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白灵菇漆酶基因的克隆及其序列分析: 2014年; 白灵菇作为一种珍稀食用菌,提高其产量及质量具有重要的现实意义,而漆酶对真菌的生长发育具有重要影响。本文根据侧耳科漆酶基因共同保守序列,设计引物,利用RT-PCR的方法,克隆白灵菇漆酶序列,经测序获得其cDNA序列。为进一步获得该漆酶基因序列,以白灵菇基因组DNA为模板,PCR扩增出长2606 bp的漆酶基因DNA片段,DNA经纯化后克隆到pGM-T载体上,经筛选、PCR鉴定、序列分析,证明该片段为完整的白灵菇漆酶基因(GenBank注册号KC789845)。对基因序列的内含子/外显子进行分析,分析结果与经反转录测序获得的cDNA序列一致。该基因的开放阅读框由1596个核苷酸组成,编码一个由531个氨基酸组成的多肽(GenBank登录号AGO64758.1),Protein Blast 分析结果表明,该基因含有3个铜氧化酶(Cu-oxidase)保守结构域,并具有高度保守的漆酶特征序列L3;又进一步对白灵菇漆酶二级结构进行分析,并通过 SWISS-MODE预测了该酶的三维结构。; 薛丹刘腾那日王志永郭九峰; 关键词：白灵菇漆酶基因克隆

食用菌中漆酶基因的克隆及乳酸菌电激转化体系的建立: 青贮饲料是发展畜牧业的重要物质基础，乳酸菌决定了青贮饲料的质量，随着我国畜牧产业的迅速发展，对青贮饲料的需求量也逐渐增大，提高饲料的利用率是解决饲料不足的关键。漆酶对包裹在纤维素外的木质素具有很强的降解能力，有利于纤维素...; 薛丹; 关键词：食用菌漆酶基因基因克隆乳酸菌青贮饲料; 文献传递

重组布氏乳杆菌漆酶表达的研究: 2016年; 本研究将杏鲍菇漆酶基因接入食品级宿主细胞乳酸杆菌中,成功构建重组工程乳酸菌。为筛选出单个转化菌株,将重组工程乳酸菌液涂布到含有红霉素的固体MRS培养基中,挑取白色菌落直接进行PCR,筛选阳性重组子。并提取筛选到的阳性重组子质粒,进一步进行PCR验证。将验证过确实存在漆酶基因的阳性重组子涂布到含有愈创木酚的固体培养基中进行培养,菌落颜色变成红棕色表明具有分泌漆酶的能力,挑取颜色变化较深的菌落,测定其酶活。成功筛选到具有产漆酶能力的重组工程乳酸菌,对其适宜温度、酸碱度进行了研究。具有分泌漆酶能力的乳酸菌若能作为青贮饲料的添加剂,将大大提高青贮饲料的利用率及品质。; 刘晓庆那日郭九峰薛丹; 关键词：漆酶乳酸菌酶活性

3种食用菌漆酶活性比较及其基因的克隆与序列分析被引量：4: 2013年; [目的]研究食用菌漆酶基因的差异以及漆酶的活性。[方法]利用编码杏鲍菇漆酶基因序列(Genbank No.AY686700)设计特异性引物,采用PCR方法获得3种典型木腐食用菌(杏鲍菇、平菇、白灵菇)漆酶的基因序列。[结果]扩增得到的片段长度均为2 606 bp,通过对基因序列的内含子/外显子分析,获得漆酶编码区的cDNA,该基因的开放阅读框由1 596个核苷酸组成,编码一个由531个氨基酸组成的多肽。3种食用菌漆酶基因的核苷酸序列、氨基酸序列同源性均为99.81%,说明漆酶的一级结构序列具有很高的保守性。[结论]序列的差异性、氨基酸跨膜区的不同及蛋白质的构象不同可能导致漆酶活性的高低。; 刘腾郭九峰那日薛丹; 关键词：食用菌漆酶基因克隆酶活性

