罗文雅 作品数:4 被引量:4 H指数:1 供职机构: 徐州医学院 更多>> 发文基金: 江苏省普通高校研究生科研创新计划项目 徐州市科技计划项目 江苏省高校自然科学研究项目 更多>> 相关领域: 医药卫生 生物学 更多>>
人可溶性TRAIL蛋白表达及纯化条件优化 2014年 目的:优化人可溶性TRAIL蛋白生产菌发酵及纯化条件,从而提高TRAIL的产量及活性。方法①探索6种不同培养液、培养液pH值、异丙基硫代半乳糖苷( IPTG)诱导浓度及时间,选择最佳发酵条件;②联合镍离子亲和层析及超滤法纯化人可溶性TRAIL蛋白。结果①人可溶性TRAIL的最佳发酵条件为pH7.4的YPD培养液,所用IPTG的最佳浓度为0.2 mmol/L,最佳诱导时间为6 h;②经镍离子亲和层析和超滤联合作用可得纯度极高的蛋白。结论成功完成了人可溶性TRAIL发酵及纯化条件的优化,为今后大量提取TRAIL蛋白奠定了基础。 赵金金 徐志辉 胡磊 罗文雅 胡威 尤红娟 李向阳 颜超 郑葵阳 汤仁仙关键词:TRAIL 原核表达 纯化 特异性的shRNA抑制c-Jun蛋白表达对HepG2细胞增殖和迁移的影响 2015年 目的:构建c-Jun特异性的shRNA及研究其抑制c-Jun蛋白表达对人类肝癌细胞HepG2增殖和迁移的影响。方法根据c-Jun编码序列设计并构建shRNA质粒,利用LipofectamineTM 2000转染HepG2细胞,荧光显微镜观察转染效率。 Western blot检测其对c-Jun蛋白表达的影响。 CCK-8增殖实验、平板克隆形成实验观察HepG2细胞的增殖情况,transwell和划痕愈合实验方法观察细胞的迁移情况。结果构建了c-Jun小干扰质粒shRNA-1和shRNA-2。荧光显微镜观察到shRNA质粒在HepG2细胞转染效率约在80%。 Western blot显示shRNA-2小干扰质粒对c-Jun抑制效果要强于shRNA-1小干扰质粒。功能实验结果显示,与阴性对照组相比,shRNA-2能显著抑制HepG2细胞的增殖、克隆形成及其迁移能力(P均<0.05)。结论成功构建了对c-Jun有效shRNA干扰质粒,下调c-Jun的表达能够明显抑制肝癌细胞的增殖和迁移,为进一步研究c-Jun在肝癌中的作用及相关机制提供了工作基础。 罗文雅 周凯 胡磊 李向阳 孔凡运 尤红娟 汤仁仙关键词:HEPG2细胞 增殖 迁移 人肝癌细胞LASP1启动子的克隆及其核心调控区域的初步鉴定 2016年 目的:克隆人肝癌细胞的LASP1基因的启动子区域并找出该基因启动子的核心调控区域。方法:提取肝癌Hep G2细胞总DNA,PCR扩增不同长度的LASP1启动子片段,克隆至PGL3-Basic载体中构建重组表达载体PGL3-P1(2059 bp)、PGL3-P2(1123bp)、PGL3-P3(909 bp)、PGL3-P4(574 bp)和PGL3-P5(159 bp),转化入大肠埃希菌(E.coli)DH5α中,提取质粒经双酶切、PCR及测序鉴定阳性克隆并测序。将构建的重组表达载体、PGL3-Basic载体分别与内参质粒PRL-Tk共转染Hep G2细胞,48 h后经双荧光素酶报告基因检测试剂盒检测其活性。结果:PCR结果、双酶切结果以及DNA测序结果表明成功构建了LASP1启动子荧光素酶报告基因载体;双荧光素酶报告基因检测结果显示,与PGL3-Basic组相比,重组载体PGL3-P1、PGL3-P2、PGL3-P3、PGL3-P4均具有较强的启动子活性(P<0.01),其中,PGL3-P4的活性最强。结论:成功构建了人肝癌细胞不同截断长度的LASP1基因启动子荧光素酶报告基因载体,确定了LASP-1基因启动子的核心区域(-581 bp^-8 bp),为进一步研究LASP1基因在肝癌细胞中表达的关键调节因素及分子机制奠定了基础。 胡磊 罗文雅 胡威 尤红娟 孔凡运 李向阳 郑葵阳 汤仁仙关键词:启动子 荧光素酶报告基因 TRAIL联合水飞蓟素对人肝癌Huh7细胞凋亡的影响 被引量:4 2014年 目的探讨肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)联合水飞蓟素(Sili)对人肝癌Huh7细胞凋亡的影响。方法 CCK8法检测细胞增殖抑制;分光光度法检测细胞caspase-3、caspase-8、caspase-9相对活性;Western blot检测细胞表面死亡受体4(DR4)、死亡受体5(DR5)的表达。结果 Sili与TRAIL联合作用Huh7细胞后,联合用药组与对照组及单独用药组相比,Huh7细胞的增殖率明显下降;caspase-3、caspase-8、caspase-9的相对活性明显提高。Sili作用Huh7细胞后能明显提高DR4、DR5蛋白表达。结论 Sili可通过上调死亡受体DR4、DR5表达而促进TRAIL诱导的Huh7细胞凋亡,为肝细胞癌的临床治疗提供了新的思路和方法。 徐志辉 赵金金 尤红娟 胡磊 罗文雅 李向阳 郑葵阳 陈明 汤仁仙关键词:TRAIL 水飞蓟素 肝细胞癌 凋亡