程晨
- 作品数：7 被引量：27H指数：3
- 供职机构：石河子大学生命科学学院农业生物技术中心重点实验室更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家科技重大专项兵团博士基金更多>>
- 相关领域：生物学农业科学更多>>
- 转天山雪莲冷调节蛋白基因烟草的获得及其抗寒性鉴定被引量：9
- 2012年
- 从已建立的天山雪莲cDNA文库中随机挑取单克隆,采用通用引物M13扩增出基因序列并测序,然后将该序列在GenBank中进行比对,根据该序列设计特异引物进行PCR,最终获得了冷调节蛋白基因siCOR的完整开放读码框(ORF);构建植物表达载体,通过农杆菌介导法获得转基因烟草,用RT-PCR对转化烟草进行鉴定,收取种子后筛选出纯合的T3株系,并通过冷冻胁迫进行抗寒性分析。结果表明:(1)siCOR大小661bp,与禾本科植物粳稻的冷调节蛋白基因一致性最高(65.04%)。(2)与野生型植株相比,转siCOR基因烟草均叶片浓绿、无分支侧芽,生长快;在冷冻胁迫条件下,转siCOR基因的烟草叶片相对含水量、PSⅡ相对量子产率降低幅度、相对电导率和丙二醛含量的升高幅度均低于野生型烟草植株,而且转siCOR基因烟草植株叶片出现萎蔫症状的时间较迟、程度较轻,受到的伤害也较轻。研究发现,在冷冻胁迫条件下,转siCOR基因烟草植株表现出良好的生理和生长优势,显示出了较强的抗寒特征。
- 郭新勇程晨王重王恒良喻娜王爱英祝建波
- 关键词：天山雪莲烟草抗寒性
- 转铜绿假单胞杆菌KatB基因烟草获得及其抗逆性鉴定
- 2011年
- 以NC 89烟草(Nicotiana tabacum)为材料,通过农杆菌介导法获得转铜绿假单胞杆菌(Pseudomonas aerugi-nosa)KatB基因植株,利用PCR和RT-PCR对转化烟草进行鉴定,最后通过水分胁迫、盐胁迫、过氧化氢胁迫进行抗逆性分析。结果表明:与野生型植株相比,在缺水条件下的第13 d,300 mmol/L的NaCl胁迫条件下第20 d和0.3mmol/L的H2 O2胁迫条件下第33 d,转KatB基因烟草的叶片相对含水量、伤害率、过氧化氢酶(CAT)、丙二醛(MAD)、光系统Ⅱ(PSII)相对量子产率各种生理指标都显著优于野生型(WT)烟草,转KatB基因烟草表现出了较强的抗逆性,说明KatB基因在抗逆基因工程方面具有较好的应用前景。
- 喻娜程晨孙辉徐登献祝建波
- 关键词：铜绿假单胞杆菌烟草抗逆性
- 转新疆雪莲去饱和酶基因sikSAD重组酵母低温和酒精耐受性分析被引量：3
- 2011年
- 根据GenBank收录的sikSAD基因序列,采用反转录PCR技术从新疆雪莲(Sasussured involucrata Kar.et Kir)中克隆了sikSAD基因,并构建了pYES2-sikSAD大肠杆菌/酵母穿梭表达载体,通过电击法转化酿酒酵母S288C菌株,并利用PCR和SDS-PAGE对转化酿酒酵母进行鉴定,最后通过低温胁迫和酒精胁迫进行抗性初步分析及方差分析。结果表明:低温胁迫实验中,转sikSAD基因酿酒酵母在低温条件下仍能存活,并且在温度恢复到28°C时能迅速生长,生长状态良好,不饱和脂肪酸油酸的含量有明显的变化。酒精胁迫实验中,其能耐受一定浓度的酒精,并且耐受能力比非转基因酿酒酵母提高了十几个百分点。可见,在低温胁迫和高浓度酒精条件下,转新疆雪莲sikSAD基因酿酒酵母表现出了优良的活性和生长优势,显示出较强的抗性特征,用分子手段改造酿酒酵母,为工业生产提供高质量的酿酒酵母奠定实验基础。
- 程晨郭新勇王爱英祝建波
- 关键词：SAD酿酒酵母
- 天山雪莲SiSAD基因与拟南芥AtFAB2基因转化烟草的抗寒性分析被引量：6
- 2018年