杏鲍菇漆酶基因DNA片段的克隆及序列分析被引量：3: 2013年; 参照Genbank中发表的杏鲍菇漆酶基因序列(No.AY686700),并根据真菌漆酶氨基酸序列保守区设计特异性引物。以杏鲍菇基因组DNA为模板,PCR扩增出长2 606 bp的漆酶基因片段,DNA经纯化后克隆到pGM-T载体上,经筛选、PCR鉴定和序列分析,证明该片段为完整的杏鲍菇漆酶基因(Genbank注册号KC789846)。通过对基因序列的内含子/外显子进行预测分析,获得漆酶编码区的cDNA,该基因的开放阅读框由1 596个核苷酸组成,编码一个由531个氨基酸组成的多肽,分子量大小约为56 682.0,等电点pI为4.56;比对结果发现该基因氨基酸序列与其他真菌漆酶的同源性最高达93%;进一步对X22-12漆酶二级结构进行分析,并通过SWISS-MODEL预测了该酶的三维结构。; 薛丹郭九峰那日刘腾; 关键词：杏鲍菇漆酶基因基因克隆

基于cDNA-AFLP的N^+离子注入甘草当代根部基因表达分析被引量：3: 2015年; 为研究离子束注入对甘草基因表达的影响,本文用低能N+离子束注入甘草种子,以未经处理的同批甘草种子作为对照,利用c DNA-AFLP技术分析甘草幼根基因的表达差异;以甘草幼根总RNA为模板,通过反转录合成c DNA双链,使用Pst I和Mse I酶切双链c DNA,后经接头连接,预扩增,选择性扩增,变性聚丙烯酰胺凝胶电泳得到c DNA-AFLP图谱;9对选择性扩增引物总共出现条带1576条,差异条带286条,约占总条带的20%,对其中105个表达差异显著的片段进行测序,最终得到92个差异片段的核苷酸序列。通过Blast分析,其中53条测序序列检索到与之同源性高的DNA序列或已知功能的蛋白mRNA序列;成功构建离子注入甘草的当代根部基因表达c DNA-AFLP体系,证实了离子束注入甘草种子对当代甘草根部基因表达的影响,为建立甘草品质育种提供参考。; 刘腾郭九峰那日薛丹; 关键词：离子束诱变甘草 CDNA-AFLP 基因表达差异

杏鲍菇漆酶基因原核表达载体的构建及乳酸菌的遗传转化: 2015年; 为获得有效表达的产漆酶乳杆菌工程菌和既可以产乳酸又可以产漆酶的益生菌制剂。以杏鲍菇为试验材料,利用RT-PCR方法,克隆漆酶基因,将其与乳酸菌食品级表达载体质粒p MG36e进行连接,构建漆酶乳酸杆菌表达载体质粒p MG36e-Lacc1,通过电激转化法使其进入从青贮饲料中提取的布氏乳杆菌中,并探究影响布氏乳杆菌电转化的最适条件。试验结果表明:扩增得到长度为1 596 bp的漆酶基因片段,成功构建漆酶乳酸杆菌表达重组质粒,利用电激转化技术使其导入布氏乳杆菌基因组中,研究表明当电场强度达到1.75 k V,用SMRS培养基复苏培养1.5 h后,得到较高的电激转化率。; 薛丹那日郭九峰刘腾; 关键词：漆酶表达载体系统

圈层化视角下内蒙古地区大学生群体微信使用倦怠行为研究: 本文选取了内蒙古地区大学生群体作为研究对象，以彭兰老师提出的圈层化原理作为理论框架，采用问卷调查、深度访谈和参与式观察的方法，研究微信使用倦怠行为。　　本文主要研究以下问题，一是内蒙古地区大学生群体微信使用倦怠行为的表现...; 薛丹; 关键词：大学生群体

当代大学生思想政治教育与心理健康教育结合的现状，问题和对策研究——以呼和浩特市高校为例: 新时期，学生健康的心理素质是形成和发展良好思想政治素质的基础和中介，而大学生过硬的思想政治素质和理论修养又是健康心理和健全人格形成的思想前提。因此，两个教育的结合对大学生的健康成长有积极作用。当前，高校思想政治教育和心理...; 薛丹; 关键词：大学生思想政治教育心理健康教育教学改革; 文献传递

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薛丹