蒲泽锦
- 作品数：30 被引量：146H指数：7
- 供职机构：汕头大学医学院第二附属医院更多>>
- 发文基金：广东省自然科学基金广东省中医药管理局基金广东省科技计划工业攻关项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- CagA^+幽门螺杆菌胃癌前及癌变中NF-κB的表达增强被引量：10
- 2005年
- 目的:探讨核因子-κB(nuclearfactor-KappaB,NF-κB)在癌前病变及胃癌组织中的表达及其与细胞毒素相关抗原A幽门螺杆菌(CagA+Hpylori)感染之间的关系.方法:慢性浅表性胃炎34例,肠腺化生31例,不典型增生34例,胃癌55例,应用免疫组化方法(SABC法)检测NF-κBp65的表达,以14C-呼气试验、快速尿素酶试验和Warthin-Starry银染色检测Hpylori,采用斑点金免疫渗滤法检测患者血清抗HpyloriCagAIgG抗体,分析NF-κBp65表达与CagA+Hpylori感染之间、以及与胃癌组织学分型、临床病理分期、淋巴结转移的关系.结果:在慢性浅表性胃炎、肠腺化生、不典型增生和胃癌组中,NF-κBp65阳性表达率分别为15.0%,41.9%,64.7%和78.2%,呈逐渐增高趋势,各组间有显著性差异(χ2=43.98,P<0.01);Hpylori感染率分别为70.0%,67.7%,73.5%和54.5%,各组间无显著性差异(P>0.05).CagA+Hpylori构成比分别为53.6%,61.9%,68.0%和73.3%,各组间无显著性差异(P>0.05).在肠化组中,Hpylori阳性和CagA+Hpylori感染的患者NF-κBp65阳性表达率分别为57.1%和76.9%,显著高于同组无Hpylori感染的10.0%(χ2=6.18,P<0.05)和CagA-Hpylori感染者的25.0%(χ2=5.45,P<0.05).在胃癌组中,NF-κBp65阳性表达与T分期(χ2=5.91,P<0.05)及淋巴结转移有关(χ2=7.47,P<0.05),但与胃癌组织学分型无关(P>0.05).结论:NF-κB的异常活化在胃癌前病变及癌变过程中起作用,早期的活化与CagA+Hpylori感染有关.
- 李国平 吴灵飞蒲泽锦冯家琳 郑宗茂王炳周
- 关键词：核因子-ΚBCAGA^+癌前病变
- 腺苷体外对人肝癌HepG2细胞凋亡的诱导作用及其作用机制被引量：7
- 2008年
- 目的研究腺苷及其代谢途径对人肝癌HepG2细胞凋亡的诱导作用及其机制。方法将腺苷2.0mmol.L-1作用于HepG2细胞24和48h,采用流式细胞术(FCM)测定细胞周期及凋亡率;观察腺苷膜转运体抑制剂双嘧达莫、腺苷脱氨酶抑制剂红-9-(2-羟基-3-壬烷基)腺嘌呤(EHNA)和腺苷激酶抑制剂5′-氨基5′-脱氧腺苷(AMDA)对腺苷抑制细胞存活的影响,应用MTT法测定细胞存活率;应用Western蛋白印迹法检测P53和Bcl-2蛋白的表达。结果腺苷与HepG2细胞作用24和48h,HepG2细胞出现特征性的亚二倍体凋亡峰,细胞凋亡百分率分别由对照组的(1.2±0.4)%和(4.1±1.6)%增加到(24.3±4.8)%和(38.6±7.4)%,细胞周期阻滞于G0/G1期。腺苷与HepG2细胞作用24h明显抑制细胞存活,P53表达明显增强,Bcl-2表达降低。预先分别给予双嘧达莫,AMDA和AMDA+双嘧达莫处理后,各处理组HepG2细胞存活率较腺苷组升高,细胞凋亡百分率和P53表达降低,Bcl-2表达无明显变化;EHNA预处理组细胞存活率、细胞凋亡百分率、P53和Bcl-2表达与腺苷组比较均无明显变化。结论腺苷可诱导HepG2细胞凋亡,腺苷在胞内可能通过腺苷激酶而不是通过转氨酶的代谢途径参与诱导细胞凋亡的过程。腺苷对HepG2细胞凋亡的诱导作用还可能与其增加P53蛋白表达有关。
- 吴灵飞苏剑东李国平蒲泽锦冯家琳
- 关键词：腺苷细胞凋亡细胞周期
- 去甲基化机制在腺苷及同型半胱氨酸诱导肝癌HepG2细胞凋亡中的作用被引量：5
- 2014年
