郭敏
- 作品数：8 被引量：44H指数：4
- 供职机构：暨南大学医学院血液病研究所更多>>
- 发文基金：国务院侨办重点学科基金广东省自然科学基金广东省科技计划工业攻关项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- mir-15a和mir-16-1诱导人淋巴瘤Raji细胞株的凋亡被引量：4
- 2008年
- 目的:探讨mir-15a和mir-16-1诱导人淋巴瘤Raji细胞株的凋亡。方法:利用Oligofectamine 2000脂质体法将化学合成的mir-15a和mir-16-1寡核苷酸,随机序列,分别转染Raji细胞。采用间接免疫荧光及流式细胞仪检测Bcl-2蛋白表达情况,半定量RT-PCR检测Bcl-2 mRNA表达水平,台盼蓝拒染法和CCK8法检测mir-15a和mir-16-1对Raji细胞的生长抑制作用,Hoechst染色观察细胞凋亡形态,流式细胞仪—AnnexinV/PI双染色法检测细胞凋亡率。结果:间接免疫荧光法显示Raji细胞经转染mir-15a和mir-16-1寡核苷酸48 h后,Bcl-2蛋白的表达量降低,与空白对照组和随机序列组有显著性差异(P<0.05);RT-PCR法显示各组间Bcl-2 mRNA的表达无显著性差异;台盼蓝拒染法和CCK8法显示,转染后各时间点mir-15a和mir-16-1寡核苷酸组Raji细胞的生长受到抑制,Hoechst染色可见明显凋亡细胞,流式细胞仪—AnnexinV/PI双染色法检测显示,mir-15a组早期凋亡率和晚期凋亡率分别为9.74%和9.65%,mir-16-1组早期凋亡率和晚期凋亡率分别为9.70%和9.34%,明显高于空白对照组和随机对照组。结论:mir-15a和mir-16-1可诱导淋巴瘤细胞凋亡。
- 谌琴何冬梅张洹郭敏
- 关键词：微RNA淋巴瘤细胞凋亡
- 以microRNA-21为靶标的反义寡核苷酸对人白血病K562细胞的抑制作用被引量：11
- 2009年
- 目的:探讨以microRNA-21为靶标的反义寡核苷酸对白血病K562细胞的生长抑制效应及可能的作用机制。方法:依据与microRNA-21序列互补的原理,设计反义寡核苷酸,人工合成并全硫代修饰,在Lipo-fectamineTM2000介导下,转染K562细胞。采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法筛选最佳作用浓度,台盼蓝拒染法检测其对细胞生长抑制的作用,姬姆萨染色观察细胞的形态学变化,流式细胞仪检测细胞凋亡及细胞周期的变化。利用荧光定量PCR技术检测反义寡核苷酸作用后细胞内microRNA-21表达水平的改变。结果:MTT结果显示反义寡核苷酸有效抑制细胞生长,分别与随机组、空白对照组进行比较有显著差异(P<0.05),反义寡核苷酸作用的最佳浓度是0.6μmol/L。台盼蓝拒染法结果显示从转染K562细胞24 h开始,反义寡核苷酸组细胞生长明显受到抑制,抑制效应持续到72 h。姬姆萨染色显示反义寡核苷酸作用K562细胞24 h后,可在细胞中见凋亡小体。流式细胞仪检测结果显示反义寡核苷酸组出现明显的亚二倍体峰,细胞周期无发生明显变化。荧光定量PCR结果显示,反义寡核苷酸可有效抑制细胞内microRNA-21的表达水平。结论:以microRNA-21为靶标的反义寡核苷酸可有效抑制人白血病K562细胞的生长,并显著促进细胞凋亡。
- 郭敏李育敏费嘉张洹
- 关键词：寡核苷酸类反义K562细胞
- Pdx1与Ngn3协同诱导LO2细胞分化为胰腺β样细胞被引量：5
- 2008年
- 目的:胰腺十二指肠同源框蛋白1(Pdx1)与神经源素3(Ngn3)联合诱导肝实质细胞向胰腺β样细胞分化。方法:以人胚胎胰腺组织基因组的mRNA为模板经RT-PCR扩增获得Pdx1与Ngn3基因。应用分子生物学技术,分别克隆到真核表达载体pEGFP-C1的多克隆位点中,构建pEGFP-C1/Pdx1与pEGFP-C1/Ngn3真核表达质粒,并共转染L02细胞,用RT-PCR、免疫组化、间接荧光法检测目的基因及胰岛素相关基因葡萄糖转运体2(GLUT2)与胰岛素的表达情况。结果:目的基因克隆正确,RT-PCR、免疫组化、间接荧光证实转染后LO2细胞中有Pdx1、Ngn3和胰岛素及胰岛素相关基因GLUT2的表达。结论:Pdx1与Ngn3协同作用可诱导肝实质细胞向胰腺β样细胞分化。
