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陶妍: 作品数：83 被引量：322H指数：9; 供职机构：上海海洋大学食品学院更多>>; 发文基金：上海市浦江人才计划项目上海市卫生系统百名跨世纪优秀学科带头人培养计划上海市科委国际合作基金更多>>; 相关领域：农业科学生物学轻工技术与工程医药卫生更多>>

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斑点叉尾鮰β-防御素的cDNA克隆及其在毕赤酵母中的表达: 防御素是存在于动植物细胞中的一类富含半胱氨酸的小分子抗菌肽,具有广谱的抗菌活性。本研究从斑点叉尾鮰的皮肤中提取总RNA,经RT-PCR反转录得到斑点叉尾鮰β-防御素（IPBD）的第一股c DNA,并通过巢式PCR获得IP...; 王莎莎陶妍; 关键词：防御素斑点叉尾鮰毕赤酵母; 文献传递

Western斑点印迹法检测致病性副溶血弧菌被引量：1: 2010年; 目的:对副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus,VP)的直接耐热溶血毒素(thermostable direct hemolysin,TDH)进行分离纯化,建立Western斑点印迹法技术检测致病性副溶血弧菌的方法。方法:用直接耐热溶血毒素免疫小鼠得到特异性抗血清,利用棋盘方法确定免疫血清最佳工作浓度,并对致病性与非致病性副溶血弧菌分别进行特异性测定。结果:最佳免疫血清最佳工作浓度为1:3200;检测致病性副溶血弧菌为阳性,非致病性副溶血弧菌属呈阴性。结论:Western斑点印迹法技术可以特异性检测致病性副溶血弧菌,灵敏度高、操作简单,可用肉眼判定结果。; 杨靖亚张建赵勇陶妍陆小凡晁若瑜

斑点叉尾鮰hepcidin抗菌肽在大肠杆菌中的融合表达被引量：1: 2012年; 通过RT-PCR从斑点叉尾鮰肝脏中克隆编码hepcidin原前体肽的基因"pIH"。与参考序列相比,显示两个氨基酸残基的变异。通过对编码hepcidin原前体肽的基因添加EcoR I和HindⅢ酶切位点,选择含"trxA"融合头的pET32a(+)作为表达质粒、E.coliBL21(DE3)作为工程菌,成功构建"pET32a-pIH"原核表达系统。阳性克隆经1 mmol.L-1IPTG诱导、在37℃培养12 h后,表达的"trxA-pIH"融合蛋白70%以上可溶。Tricine-SDS-PAGE分析表明,细胞经超声破碎后的上清通过固化金属离子亲和层析(IMAC)纯化后,可获得高纯度的目的蛋白。; 赵冬梅陶妍; 关键词：斑点叉尾鮰

基于重组毕赤酵母的草鱼C型溶菌酶生物合成及其抑菌活性被引量：1: 2021年; C型溶菌酶(Chicken-type lysozyme)作为草鱼(Ctenopharyngodon idella)内源性免疫系统中的重要蛋白质类免疫因子,能在草鱼抵抗病原微生物侵染的过程中发挥重要作用,亦是开发绿色饲料添加剂或生物类抗菌剂的佳选。本研究通过逆转录PCR(reverse transcription PCR,RT-PCR)克隆草鱼C型溶菌酶的编码基因“CilyC”,再经二次PCR在其5'和3'端添加各种必需位点。将“CilyC”与表达载体“pPICZαA”连接后转入工程菌毕赤酵母(Pichia pastoris)X-33中,获得重组菌株“X-33/pPICZαACilyC”。经含高浓度博莱霉素的培养基筛选得到高拷贝重组菌株后,对其最适蛋白质表达条件进行优化和筛选。通过镍离子亲和层析法纯化重组菌株的表达产物,并对纯化产物进行Western blot分析和LC-MS/MS质谱鉴定。此外,经平板涂布法和最小抑菌浓度(MIC)法考察重组菌株表达产物的抑菌活性。结果表明:X-33/pPICZαA-CilyC在29℃、250 r/min、1%甲醇浓度、96 h的发酵培养条件下,能产13.7 mg/L的重组蛋白;该重组蛋白经结构鉴定为预期分子量14.5 kD的CilyC蛋白。抑菌试验结果显示:重组CilyC具有明显的抗革兰氏阳性的金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilisi)、单增李斯特菌(Listeria monocytogenes)和蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus)以及革兰氏阴性的铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)和沙门氏菌(Salmonella)的生物学活性。本研究构建的重组毕赤酵母菌株“X-33/pPICZαA-CilyC”能有效合成草鱼C型溶菌酶,为鱼类来源C型溶菌酶的大规模制备奠定了良好基础。; 杨悦陶妍谢晶钱韻芳; 关键词：草鱼重组毕赤酵母抑菌活性

鲢鱼骨骼肌肌球蛋白重链基因的cDNA克隆与表达被引量：5: 2010年; 肌球蛋白分子含有2个约200kD的重链亚基和4个约20kD的轻链亚基，重链亚基由球状的头部（S1）和α-双螺旋的杆部（Rod）组成。在鱼类肌肉蛋白质的组成中，肌球蛋白约占肌原纤维蛋白的50％以上，并且其基因在生物进化过程中的变异性很大，以致肌原纤维蛋白性质的变化主要是由肌球蛋白的变化引起的。; 党静陶妍王孙勇鲍其泠; 关键词：鲢鱼肌球蛋白重链 CDNA克隆 RT-PCR

