谢志鹏
- 作品数：31 被引量：128H指数：6
- 供职机构：浙江大学更多>>
- 发文基金：浙江省科技计划项目“十一五”国家科技支撑计划浙江省重点科技计划更多>>
- 相关领域：化学工程轻工技术与工程生物学医药卫生更多>>
- 虎杖中有效成分大黄素的提取方法
- 本发明提供虎杖中有效成分大黄素的提取方法，将药材粉碎后放入五个提取罐中，提取溶剂为35～70％的乙醇，用量为8～12倍体积药材质量，温度为35～65℃，时间为20～50分钟，依次进行E、D、C、B、A罐的提取，使五个罐中...
- 陈勇刘雪松谢志鹏蔡铭程翼宇
- 文献传递
- 定向进化和半理性设计改造顺式环氧琥珀酸水解酶被引量：1
- 2023年
- 【背景】D(-)-酒石酸是非天然有机酸,在保健品、食品和肿瘤药物合成等行业具有重大应用潜力,目前主要通过生物转化法生产,即顺式环氧琥珀酸水解酶[cis-epoxysuccinic acid hydrolase,CESH(D)]水解顺式环氧琥珀酸(cis-epoxysuccinic acid,ESH)生成D(-)-酒石酸。该法简单温和,但存在CESH(D)酶活转化效率低下的瓶颈问题。【目的】通过基因工程改造,提高CESH(D)的酶活力、温度和pH稳定性。【方法】利用定向进化和半理性设计体外改造CESH(D),高通量筛选出正向突变体;然后对其进行酶学性质研究,包括比酶活、温度和pH对酶催化效率的影响、酶的温度稳定性、pH稳定性及酶促动力学分析;最后通过分子对接等手段分析突变位点影响催化活性的初步机制。【结果】筛选获得4个正向突变体L231P/N226S、V77I、D183E和T223S。与野生型相比,4个突变体的比酶活分别提高2.2、1.6、1.5和1.4倍。其中,L231P/N226S的温度稳定性和pH稳定性较野生型均有显著提高,55℃时催化活性为野生型的1.6倍,pH 6.0时催化活性为野生型的1.2倍。动力学分析发现,突变体L231P/N226S和T223S对底物ESH的亲和力有明显提升,Km值分别为20 mmol/L和21 mmol/L,较野生型分别降低18%和16%。分子对接研究表明,突变位点主要通过改变底物结合口袋促进酶与底物的相互作用,从而影响酶活。【结论】获得了温度和pH稳定性好、催化活性明显提高的CESH(D)突变体,初步分析突变位点影响酶活的机制,为进一步研究CESH(D)的结构-功能关系及深入改造提供指导。
- 王国桧谢志鹏张建国
- 关键词：顺式环氧琥珀酸水解酶定向进化
- 一种朝鲜蓟叶浸膏提取物的制备方法
- 本发明提供一种朝鲜蓟叶浸膏的制备方法：将朝鲜蓟干叶粉碎处理后装入提取釜内，用超临界CO<Sub>2</Sub>和共溶剂乙醇的混合溶剂进行萃取，萃取后的超临界溶液依次进入分离器1和分离器2，通过降低压力而析出溶质，在超临界...
- 王龙虎谢志鹏刘雪松陈勇程翼宇
- 文献传递
- 产顺式环氧琥珀酸水解酶的博德特氏菌BK-52的筛选、鉴定及其产酶条件优化被引量：8
- 2008年
- 【目的】产顺式环氧琥珀酸水解酶(CESH)新型菌株的筛选、鉴定及其产酶条件优化。【方法】通过电镜、Biolog GN、(G+C)含量和16S rDNA序列研究,对筛选菌株进行分类鉴定。通过红外光谱、核磁共振氢谱和碳谱、质谱以及旋光度实验,鉴定纯化产物的结构并优化CESH产酶条件。【结果】本文筛选出一株产CESH的新型菌株,该菌株可将顺式琥珀酸盐转化为D(-)-酒石酸,属于博德特氏菌属,并将其命名为博德特氏菌BK-52。最佳发酵条件为:最佳温度30°C,最佳pH7.0,最佳发酵时间36h,最佳碳源蔗糖,最佳无机氮源硫酸铵,最佳酶诱导剂顺式环氧琥珀酸二钠。在此最佳条件下,CESH酶活最高达764U/g生物量。【结论】本文筛选的新菌株博德特氏菌BK-52为D(-)-酒石酸的生产提供了一种新的方法。
- 潘海峰谢志鹏鲍文娜张建国
- 关键词：顺式环氧琥珀酸水解酶
- HPLC法测定四制香附丸中芍药苷含量被引量：4
- 2010年
- 目的:建立四制香附丸中芍药苷的含量测定方法。方法:采用反相高效液相色谱法,以Kromasil KR100-5 C18为色谱柱(4.6mm×250mm,5μm),以乙腈-水(14∶86)为流动相,柱温35℃,检测波长230nm,流速1.0mL·min-1。结果:芍药苷在41.98～1049.5ng范围内呈良好的线性关系(r=0.9999),平均回收率(n=6)97.9%,RSD1.0%。结论:本方法简单、稳定易行,灵敏度高,可控性强,重复性好,可用于四制香附丸中芍药苷的含量测定。
- 吴薇谢志鹏
- 关键词：芍药苷高效液相色谱法
- 酒石酸高效生物合成关键技术及其应用
- 李永泉张建国谢志鹏潘海峰喻晓蔚吕龙贤
- 中国年产有机酸及其衍生物约1300万吨、产值逾千亿，占全球60%，但普遍存在生产效率低、能耗高、污染重等问题，因此利用生物技术提升有机酸产业水平和国际竞争力具有重要的战略意义。酒石酸是重要的有机酸产品，主要用作葡萄酒和饮...
