细胞中ABCG2表达量升高,而加入LY294002的A549/ER细胞,ABCG2表达量下降,并且IGF-1作用24 h后ABCG2外排明显增高。LY294002作用24 h后A549/ER细胞ABCG2外排明显降低。结论 ABCG2经由PI3K/AKT信号通路介导非小细胞肺癌中厄洛潜尼耐药,且阻断PI3K/AKT通路可逆转由ABCG2介导的耐药。
- 张靖马虎韩静李雪涛陈正堂
- 关键词：肺癌厄洛替尼P13KAKTABCG2
- 用于肺癌诊断的靶向奥曲肽修饰的壳聚糖分子信标纳米复合物的制备方法
- 本发明的用于肺癌诊断的靶向生长抑素类似物奥曲肽(OCT)修饰的壳聚糖(CS)分子信标(MB)纳米复合物，通过用自组装法合成壳聚糖分子信标纳米复合物，然后通过化学反应以戊二醛为交联剂合成靶向奥曲肽修饰的壳聚糖miR-155...
- 陈正堂孙建国朱海振姚权安江宏韩静李雪涛朱聪慧江飞龙陈光朋彭丽娜
- 文献传递
- NSCLC EGFR-TKIs获得性耐药:相关进展及我们的初步工作
- 陈正堂江飞龙韩静赵凤仪王江王旭东
- RNA干扰沉默乙酰肝素酶基因对卵巢癌微血管内皮细胞的影响被引量：2
- 2009年
- 目的探讨RNA干扰沉默乙酰肝素酶基因对卵巢癌微血管内皮细胞的影响。方法实验组为乙酰肝素酶siRNA转染组(转染组),实验对照为正常组和siRNA空白转染对照组(空白转染组),观察时间为转染后2、4、6、8d。观察血管内皮细胞乙酰肝素酶siRNA转染效率,用MTT法检测细胞活力,流式细胞仪检测细胞周期变化,免疫荧光、RT-PCR法及WB法检测内皮细胞乙酰肝素酶表达。结果转染组细胞生长受抑制,增殖指数显著下降,乙酰肝素酶mRNA水平和蛋白水平显著下降,细胞凋亡率显著增加。结论RNAi可有效沉默卵巢癌微血管内皮细胞乙酰肝素酶表达,提示RNAi可为卵巢癌治疗提供新的途径。
- 杨鹰阎萍韩静谢荣凯
- 关键词：RNA干扰卵巢癌血管内皮细胞乙酰肝素酶
- Rab25在非小细胞肺癌厄洛替尼获得性耐药中的作用被引量：2
- 2016年
- 目的探讨Rab25在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)厄洛替尼获得性耐药中的作用。方法传代培养PC9及其厄洛替尼耐药PC9/ER细胞,采用CCK-8法检测PC9/ER细胞的耐药指数。应用实时荧光定量PCR(quantitative real-time,q PCR)及Western blot检测对比同等厄洛替尼浓度(0.1、0.2、0.3μmol/L)处理条件下,Rab25在两种细胞中的mRNA及蛋白表达差异,并以免疫荧光法定位Rab25在细胞中的分布。用小干扰RNA(siRab25)转染PC9/ER细胞,并以流式细胞仪及CCK-8法分别检测Rab25敲减后PC9/ER细胞的增殖指数(proliferation index,PI)及厄洛替尼IC50值的变化。结果 PC9/ER细胞的耐药指数是68.82±21.42。相同厄洛替尼浓度处理48 h后,PC9/ER细胞Rab25 mRNA及蛋白水平均高于PC9细胞(P<0.05),增高的Rab25蛋白主要表达于细胞膜。而且PC9/ER细胞Rab25蛋白水平随厄洛替尼处理浓度(0.1、0.2、0.3μmol/L)递增而增高。siRab25在PC9/ER细胞中成功转染后,转染组的厄洛替尼IC50值及PI均明显低于对照组(P<0.05)。结论Rab25在NSCLC厄洛替尼获得性耐药细胞中高表达,起着促进耐药的作用。
- 王旭东王江赵凤仪韩静孙建国陈正堂
- 关键词：RAB25非小细胞肺癌厄洛替尼
- 姜黄素对卵巢癌微血管内皮细胞生长及乙酰肝素酶表达的影响被引量：4
- 2009年
- 目的探讨姜黄素对卵巢癌微血管内皮细胞体外生长及乙酰肝素酶表达的影响。方法体外培养卵巢癌微血管内皮细胞,分为正常对照组和姜黄素组(浓度分别为2、10、50、250μg/ml),观察时间为加入姜黄素共孵育后24、48、72h。MTT法检测细胞增殖抑制率,流式细胞仪检测细胞周期变化,免疫荧光法和RT-PCR法检测内皮细胞乙酰肝素酶表达,生化法检测细胞上清液丙二醛(MDA)含量及乳酸脱氢酶(LDH)活力。结果姜黄素组细胞生长抑制率增加,有显著的剂量依赖效应(P<0.01)。姜黄素组增殖指数显著下降(P<0.01),乙酰肝素酶mRNA水平和蛋白水平显著下降(P<0.01),细胞培养上清液MDA水平及LDH活力显著升高(P<0.01)。结论姜黄素(2～250μg/ml)能显著抑制人卵巢癌微血管内皮细胞增殖活性,降低乙酰肝素酶mRNA转录和蛋白表达。
- 杨鹰谢荣凯阎萍韩静
- 关键词：姜黄素卵巢癌乙酰肝素酶