斑点叉尾鮰LEAP-2和NK-lysin抗菌肽在毕赤酵母中的串联表达被引量：1: 2015年; [目的]合成密码子优化的斑点叉尾鮰(Ictalurus punctatus)LEAP-2与NK-lysin成熟肽的串联基因(LN),构建真核重组表达载体p PICZαA-LN,实现LN在毕赤酵母中的重组DNA表达并对其纯化。[方法]参考编码斑点叉尾鮰LEAP-2和NK-lysin成熟肽的c DNA序列,根据毕赤酵母(Pichia pastoris)的密码子偏爱性,优化合成LEAP-2与NK-lysin成熟肽的串联基因LN,两者之间通过α因子信号肽酶切位点对应的核苷酸序列连接;选择表达载体p PICZαA,构建重组表达载体p PICZαA-LN;电转化至毕赤酵母X-33,29℃、p H 6.0条件下,采用1.0%甲醇诱导表达目的蛋白;采用阳离子交换层析对表达产物进行分离纯化。[结果]Tricine-SDS-PAGE分析显示,培养72 h的表达产物经阳离子交换层析,获得了重组体LEAP-2成熟肽、NK-lysin成熟肽和两者的串连表达物;LEAP-2成熟肽的分泌表达效率较NK-lysin成熟肽的高。[结论]实验构建了斑点叉尾鮰LEAP-2与NK-lysin串联基因的真核重组表达载体,并在毕赤酵母X-33中成功表达。; 宋长丰李雯陶妍; 关键词：斑点叉尾鮰成熟肽毕赤酵母

紫贻贝ⅰ型溶菌酶在毕赤酵母中的重组DNA表达: 溶菌酶是机体先天免疫系统中一个重要的效应分子,在机体免疫系统中发挥重要作用。本研究根据毕赤酵母(pichia pastoris)的密码子偏爱性,人工合成紫贻贝i型溶菌酶的成熟肽基因(mMgIL),其全长cDNA为393b...; 王强厚陶妍; 关键词：紫贻贝毕赤酵母; 文献传递

基于多拷贝鳜鱼β-防御素基因的重组毕赤酵母菌株构建被引量：3: 2021年; 鳜鱼β-防御素(Siniperca chuatsiβ-defensin,ScBD)作为一种重要的蛋白质免疫因子,在其抵御病原微生物侵染的过程中起到了重要的作用,被认为是开发天然抗菌剂的理想候选者。ScBD的初级结构含信号肽和成熟肽,后者由43个氨基酸残基组成,决定了其生物学活性。通过同源建模法预测了ScBD的空间结构,显示其具有β-片层、伸展链和无规则卷曲等构象单元;3对特有的二硫键作为维持其空间结构的关键性次级键,保障了ScBD具有稳定的生物学活性。为了解决前期研究中重组ScBD的低表达量问题、探索目的基因拷贝数对转录水平的影响,使用同尾酶法构建了ScBD基因的二拷贝和四拷贝表达盒载体pPICZαA-ScBDn(n=2或4),分别电转至毕赤酵母X 33后成功筛选到各种重组菌株。qRT-PCR测定结果表明:含一拷贝、二拷贝和四拷贝表达盒载体的重组菌株的基因组中ScBD基因的拷贝数分别为1.19×10^(5)、2.56×10^(5)和5.29×10^(5),证明载体所含的表达盒数目与嵌合进毕赤酵母基因组中的ScBD基因拷贝数之间存在正相关关系,也由此证明了多拷贝表达盒载体的构建是提高目的基因拷贝数和转录水平的有效方法。结果为进一步确定ScBD基因拷贝数与蛋白质表达量之间的关系提供参考。; 吕星星陶妍谢晶谢晶; 关键词：毕赤酵母重组菌株

鲢鱼轻酶解肌球蛋白的cDNA克隆及结构解析: 在过去的研究中,我们已经通过3'-RACE从冬季和夏季鲢鱼(Hypophthalmichthys molitrix)的骨骼肌中分离到两种肌球蛋白重链同工型基因,分别命名为低温型(sc-w)和高温型(sc-s),并...; 蒋旷陶妍王玲军党静; 关键词：鲢鱼 CDNA克隆氨基酸序列

南美白对虾中4种病原菌的多重PCR检测被引量：2: 2011年; 根据沙门氏菌的侵染上皮细胞表面蛋白基因(invA)、单增李斯特菌的侵入关联蛋白基因(iap)、金黄色葡萄球菌的耐热核酸酶基因(nuc)和副溶血性弧菌的耐热直接溶血素基因(tdh)分别设计4对特异性引物,并以细菌16SrRNA基因的部分保守序列为内标,通过对退火温度、引物浓度等反应参数的调整和优化,建立的多重PCR方法为10×PCR buffer 2.0μL(含Mg2+)、dNTP 200μmol/L、DNA模板1μL、Taq DNA聚合酶2.5U,引物浓度分别为16S rRNA 200nmol/L、tdh 250nmol/L、nuc 300nmol/L、iap 350nmol/L、invA 250nmol/L,加无菌水至总体积为20μL;反应条件:94℃预变性4min、94℃变性30s、57℃退火40s、72℃延伸1min、72℃延伸10min,反应共进行30个循环。为检验该方法的可行性,进一步对人工接种上述4种病原菌的南美白对虾进行多重PCR检测。结果表明:对污染样品直接提取DNA和预增菌后提取DNA再进行多重PCR检测,均能有效扩增出各个目的片段;但预增菌处理后可使检测限明显降低,进而大大提高检测的灵敏度。本多重PCR方法可作为食品包括水产品中病原微生物的快速、灵敏和高效的检测方法。; 郭倩倩陶妍谢晶; 关键词：多重PCR 沙门氏菌单增李斯特菌副溶血性弧菌

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