- 关键词：
- 关键词：酒石酸生物合成
- 发酵法生产米多霉素的菌种选育、培养条件优化和动力学研究
- 米多霉素是一种由链霉菌发酵产生的核苷类抗生素，对真菌细胞具有强烈的抑制及杀死作用，特别是对农作物的白粉病有很好的防治效果，而且具有高效、低毒等特点。米多霉素已经在国外实现商品化生产，我国还未进行研究。本论文以提高发酵法生...
- 谢志鹏
- 关键词：推理选育基因组重排原生质体融合丝状菌
- 靛酚蓝反应测定发酵液中的氨态氮被引量：35
- 2005年
- 针对发酵工业中氮源消耗的检测问题,提出了基于靛酚蓝反应的氨态氮定量测定方法.通过优化显色反应时间、颜色稳定性和试剂添加顺序等条件,考察了氨态氮质量浓度与吸光度值之间的关系.采用日内、日间重复实验和回收率实验进行方法学验证.将该法应用于氨基霉素和S-腺苷蛋氨酸发酵生产过程氨态氮的定量测定.结果表明,当氨态氮在0～7mg/L时,质量浓度与显色反应溶液在625nm处的吸光度值具有显著的相关性,相关系数为0.9986,该测定方法具有较高的精确度、精密度和灵敏度,可检测出发酵后期氮源的微量变化,有利于发酵控制策略的调整,提高了产品的产率.
- 谢志鹏徐志南郑建明岑沛霖
- 关键词：发酵液氨态氮微生物显色反应稳定性
- 高效液相色谱法测定1，4-丁烷二磺酸腺苷蛋氨酸原料及制剂中的有关物质被引量：4
- 2008年
- 目的建立高效液相色谱(HPLC)法同时测定1,4-丁烷二磺酸腺苷蛋氨酸原料及注射用灭菌粉末中4种有关物质。方法色谱柱:Supelcosil LC-SCX强阳离子交换色谱柱(4.6mm×250mm,5μm),流动相:0.1mol·L-1甲酸铵溶液(用甲酸调节pH值至2.8),柱温:30℃,流速:1.0mL·min-1,检测波长:260nm。结果1,4-丁烷二磺酸腺苷蛋氨酸峰与各杂质峰均能良好分离。杂质腺苷、腺嘌呤、S-腺苷-L-高半胱氨酸和甲硫腺苷的浓度分别在0.96～19.27,0.95～18.93,1.03～20.64和2.11～42.16μg·mL-1范围内与峰面积呈良好的线性关系,回收率分别为100.6%,100.1%,98.2%和99.3%,RSD分别为1.3%,0.8%,0.5%和1.1%(n=12)。结论该方法灵敏、准确,专属性好,可用于1,4-丁烷二磺酸腺苷蛋氨酸原料和制剂中有关物质的检查。
- 吴薇张劲松俞建生姚黎栋谢志鹏
- 关键词：腺苷腺嘌呤
- 米多霉素的生物检定法与HPLC测定法被引量：1
- 2006年
- 为定量测定米多霉素含量,建立了一种新型的生物检定法.通过考察12种红酵母的最低抑制质量浓度(MIC),筛选出合适的敏感菌.研究了抑菌圈的直径与米多霉素浓度的关系,比较了米多霉素对检定菌的抗菌活性与其对粉霉菌的抗菌活性的关系,对比了该生物检定法与高效液相色谱(HPLC)法.结果表明,红酵母AS 2.166为最适检定菌,其抑菌圈的直径与米多霉素浓度的对数值呈显著的线性关系,相关系数为0.999 4.米多霉素对检定菌的抗菌效价与其对黄瓜粉霉菌的抗菌效价具有高度的一致性.该生物检定法与HPLC测定法均具有较好的准确度和精密度,可替代高效液相色谱法,用于米多霉素发酵过程的产量检测.
- 谢志鹏徐志南陈勇沈文和郑建明岑沛霖
- 关键词：生物检定法红酵母高效液相色谱