- 郭敏唐小龙张洹
- 关键词：转分化
- PDX1联合NKX6.1促进骨髓间充质干细胞分化为胰岛β样细胞被引量：13
- 2009年
- 目的:为提高骨髓间充质干细胞(BMSCs)向胰腺β样细胞的分化效率,以产生足够用于移植的胰岛样细胞。方法:构建含PDX1与NKX6.1双基因的重组腺病毒载体,用重组腺病毒感染并联合多种细胞因子分步诱导BMSCs。用RT-PCR、Western blotting等多种方法分别检测PDX1、NKX6.1、胰岛素及C-肽表达情况;观测植入鼠肾包膜下的细胞形态与胰岛素、C-肽等相应分子表达情况以及检测植入细胞对糖尿病模型大鼠的血糖水平的调节能力。结果:BMSCs经重组腺病毒pAdxsi-CMV-PDX1/CMV-NKX6.1联合相应细胞因子分步诱导,双硫腙染色细胞质呈亮红色,RT-PCR显示诱导后的细胞持续稳定表达胰岛素、葡萄糖转运蛋白2(GLUT2)等β细胞相关分子;Western blotting、免疫细胞化学与间接荧光结果亦相似。所诱导的实验组细胞经5.5和25mmol/L葡萄糖刺激后胰岛素分泌水平分别为(1240.4±109.3)mU/L和(3539.8±245.1)mU/L,并显著高于对照组的分泌量。移植实验组细胞可恢复STZ糖尿病小鼠血糖正常水平。结论:PDX1与NKX6.1联合细胞因子在体外能有效地诱导BMSCs分化为胰岛β样细胞;这种胰岛β样细胞移植能有效恢复STZ糖尿病小鼠的血糖正常水平,维持小鼠良好的生存状态,这将为治疗糖尿病带来新的希望。
- 唐小龙张洹朱康儿郭敏
- 关键词：间充质干细胞腺病毒载体
- pEGFP-N1/PDX1真核载体的构建与表达被引量：1
- 2008年
- 目的:构建胰腺十二指肠同源框蛋白1(pancreatic and duodenal homeobox factor1,Pdx1)转录因子真核表达质粒,并检测其在真核细胞中的表达能力及其生物活性。方法:以人胚胎胰腺组织基因组的mRNA为模板经RT-PCR扩增获得Pdx1基因编码序列,克隆到真核表达载体pEGFP-N1的多克隆位点中,构建pEGFP-N1/Pdx1真核表达质粒,并转染L02细胞,用RT-PCR、免疫组化、间接荧光法和Western Blot检测目的基因表达情况。结果:酶切与测序结果表明目的基因序列克隆正确;RT-PCR检测目的基因Pdx1 mRNA在靶细胞L02中表达;免疫组化和间接荧光结果证实Pdx1主要存在于细胞核内;Western blot检测到细胞核内Pdx1目的蛋白。结论:完成人Pdx1基因克隆,成功构建了目的基因Pdx1真核表达载体,并在L02细胞中获得有效表达。
- 唐小龙郭敏张洹朱康儿
- 关键词：质粒转录因子内切酶
- 靶向抑制miRNA-21提高白血病K562细胞对阿糖胞苷的敏感性被引量：10
- 2011年
- 为研究以miRNA-21为靶标的反义核酸(AMO-miR-21)提高白血病K562细胞对阿糖胞苷(Ara-C)的敏感性及可能的作用机制,在LipofectamineTM2000介导下,将化学合成的AMO-miR-21转染K562细胞,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测单独使用AMO-miR-21、Ara-C以及两者联合使用对细胞增殖抑制作用,并计算抑制率和IC50;流式细胞仪检测细胞凋亡;实时定量PCR(Real-time PCR)检测miRNA-21及其候选靶基因Pdcd4 mRNA的表达水平;免疫印迹(Western blot)检测Pdcd4蛋白的表达水平.结果显示Ara-C与AMO-miR-21联合使用后,IC50从1.95μmol/L降低到0.84μmol/L,敏感性提高到单用Ara-C的2.3倍.AMO-miR-21联合Ara-C组细胞凋亡明显增加(P<0.05).AMO-miR-21显著抑制K562细胞中miRNA-21的表达水平(P<0.05),同时Pdcd4的表达明显增加(P<0.05).提示AMO-miR-21可以提高K562细胞对Ara-C的敏感性,其作用机制与靶向抑制miRNA-21,进而诱导细胞凋亡有关.