- 目的探索去甲基化机制在腺苷(ADO)及同型半胱氨酸(HCY)诱导肝癌HepG2细胞凋亡中的作用。方法CCK8法检测不同浓度腺苷(1.0、2.0、4.0 mol·L-1)单独或者联合同型半胱氨酸作用肝癌HepG2细胞不同时间(6、12、24 h)后细胞存活率;亦使用DNA甲基化酶抑制剂5-AzaCdR观察其对细胞生长的影响。AnnexinV-FITC/PI双染法检测细胞凋亡率,流式细胞术检测细胞内线粒体膜电位:实时荧光定量PCR及Western免疫印迹法分别检测caspase-3、caspase-8、caspase-9、MDM-2、p53、Cytochrome C、DNMT1、DNMT3a、DNMT3b等因子的表达量。结果 ADO联合HCY明显抑制HepG2细胞增殖,呈剂量和时间依赖性;不同浓度ADO联合HCY(1.0、2.0、4.0 mol·L-1)作用HepG2细胞24h,细胞凋亡率分别为(18.63±1.25)%,(29.42±2.37)%,(42.47±3.09)%,均明显高于阴性对照组(1.30±0.82)%,P<0.01;联合用药组线粒体膜电位明显下降,分别从空白对照组(674.15±82.8)%下降为(428.38±54.5)%、(297.78±30.5)%、(74.45±5.73)%,P<0.01;ADO联合HCY导致caspase-3、caspase-8、caspase-9、p53、Cytochrome C表达上调,MDM-2表达下调。ADO联合HCY或5-Aza-CdR处理HepG2细胞均可抑制DNA(甲基化酶DNMT1、DNMT3a、DNMT3b)mRNA表达量。结论 ADO与HCY联合作用引起了细胞内甲基化改变,低甲基化作用激活了p53及线粒体等凋亡通路,最终导致肝癌HepG2细胞凋亡。
- 项梦琦刘丽璇邓巍周小涛陈沛锐郭益添叶艳清蒲泽锦吴灵飞
- 关键词：腺苷同型半胱氨酸甲基化细胞凋亡DNA甲基化酶
- 胃舒散对大鼠慢性胃炎的治疗作用被引量：5
- 2007年
- [目的]研究胃舒散对大鼠慢性胃炎的治疗作用,并探讨其机制。[方法]用2%水杨酸钠结合饥饱失常等综合因素诱发大鼠实验性慢性胃炎模型,观察不同剂量胃舒散对其治疗作用。采用光镜和扫描电镜观察胃的组织学改变,用滴定法测定胃液游离胃酸,化学发光法测定胃组织超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)水平。[结果]胃舒散(3.0 g/kg,1.5 g/kg)明显减轻了大鼠慢性胃炎程度,降低胃黏膜炎症指数并增加上皮层厚度,提高胃组织SOD活性,降低MDA水平(P<0.05),但对游离胃酸无明显作用。[结论]胃舒散对大鼠实验性慢性胃炎有治疗作用,其机制与抗氧化、保护胃黏膜细胞有关,但与胃酸分泌无关。
- 吴灵飞冯家琳苏剑东蒲泽锦李国平
- 关键词：胃舒散扫描电镜超氧化物歧化酶
- HIF-1α基因沉默联合丹参酮ⅡA抑制低氧人肝癌HepG2细胞增殖及其机制被引量：4
- 2019年
- 目的探讨缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)基因沉默联合丹参酮ⅡA(TanshinoneⅡA,TanⅡA)对低氧条件下人肝癌HepG2细胞增殖的影响及其机制。方法依据人HIF-1α基因信息筛选RNAi有效靶序列,设计慢病毒载体引物并构建质粒,包装慢病毒表达载体,转染HepG2细胞,沉默低氧条件下HepG2细胞株中HIF-1α基因表达。将细胞分为正常对照组(野生型HepG2细胞)、干扰对照组(HepG2细胞转染NC-shRNA)、干扰组(HepG2细胞转染HIF-1α-shRNA),应用化学缺氧法(150μmol/L CoCl2)加入培养液模拟肿瘤细胞低氧微环境,采用Western Blot检测各组细胞HIF-1α蛋白表达证实基因沉默效果,采用CCK-8检测5 mg/L TanⅡA处理对低氧条件下各组细胞增殖活性的影响,采用Western Blot检测TanⅡA处理对各组细胞内p53和p21 CIP1/WAF1蛋白表达的影响。结果(1)HIF-1α-shRNA慢病毒载体包装成功且转染效率高,低氧培养各组细胞24 h后,与正常对照组及干扰对照组比较,干扰组细胞中HIF-1α蛋白表达明显降低(P<0.01)。(2)TanⅡA能时间依赖性抑制低氧条件下各组细胞增殖,与正常对照组及干扰对照组比较,干扰组细胞增殖明显活性下降(P<0.01,P<0.05)。(3)低氧培养各组细胞24 h,与正常对照组及干扰对照组比较,干扰组细胞中p53和p21 CIP1/WAF1蛋白表达水平明显增高(P<0.05)。结论 HIF-1α基因沉默可增强TanⅡA对低氧HepG2细胞的增殖抑制作用,其机制可能与p53和p21 CIP1/WAF1蛋白水平上调有关。