- 通过转基因烟草(Nicotiana tabacum)验证天山雪莲(Saussurea involucrata)?9硬脂酰-ACP脱饱和酶基因Si SAD与拟南芥(Arabidopsis thaliana)中同源基因At FAB2的抗寒性功能。利用农杆菌介导法将植物表达载体PSi SAD:At FAB2和PSi SAD:Si SAD导入烟草,然后将2种转基因和野生型烟草分别置于20°C、10°C、5°C、0°C及-2°C下处理2小时,检测其相对电导率、丙二醛(MDA)含量、叶绿素荧光参数(Fv/Fm)及脂肪酸含量。将-2°C处理2小时后的植株置于25°C培养1周进行生长恢复实验。结果表明,生长恢复实验中转Si SAD基因烟草的恢复效果显著优于转At FAB2基因和野生型烟草。在0°C和-2°C处理2小时后,转Si SAD、At FAB2基因型和野生型烟草的相对电导率和丙二醛含量呈现显著递增趋势;转Si SAD、At FAB2基因型烟草的Fv/Fm显著高于野生型烟草,其中,转Si SAD基因烟草的Fv/Fm显著高于转At FAB2基因烟草。转At FAB2基因型和野生型烟草的油酸(C18:1)含量随着温度的降低逐渐升高后降低并在0°C时达到最高值;而转Si SAD基因型烟草C18:1含量持续升高,并在-2°C时达到最高值,其含量分别是转At FAB2基因型和野生型烟草的1.58倍和1.7倍。以上结果表明,天山雪莲?9硬脂酰-ACP脱饱和酶基因Si SAD与拟南芥中同源基因At FAB2均可以显著增强非低温驯化烟草的抗寒性,但是Si SAD基因效果显著优于At FAB2。
- 陈建权程晨张梦恬张向前张尧王爱英祝建波
- 关键词：新疆雪莲抗寒性
- 拟南芥冷诱导型启动子CBF3驱动IPT基因在烟*草中的表达被引量：2
- 2012年
- 用PCR的方法获得拟南芥冷诱导型启动子CBF3和农杆菌Ti质粒上的IPT基因,构建由启动子CBF3驱动IPT植物表达载体,并经农杆菌介导将基因整合到烟草的基因组中,利用Kan筛选、PCR和RT-PCR检测,最终获得转基因的植株。通过对烟草的植物学性状和农艺学性状的分析发现,随着启动子CBF3驱动的IPT基因在烟草中的表达,使得植株性状发生很大的改变,如株型变为塔型,株高增高,节距增长,且有很多的分枝和侧芽,叶片明显增多,表现出短窄且平滑的性状,茎围、腰叶长和腰叶宽都减小许多,相应的最大叶面积、顶叶面积和叶质量也都下降,但叶的密度却有所增加。
- 郭新勇程晨张选祝建波
- 关键词：表型
- 天山雪莲冷调节蛋白基因siCOR转化烟草植株的抗旱性分析被引量：11
- 2012年
- 冷调节蛋白(cold regulated proteins,CORPs)是植物在冷驯化下产生的特异性蛋白,与植物的抗寒性密切相关。然而,大量研究表明,绝大多数植物冷诱导基因同样会响应水分胁迫。采用半定量RT-PCR分析天山雪莲(Sasussured in-volucrata)冷调节蛋白基因siCOR的表达,结果表明siCOR是一个受干旱胁迫诱导表达的基因。为研究siCOR基因是否与抗旱性相关,以siCOR转基因烟草为研究材料,利用水分胁迫处理进行抗旱性分析。结果表明与野生型(wild-type,WT)相比,转siCOR植株叶片萎蔫较迟且程度较轻,复水后恢复快且较完全;其叶片相对含水量和PSII相对量子产率的降低幅度、相对电导率和丙二醛含量的升高幅度均低于野生型烟草植株。采用PEG6000模拟干旱胁迫,发现转siCOR植株T3代种子的萌发率较高,主根生长的受抑制程度较野生型轻。以上结果表明,siCOR基因在植物对干旱胁迫的响应中起重要作用。
- 郭新勇程晨王爱英张煜星王重喻娜祝建波
- 关键词：抗旱性天山雪莲烟草
- 矮牵牛自交不亲和性基因sx的克隆及功能初步分析
- 2013年
- 利用NCBI、CODEHOPE、Primer Premier5.0等数据库和生物软件设计兼并引物,以矮牵牛花柱cDNA为模板,利用RT-PCR扩增到1条长为417 bp的序列,在GenBank中比对发现,该序列与SX基因相似性最高。然后以SX序列为模板设计特异性引物,RT-PCR扩增到1条全长为747 bp的目的片段,测序结果分析表明,该基因核苷酸序列开放阅读框全长660 bp,编码220个氨基酸,其中包括有22个氨基酸的跨质膜信号肽区,和5个保守区(C1-C5)以及2个高变区(Hva,Hvb),据前人研究所知,该基因具有S-核酸酶功能。同时,从番茄DNA中克隆到一长为717 bp的花粉特异性启动子LAT52。为了使SX基因能在花粉中发挥其S-核酸酶功能,去掉22个氨基酸跨质膜信号肽(命名为sx)之后,与番茄花粉特异性启动子LAT52嵌合构建植物表达载体并转化拟南芥。TTC染色结果表明,LAT52能特异性的在花粉中调控sx基因的表达,使花粉活力很低甚至没有活力,从而使转基因植株不育。
- 祝建波何黎邱红林陈泉闫甜甜程晨
- 关键词：矮牵牛克隆功能分析