- 朱雪姣李育敏谷景义郭敏费嘉
- 关键词：MIRNA-21阿糖胞苷K562细胞化疗敏感性
- Pdx1与NeuroD1联合诱导L02细胞Nkx6.1和GLUT2的表达被引量：3
- 2009年
- 目的:应用分子生物学技术,构建胰腺十二指肠同源框蛋白1(Pdx1)和神经分化因子1(NeuroD1)转录因子真核表达质粒,检测其能否在真核细胞中有效表达并诱导人肝细胞转分化的能力。方法:以人胚胎胰腺组织mRNA为模板经RT-PCR扩增获得Pdx1和NeuroD1基因,分别克隆到真核双表达载体pIRES质粒的多克隆位点A(MCSA)和B(MCSB)中,构建pI/Pdx1/NeuroD1真核表达质粒,并转染L02细胞。用RT-PCR、免疫组化、间接荧光法和Western blotting检测目的基因及NK转录因子相关的Nkx6.1(Nkx6.1)和葡萄糖运载体2(GLUT2)的表达情况。结果:目的基因克隆正确且在真核细胞中有效表达;并可诱导肝细胞表达胰腺β细胞功能相关的Nkx6.1和GLUT2因子。结论:pI/Pdx1/NeuroD1质粒成功构建和在人真核细胞表达,并诱导人肝细胞表达β细胞功能相关的Nkx6.1转录因子和GLUT2,提示Pdx1与NeuroD1可诱导肝细胞向胰腺内分泌细胞分化。
- 唐小龙郭敏张洹朱康儿
- 关键词：质粒转录因子
- 靶向抑制微小RNA-21提高白血病细胞对三氧化二砷的敏感性研究被引量：2
- 2010年
- 目的探讨以微小RNA-21(microRNA-21,miRNA-21)为靶标的反义核酸(AMO-miR-21)提高白血病K562细胞对三氧化二砷(As2O3)的敏感性及可能的作用机制。方法利用LipofectamineTM 2000将化学合成的反义核酸转染K562细胞。MTT法检测单独使用AMO-miR-21、As2O3以及两者联合使用对细胞增殖的抑制作用,并计算抑制率和IC50;PI单染检测细胞周期及凋亡;实时定量PCR检测miRNA-21表达水平的改变;免疫荧光法检测miRNA-21候选靶基因PDCD4蛋白表达的改变。结果AMO-miR-21与As2O3联合使用后,IC50从2.10μmol/L降低到1.23μmol/L,敏感性提高到单用As2O3的1.78倍;AMO-miR-21联合As2O3组细胞凋亡明显增加(P<0.05);单独转染AMO-miR-21可显著抑制K562细胞中miRNA-21的表达水平(P<0.01),同时抑癌基因PDCD4蛋白表达明显增加(P<0.05)。结论AMO-miR-21与As2O3联合使用可提高K562细胞对As2O3的敏感性,为白血病的治疗提供了新的方法。AMO-miR-21通过靶向抑制miRNA-21,进而上调抑癌基因PDCD4的表达而发挥抗肿瘤作用。
- 李育敏谷景义朱雪娇陈万群郭敏姚君琳林春燕费嘉
- 关键词：微小RNA-21反义寡核苷酸三氧化二砷白血病化疗敏感性
