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小鼠骨髓来源巨噬细胞的SILAC代谢标记及生物质谱分析被引量：1: 2012年; 目的作为模型细胞之一,小鼠骨髓来源巨噬细胞(BMM)是药理学、药效学研究的重要工具和对象。然而,由于巨噬细胞增殖能力较弱,代谢标记细胞内蛋白一直是巨噬细胞生物学中的一个难题。因此,本研究以SILAC(stable i-sotope labeling with amino acids in cell culture)方法标记BMM。方法小鼠骨髓细胞的分离,以M-CSF诱导6 d并制备BMM,同时,SILAC标记细胞内蛋白;进而,裂解细胞并收集蛋白质,以SDS-PAGE进行初步分离,经胶内酶解成肽段,再通过质谱分析测定,统计得其标记效率。结果小鼠骨髓细胞在分化6 d时点成熟BMM可占细胞总数的0.965。以70 ku条带为研究对象,d 6、8和d 10鉴定到重链赖氨酸标记蛋白数分别为18、12和13个。其中,有8个蛋白在该3个时点中均被检出。统计结果表明3个时点的重链赖氨酸蛋白标记效率分别为(90.62±0.03)%、(90.23±0.03)%和(90.40±0.02)%,达到了SILAC研究的要求。结论该方法解决了BMM的SILAC标记问题,可为以巨噬细胞为研究对象的药理学研究提供有效的研究手段。; 王通郭嘉慧陈智鹏银兴峰马文心崔毅峙; 关键词：SILAC 质谱蛋白质组

人肠癌细胞外泌体磷酸化蛋白质组中新磷酸化位点的发现: 全面了解蛋白质的翻译后修饰是以染色体为中心的人类蛋白质组计划（Chromosome-Centric Human Proteome Project,C-HPP）的主要目标之一。已知外泌体（exosome）可携带磷酸化蛋白质...; 郭嘉慧; 关键词：肠癌细胞外泌体磷酸化蛋白质组磷酸化位点

正常人SC细胞株分化的M1型巨噬细胞模型表征被引量：2: 2018年; 该文以佛波酯诱导正常人单核细胞来源的SC细胞建立SC-巨噬细胞模型,并表征其形态、吞噬作用、表面标志物和炎症细胞因子分泌情况,评价SC-巨噬细胞模型是否具有典型M1型巨噬细胞表型。结果表明, SC-巨噬细胞贴壁生长,形态以圆形或椭圆形为主;具有caveolae介导的吞噬荧光微球的能力,表面标志物CD11b和LPS受体CD14较SC细胞均显著上调。加入LPS后, SC-巨噬细胞大部分呈长梭形或纺锤形,有明显的伪足,巨噬细胞成熟标志物CD80和CD86均表达上调,炎症细胞因子TNF-α、IL-1β、IL-6和IL-8的分泌水平均显著上调,这些细胞因子的mRNA转录水平也有上调趋势。SC-巨噬细胞具有正常M1型巨噬细胞的表型特征,该研究的结论支持SC-巨噬细胞模型更为广泛地应用于科研。; 谭智海黄嘉莹郭嘉慧颜梓淇崔毅峙王通罗彦彰; 关键词：PMA 正常细胞

可稳定表达ZsGreen1基因的正常细胞来源单核细胞株的构建: 2018年; 为探索构建可表达外源基因的正常细胞来源单核细胞株的可行方案,该研究分别尝试以脂质体转染法、腺病毒载体感染法和含Tet-On调控元件的慢病毒载体感染法,构建可表达绿色荧光蛋白的SC细胞株。经慢病毒感染和靶向扩增获得稳定表达目的基因的SC细胞后,该研究进而验证了该细胞可否在PMA诱导下分化为典型的巨噬细胞。研究结果显示,脂质体转染法和腺病毒载体感染法未能有效导入外源基因至SC细胞;经慢病毒感染和靶向扩增,该研究成功构建了2株可稳定表达ZsGreen1基因的SC细胞株(SC-ZsGreen1),其ZsGreen1阳性表达率均高于95%; SCZsGreen1细胞与SC细胞经PMA处理后均具相似的巨噬细胞表型特征,包括CD11b和CD14表达升高、吞噬能力上调和趋化因子IL-8分泌水平上升。综上,该研究报道了一种构建可稳定表达外源基因的正常人外周血来源单核细胞株的可行方案。; 黄嘉莹谭智海颜梓淇崔毅峙王通郭嘉慧; 关键词：正常细胞单核细胞外源基因

抗IgM抗体偶联琼脂糖微球在纯化细胞外囊泡中的应用: 本发明公开了抗IgM抗体偶联琼脂糖微球在纯化细胞外囊泡中的应用；抗IgM微球可特异性地结合并去除EV产物中残留的高丰度IgM颗粒污染物，可降低产物总蛋白量的44.7％，且对其中的EV不产生负面影响，有效提高EV纯度；添加...; 郭嘉慧崔毅峙王通张嘉仪肖旭煌

一种面向临床应用的小细胞外囊泡分离法--二分式分子排阻层析法: 分子排阻层析(size-exclusion chromatography, SEC)可有效去除高峰度蛋白质污染物，是从复杂样品中分离小细胞外囊泡(small extracellular vesicles，sEVs)的常用...; 郭嘉慧

以基因翻译证据辅助分析蛋白质组的策略研究: 人类染色体蛋白质组计划(C-HPP)旨在以染色体为研究单位,阐明不同组织的蛋白表达谱、丰度分布和翻译后修饰情况。本研究团队早前报道了利用翻译中mRNA(结合于核糖体-新生肽链复合物上的mRNA,即RNC-mRNA)丰度可...; 郭嘉慧; 文献传递

携带中国株HIV-1 gp120基因的重组腺病毒的构建及其感染巨噬细胞的形态学研究被引量：2: 2012年; 目的:构建携带中国株HIV-1 gp120基因并可感染小鼠骨髓来源巨噬细胞(BMM)的重组腺病毒。方法:利用AdMax腺病毒构建系统,以双质粒共转染人胚肾转化细胞293Ad5+细胞,完成重组腺病毒载体包装,并进一步扩增和纯化。通过ELISA测定gp120的蛋白产量,以确认目的基因重组与表达成功。以Karber法对病毒进行TCID50滴度测定,利用BMM进行感染复数(MOI)流式细胞术测定,并利用荧光显微镜观察细胞活化形态。结果:成功构建AdMax-HIV-1 gp120(简称Ad-gp120)及其对照病毒(Ad-GFP),其滴度分别为108.3和108.1TCID50/mL。这些病毒可感染BMM,MOI测定结果表明2种重组腺病毒感染BMM和293Ad5+细胞的能力接近,验证了上述TCID50滴度结果。Ad-gp120可在293Ad5+细胞中表达gp120蛋白,并可感染和诱导BMM相关形态改变。结论:成功构建Ad-gp120,其感染可致BMM出现形态发生改变。; 王通马文心郭嘉慧陈智鹏崔毅峙; 关键词：重组腺病毒

肝素偶联琼脂糖微球在纯化细胞外囊泡中的应用: 本发明公开了肝素偶联琼脂糖微球在纯化细胞外囊泡中的应用；所述肝素微球可特异性地结合并去除EV产物中残留的高峰度脂蛋白颗粒污染物，实测可降低产物总蛋白量的60.1％，且对其中的EV不产生负面影响，有效提高EV纯度。添加肝素...; 崔毅峙郭嘉慧王通张嘉仪肖旭煌

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郭嘉慧