- 李国平蒲泽锦刘丽璇项梦琦胡敏敏黄聪武吴灵飞
- 关键词：短发卡RNA缺氧诱导因子-1ΑHEPG2细胞低氧细胞增殖
- MEG3和腺苷对HepG2细胞自噬和增殖的影响被引量：2
- 2018年
- 目的:研究母系表达基因3(MEG3)过表达和腺苷对人肝细胞癌HepG2细胞自噬和增殖的影响,并探讨MEG3和腺苷影响HepG2细胞自噬的可能机制和抑制细胞增殖的效果。方法:常规培养HepG2细胞,分为对照组、MEG3组(MEG3慢病毒转染)、腺苷组(1 mmol/L腺苷处理)和MEG3+腺苷组(腺苷组中加入MEG3慢病毒转染)。Western blot检测LC3-Ⅱ、LC3-Ⅰ和哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)等蛋白的表达,MDC染色观察自噬体数量,CCK-8法观察细胞的活力,细胞计数仪检测活细胞数量。结果:与对照组比较,MEG3组和腺苷组中HepG2细胞内LC3-Ⅱ减少,LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值降低,mTOR表达增加,HepG2细胞的活力降低(P<0.05),自噬体减少。与MEG3组和腺苷组比较,MEG3+腺苷组中HepG2细胞内LC3-Ⅱ和LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值进一步降低,mTOR表达进一步增加,HepG2细胞的活力进一步降低,自噬体减少更加显著(P<0.05或P<0.01)。MEG3组和腺苷组中HepG2活细胞数在24～72 h较对照组均明显降低(P<0.01),在MEG3+腺苷组中降低更为明显(P<0.01)。结论:MEG3过表达和低浓度腺苷可激活mTOR通路,抑制HepG2细胞自噬和增殖。MEG3增强了腺苷对HepG2细胞的作用。
- 蒲泽锦李国平詹浩炼周小涛郭益添项梦琦刘丽璇谭辉吴灵飞
- 关键词：腺苷自噬哺乳动物雷帕霉素靶蛋白
- 泛素表达和蛋白酶体活性在胃癌及癌旁组织中的研究被引量：1
- 2009年
- 目的研究26S蛋白酶体水解活性及泛素在胃癌、癌旁组织与正常胃黏膜组织中的差异。方法对75例胃癌患者分别在胃癌、癌旁及远端正常黏膜组织取样进行研究。采用免疫印迹方法分析泛素表达,免疫荧光方法分析26S蛋白酶体活性。结果泛素表达及26S蛋白酶体活性在胃癌及癌旁组织中增强,均高于正常胃黏膜组织。胃癌中泛素水平(4.24vs3.27)及26S蛋白酶体活性(628.3vs431.8)均高于癌旁组织,差异有统计学意义。结论胃癌中泛素-蛋白酶体系统被异常活化,与胃癌的发生与进展有关。
- 蒲泽锦李国平冯家琳吴灵飞
- 关键词：胃癌泛素蛋白酶体
- KDM5C基因shRNA重组慢病毒载体的构建及其对肝癌HepG2细胞的增殖和迁移的影响被引量：1
- 2017年
- 目的制备干扰KDM5C基因重组慢病毒载体,观察干扰人KDM5C基因后对肝癌Hep G2细胞增殖、迁移及长链非编码RNA GAS5表达的影响.方法设计3对针对KDM5C基因短发夹型RNA干扰序列(short hairpin RNA,sh RNA)和1对阴性对照序列,退火后连接到p LKD载体上,经转化PCR阳性克隆筛选及测序鉴定.使用四质粒包装系统共转染293FT细胞包装重组慢病毒,慢病毒包装后用孔稀释法进行滴度测定.将慢病毒感染Hep G2细胞,q RT-PCR和Western blotting检测Hep G2细胞KDM5C的m RNA和蛋白表达.MTT法及细胞划痕实验检测转染Lv-sh KDM5C后细胞增殖及迁移能力,同时观察lnc RNA GAS5 m RNA的表达水平变化.