赵文博
- 作品数：9 被引量：29H指数：3
- 供职机构：黑龙江八一农垦大学生命科学技术学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金黑龙江省教育厅科学技术研究项目黑龙江省教育科学“十二五”规划课题更多>>
- 相关领域：农业科学生物学化学工程更多>>
- 羊口疮病毒OV/HLJ/04株对本体动物致病性的实验评价
- 2015年
- 利用本体动物感染发病的临床特征及外周血白细胞变化规律,探究羊口疮病毒（ORFV）致病性,为该病毒与宿主相互作用及其免疫逃逸机制的研究提供参考.将分离的毒株OV/HLJ/04进行初次和再次感染4月龄健康羔羊的处理,每天记录临床病理指标,运用血常规分析仪分析接种后0、3、7、14和21 d静脉血中白细胞组成含量的变化,然后通过间接ELISA方法测定血清中特异性抗抗体含量的变化,最后对痂皮进行PCR鉴定.本体动物实验初次感染病程包括潜伏期（前驱期0-4d）、发病期（5- 14 d）和转归期（15-21 d）.血常规分析显示,发病羊外周血中的淋巴细胞呈现出“M”型的变化趋势,并于14d时达到峰值16.6×10^9/L.攻毒后14 d初次检出抗体,抗体效价为1∶200.再次感染显示,第14天的病灶大小由初次的18 mm×11 mm缩小至10 mm×4 mm,病程持续17d,较初次感染缩短4d.PCR鉴定结果证明痂皮样品中ORFV的存在.本研究结果表明病毒初次感染和再次感染本体宿主,临床症状相同,但后者病毒致病性有所减弱,此情况与宿主初次细胞免疫水平有关.
- 谭强于永忠赵文博李瑞航贺鹏亮宁鹏代建朱占波崔玉东
- 关键词：羊口疮病毒临床症状
- 人羊膜上皮细胞对于生长因子和ORFV的敏感性研究被引量：2
- 2013年
- 研究人羊膜上皮细胞(hAEC)在不同生长因子存在时生长速度差异性及在羊口疮病毒(ORFV)作用下形态学变化特征。采用胶原酶-胰蛋白酶联合消化法分离获取hAEC并进行原代培养。分别向培养液中添加40 ng·mL-1表皮生长因子(EGF)和10 ng·mL-1的碱性成纤维细胞生长因子(bFGF),倒置显微镜观察细胞生长和增殖情况,以选择最适宜hAEC原代培养方法。体外实验用ORFV感染hAEC并记录。获得大量hAEC细胞。细胞培养时添加bFGF,hAEC生长和增殖速度显著加快。病毒感染出现明显细胞病变。胶原酶-胰蛋白酶联合消化及培养液中添加10 ng·mL-1的bFGF是hAEC较为适宜的原代培养方法;hAEC对于ORFV具有敏感性。
- 于永忠王欢谭强赵文博崔玉东
- 关键词：人羊膜上皮细胞细胞培养病毒感染敏感性
- 抗羊口疮B2L囊膜蛋白单抗的免疫学初步研究
- 2014年
- 探究一株抗羊口疮病毒B2L囊膜蛋白单抗的特异性识别毒株的能力,为后续利用单抗建立检测病毒的ELISA诊断试剂盒打下基础。通过将分离株OV/HLJ/04接种于牛睾丸细胞,并设立对照组,每天定时记录细胞病变过程。根据细胞病变情况选择最佳的免疫荧光时间,然后开展间接免疫荧光试验,并对产生病变的牛睾丸细胞进行PCR鉴定。病毒接种实验显示,细胞由接种病毒到产生病变的时间约3 d,3 d后接种细胞逐渐产生大规模的病变,实验选择2 d作为荧光实验的最佳时间。通过免疫荧光实验及PCR鉴定结果表明,所获单抗能够识别感染病毒的细胞。
- 谭强赵文博李朋娅王梦醒杨春华刘馨黄凤娟谭慧华于永忠
- 关键词：羊口疮病毒聚合酶链式反应间接免疫荧光
- 通过CRISPR/Cas9技术打靶兔Myostatin基因被引量：6
- 2015年
- 细菌和古生菌利用自身的获得性免疫系统(CRISPR)抵御外来侵略,使外源DNA降解。为了基因突变兔子成纤维细胞的Myostatin基因,研究构建了CRISPR和g RNA质粒,当Cas9与g RNA摩尔数之比分别为1∶2、1∶1时进行转染到兔子成纤维细胞中,结果显示有打靶效率差异,经过鉴定均有碱基突变。结果表明:利用(CRISPR/Cas9)系统可成功突变目的基因。
- 柳婧潘求真赵文博王静宜宗严连正兴
- 关键词：转基因PAM
- 羊传染性脓疱病毒保护性抗原B2L及其应用
- 本发明涉及一种羊传染性脓疱病毒保护性抗原B2L，其氨基酸序列如SEQ ID No.2所示。本发明还提供了上述羊传染性脓疱病毒保护性抗原B2L的编码基因和关键性氨基酸构成以及应用。本发明获取了羊传染性脓疱病毒保护性抗原B2...
