王运萍
- 作品数：5 被引量：2H指数：1
- 供职机构：西安交通大学医学院第一附属医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- GM-CSF基因修饰的卵巢癌细胞NuTu-19/GM-CSF的构建被引量：2
- 2008年
- 目的构建能分泌表达粒细胞-单核细胞集落刺激因子(GM-CSF)的卵巢癌细胞NuTu-19/GM-CSF。方法将T-h GM-CSF重组质粒转化入感受态大肠杆菌中,筛选出耐药性单克隆菌落送测序。利用PCR技术扩增出GM-CSF目的基因片段,将PCR产物连入pGEM-T easy载体,转化入大肠杆菌中扩增,用SDS碱裂解法提取Teasy-GM-CSF重组质粒,用限制性内切酶酶切Teasy-GM-CSF重组载体,连入经相同酶酶切的pLXSN反转录病毒载体中。用磷酸钙沉淀法转染PA317包装细胞系进行病毒包装,用含有病毒的上清液感染卵巢癌NuTu-19细胞,经G418加压筛选感染成功的NuTu-19/GM-CSF细胞,用免疫细胞化学和ELISA法检测NuTu-19/GM-CSF分泌表达GM-CSF蛋白的情况。结果T-h GM-CSF重组质粒测序结果与GenBank Accession#:NM_000758基因序列对比后确定为人类GM-CSF基因编码序列;PCR产物酶切电泳在Mark 400-500 bp中有一条带,符合GM-CSF基因序列长度;重组Teasy-GM-CSF质粒用EcoRⅠ、BamHⅠ限制性内切酶酶切后,电泳鉴定在400-500 bp之间有一目的条带,重组反转录病毒质粒pLGM-CSFSN酶切电泳有目的条带;G418加压筛选感染后的NuTu-19细胞,14 d后慢慢形成单克隆继续生长;免疫细胞化学检测到感染成功的NuTu-19细胞膜表面有明显的棕褐色颗粒沉淀,ELISA法检测细胞培养上清液中GM-CSF的质量浓度为150 pg/mL。结论成功构建了能分泌表达人GM-CSF蛋白的卵巢癌细胞NuTu-19/GM-CSF,为以后研究卵巢癌免疫治疗提供必备、有效、可靠的工具基础。
- 李奇灵王英王运萍冯彩霞高尚风
- 关键词：卵巢肿瘤免疫治疗
- 荷瘤宿主淋巴细胞体外活化后用于免疫重建免疫学指标变化
- 2010年
- 目的:荷瘤宿主淋巴细胞体外活化后用于免疫重建,辅以瘤苗免疫,体外检测免疫学指标变化情况。方法:以环磷酰胺处理雌性近交系荷瘤Fischer344大鼠,建立化疗后淋巴细胞减少(LP)模型;用同系荷瘤大鼠淋巴细胞体外活化扩增后对LP大鼠进行免疫重建,免疫重建24h内,用GM-CSF修饰的大鼠卵巢癌细胞株NuTu-19免疫,8～10d后采集肿瘤疫苗部位引流淋巴结(TVDLN),以流式细胞仪(FACS)分析细胞表型,检测MHC-II和CD86验证树突状细胞(DC)的增殖能力,分析FITC-CD4和PE-CD8的比例以此反映T细胞的激活情况,未成熟DC(iDC)对葡聚糖(FITC-Dextran)的吞噬能力,反映DC对抗原的处理和提呈功能。结果:荷瘤宿主淋巴细胞体外活化组TVDLN中,DC和活化T细胞的频数显著增高,iDC的能力显著增强。结论:荷瘤宿主淋巴细胞体外活化后于淋巴细胞减少期,进行免疫重建,辅以瘤苗治疗,可选择性扩增、活化抗原特异T细胞和DC,增强抗肿瘤免疫反应。
- 李奇灵冯彩霞高尚风马军王运萍王月玲王英
- 关键词：淋巴细胞减少免疫重建树突状细胞卵巢肿瘤
- 卵巢癌免疫治疗研究进展
- 2009年
- 生物学治疗作为卵巢癌治疗的第4种模式日益受到重视，包括细胞因子疗法、卵巢癌单克隆抗体免疫导向疗法、过继细胞免疫疗法、肿瘤疫苗疗法、肿瘤特异性主动免疫疗法、肿瘤基因疗法和联合免疫化疗等。免疫治疗作为卵巢癌生物学治疗的主要组成部分，是以解除免疫抑制，提高机体免疫力，消灭微小及复发病灶为目的的。近年来已取得了很多研究成果，许多制剂已进入临床试验阶段。该文对卵巢癌免疫治疗的一些进展、临床试验结果及发展中的一些探索进行综述。
- 王运萍李奇灵高尚风
- 关键词：卵巢癌肿瘤免疫免疫治疗生物学治疗
- 化疗后淋巴细胞减少期肿瘤疫苗免疫治疗卵巢上皮性癌的动物实验研究
- 2009年
- 目的探索化疗后淋巴细胞减少期行免疫重建及应用GM—CSF基因修饰的卵巢上皮性癌（卵巢癌）肿瘤疫苗过继免疫治疗方案增强抗肿瘤免疫反应的机制及效果。方法以环磷酰胺化疗引起大鼠淋巴细胞减少，并建立免疫重建大鼠模型，用活肿瘤疫苗GM—CSF／NUTU-19免疫大鼠模型，收集肿瘤疫苗免疫部位引流淋巴结，制备效应T淋巴细胞（TE），酶联免疫吸附试验测定TE分泌IL（白细胞介素）2、IL-4的能力，细胞内细胞因子染色法测定肿瘤特异性TE的频数，流式细胞仪测定TE对靶细胞的特异性细胞毒杀伤率。并将TE过继回输给腹腔荷卵巢癌的大鼠，观察其生存期。结果化疗-免疫重建-肿瘤疫苗免疫大鼠TE分泌的IL-2水平增高，为（65．7±4．0）pg／ml，IL-4分泌水平降低，为（277±49）pg／ml；细胞内细胞因子染色法结果提示，能分泌干扰素γ的CD4^＋T淋巴细胞频数增高，为（13．0±2．1）％；TE对靶细胞的杀伤率提高，为（86．5±1．1）％；经化疗-免疫重建-肿瘤疫苗免疫大鼠TE过继免疫治疗的荷瘤大鼠生存期延长，平均生存时间为（110±16）d。结论化疗-免疫重建-肿瘤疫苗免疫治疗能使肿瘤特异性TE频数增加、功能增强，提高肿瘤特异性杀伤能力，有助于改善肿瘤特异性TE细胞对肿瘤抗原弱刺激的反应性，增强抗肿瘤免疫反应。
- 李奇灵王运萍高尚风马军冯彩霞王月玲
- 关键词：癌症疫苗淋巴细胞减少
- GM-CSF基因修饰的卵巢癌细胞NuTu-19／GM-CSF的构建
- 目的构建能分泌表达 GM-CSF 的卵巢癌细胞 NuTu-19/GM-CSF。方法将 T-h GM-CSF 重组质粒转化入感受态大肠杆菌中,平铺于 AMP
- 李奇灵王英马军王运萍高尚风
- 文献传递
