贾淑玲
- 作品数：4 被引量：15H指数：3
- 供职机构：西北农林科技大学动物医学院生物工程研究所更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 通用型基因打靶载体的构建及其功能鉴定被引量：4
- 2008年
- 为了构建适合大多数基因座位点打靶的通用型基因打靶载体及打靶成功后去除正选择标记基因,以克隆载体pGEM-3Z为骨架,插入了一个正选择标记基因新霉素磷酸转移酶基因(neo)、两个相同的负选择标记基因单纯疱疹病毒胸苷激酶基因HSV-tk1和HSV-tk2,并在neo的两侧各添加了一个方向相同的LoxP(locus of crossing-over(x)in P1)序列及两个不同的多克隆位点序列,从而构建了载体pA2T。插入的两个不同的多克隆位点序列中,neo和HSV-tk1之间的多克隆位点序列有8个稀少的酶切位点、neo和HSV-tk2之间的多克隆位点序列有5个稀少的酶切位点,neo、HSV-tk1和HSV-tk2有各自独立的转录单元。脂质体法转染山羊成纤维细胞,用遗传霉素(G418)和丙氧鸟苷(GAC)进行正负筛选,验证了正负选择标记基因的生物活性,证明通用型基因打靶载体pA2T构建成功。载体pA2T转化组成性表达Cre重组酶(Cyclization recombination protein)的大肠杆菌BM25.8,检测到LoxP序列的生物活性,结果表明pA2T中的正选基因可以被Cre重组酶去除。因此,本研究所构建的通用型基因打靶载体pA2T,根据不同的基因座设计同源臂后,插入到MCS中可直接用于不同基因座位点的打靶,并能够在打靶成功后用Cre重组酶去除基因组中插入的neo基因,为用基因打靶的方法制作转基因动物提供了便利。
- 陈兴启孙达权刘凤军贾淑玲张涌
- 关键词：转基因动物CRE重组酶
- 转人溶菌酶基因核移植克隆胚的发育研究
- 人溶菌酶作为一种天然蛋白质，由于其具有抗菌消炎、防腐保鲜的功能，被广泛地应用于人们地生产生活中，但是从人体组织、器官中提取的人溶菌酶远远不能够满足人们的需要。因此，近年来，人们把目光投向了当前的基因工程技术，即利用原核或...
- 贾淑玲
- 关键词：人溶菌酶基因核移植重构胚囊胚发育率脂质体转染法
- 文献传递