- 于永忠赵文博张雪谭强
- 文献传递
- 羊传染性脓疱病毒流行株OV/HLJ/04单克隆抗体2E4及其应用
- 本发明涉及一种羊传染性脓疱病毒流行株OV/HLJ/04单克隆抗体2E4，其轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID No.2所示，其重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID No.4所示。本发明还提供了上述2E4抗体的轻链可变区...
- 于永忠张雪谭强赵文博
- 文献传递
- 羊口疮病毒黑龙江省分离株的分离鉴定被引量：17
- 2013年
- 为确定黑龙江大庆地区某羊场发生的疑似羊口疮(Orf)的病原,本研究采用MDBK细胞培养途径从病羊的口唇部位的痂皮病料中分离出1株病毒。通过电镜观察和IFA鉴定证明该分离株为Orf病毒,命名为OV/HLJ/04。其F1L基因核苷酸序列测定和进化分析显示,OV/HLJ/04与国内报道的山西株(HQ221964)的遗传关系密切,同源性达到98.2%。将该病毒分离株进行回归本动物试验,接种羔羊发生严重的羊口疮。
- 于永忠谭强赵文博包凯崔玉东
- 关键词：羊口疮病毒进化分析
- 羊口疮病毒单抗可变区氨基酸序列及同源建模分析被引量：1
- 2018年
- 为了解羊口疮病毒（Orf virus，ORFV）单克隆抗体2E4的抗体可变区的分子特征，选择其轻链和重链可变区基因分别进行体外扩增和测序，并通过IgBLAST程序分析（http：／／www.ncbi．nlm．nih．gov／igblast／），确定了2E4抗体可变区的互补决定区（complementarity determining regions，CDRs）和骨架区（framework regions，FRs）氨基酸结构。继而，采用SWISS-MODEL同源建模方法，展示抗体分子轻、重链可变区的三维空间构型，并推测出可能的OR—FVB细胞抗原表位多肽结合部位（pocket）。目的基因测序结果显示：2E4轻链可变区（V L）基因扩增全长为324bp，编码108个氨基酸；2E4重链可变区（VH）基因扩增全长为345bp，编码115个氨基酸。IgBLAST结果显示：轻链与GenBank公布的GHP53（GI：197494）单抗轻链可变区序列基因序列一致性达到97．6％；重链与vHsAF34（GI：215263227）单抗重链可变区基因序列一致性达到98．6％。并且，2E4轻链CDRs（CDR1-CDR3）分别位于25～348a、52～54aa和91～98aa的序列位置；重链CDRs（CDR1-CDR3）分别位于25～32a8、50～57aa和96～104aa的序列位置。同源建模分析结果显示：这些CDRs区域共同形成的“pocket”极可能作为抗原表位多肽结合的位点。最终成功克隆2E4单抗可变区基因，分析了抗体轻、重链可变区CDRs构成形式，模拟了其空间构型，为进一步了解和验证“CDRs-表位”特异性结合的分子机制，并在Orf免疫保护中加以应用提供了可能。
- 张雪谭强赵文博段旭阳冯振月马金柱崔玉东于永忠
- 关键词：羊口疮病毒可变区基因克隆同源建模
- 羊口疮病毒B2L基因克隆及表达被引量：6
- 2015年
- 为了获得羊口疮病毒囊膜蛋白。以羊口疮病毒基因组为模板,利用羊口疮病毒B2L基因特异性引物,进行PCR扩增,回收以及纯化PCR产物,连接到PMD18-T载体上,测序结果表明B2L基因全长1 137 bp,编码379个氨基酸。再将B2L基因克隆至p ET-30a,构建原核表达载体p ET30a-B2L。经菌液PCR、酶切鉴定以及SDS-PAGE等方法表明成功构建原核表达载体,这将为今后的单抗制备以及羊口疮病毒的疫苗研究打下基础。
- 赵文博李瑞航贺鹏亮李朋娅王梦醒杨春华于永忠崔玉东
- 关键词：羊口疮病毒基因克隆原核表达