结果P C R扩增和测序结果证明,成功构建L vsh KDM5C慢病毒载体.经包装产生的3组慢病毒载体滴度:Lv-sh KDM5C-1是4.95×108TU/m L,Lv-sh KDM5C-2是3.46×108 TU/m L,L v-s h K D M5C-3是3.08×108 T U/m L.与正常肝细胞相比,肝癌Hep G2细胞KDM5C表达明显增加.与未转染组及阴性对照组相比,3组Lv-sh KDM5C病毒感染Hep G2细胞后KDM5C的m RNA及蛋白表达量均显著下降(P<0.05);其中Lv-sh KDM5C-3组下降最为明显(P<0.05),因此选取Lv-sh KDM5C-3进行后续实验.MTT结果显示Lv-sh KDM5C-3转染肝癌Hep G2细胞后48 h和72 h细胞生长增殖均受到抑制(P<0.05).细胞划痕实验结果显示Lv-sh KDM5C-3中细胞迁移率明显低于阴性对照组(P<0.05).q RT-PCR结果表明干扰KDM5C后lnc RNA GAS5 m RNA表达显著升高(P<0.05).结论本研究成功构建了特异性沉默人KDM5C基因的sh RNA慢病毒载体.将其转染肝癌Hep G2后可有效抑制细胞增殖和迁移.我们首次发现干扰KDM5C还可增加长链非编码RNA GAS5的表达.
- 胡敏敏詹浩炼刘丽璇项梦琦蒲泽锦李国平吴灵飞
- 关键词：HEPG2细胞细胞迁移
- 丹参酮IIA对低氧条件下人肝癌HepG2细胞增殖、凋亡的影响及与HIF-1α、VEGF和野生型P53蛋白表达的关系被引量：23
- 2014年
- 目的:探讨低氧条件下丹参酮IIA(Tan IIA)对人肝癌Hep G2细胞增殖和凋亡的影响及其分子机制。方法:用氯化钴(Co Cl2)创建低氧模型,实验分为常氧对照组、低氧对照组和低氧+Tan IIA处理组。不同浓度的Tan IIA分别作用于低氧下人肝癌Hep G2细胞24 h、48 h和72 h,采用MTT法测定Tan IIA对低氧下Hep G2细胞增殖的抑制作用。不同浓度的Tan IIA分别作用于低氧条件下Hep G2细胞24 h和48 h后,Hoechst 33258染色法检测细胞核的形态学变化并计算凋亡率。不同浓度的Tan IIA作用于低氧条件下人肝癌Hep G2细胞48 h后,Western blotting检测低氧诱导因子1α(HIF-1α)、血管内皮生长因子(VEGF)和野生型P53的蛋白表达情况。结果:低氧条件下Tan IIA以时间和剂量依赖方式抑制Hep G2细胞的生长和增殖。Tan IIA作用于低氧下的Hep G2细胞后,可见典型的凋亡细胞形态学特征,细胞凋亡率呈时间、剂量依赖性的增加。Western blotting免疫印迹法显示常氧对照组的HIF-1α和VEGF表达较低,而低氧对照组的HIF-1α、VEGF蛋白表达较常氧组升高,低氧下随着Tan IIA浓度的升高,HIF-1α和VEGF蛋白的表达明显降低,野生型P53蛋白的表达随着Tan IIA浓度的升高而升高。结论:低氧条件下,Tan IIA能抑制肝癌Hep G2细胞增殖并诱导其凋亡,其机制可能与抑制HIF-1α和VEGF蛋白表达,上调P53蛋白表达有关。
- 刘丽璇吴灵飞邓巍周小涛陈锐沛项梦琦郭益添蒲泽锦李国平
- 关键词：丹参酮IIA低氧HEP
- 胃癌IκBα与核因子κB表达的研究
- 2008年
- 目的:研究IκBα与核因子κB(NF-κB)在胃癌组织中的表达,了解细胞内IκBα水平的变化对NF-κB活性的影响。方法:62例胃癌患者术后切取胃癌组织及癌旁正常胃黏膜组织,用免疫印迹法对胃癌组织及正常胃黏膜组织中IκBα与NF-κB表达进行配对研究。结果:59例胃癌组织中细胞浆IκBα水平表达下降,伴随细胞核NF-κB活性增强(P<0.01),3例胃癌组织中IκBα及NF-κB活性与正常胃黏膜组织中无统计学意义。结论:胃癌组织细胞浆内IκBα水平下降有利于NF-κB异常活化。
- 蒲泽锦张小燕冯家琳李国平吴灵飞
- 关键词：胃癌IΚBΑ核因子ΚB
