王洪睿
- 作品数：6 被引量：14H指数：2
- 供职机构：清华大学医学院生物医学工程系更多>>
- 发文基金：国家攀登计划国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学更多>>
- 兔肌肌酸激酶的分离纯化及部分性质的测定被引量：2
- 1999年
- 本文提供了一个新开出的生物化学综合性教学大实验，完成本实验约需４天。实验中用到了多种重要的生化实验技术。
- 周广业陈坚刚张彤王洪睿周海梦
- 关键词：肌酸激酶纯化
- 氨基酰化酶在脲溶液中变性时构象变化速度与失活速度的比较被引量：2
- 1994年
- 应用了邹氏不可逆抑制动力学的方法,在变性剂存在的条件下,连续监测酶催化的底物反应过程,测定了氨基酰化酶在不同浓度脲溶液中失活的速度常数,并考察了底物的存在对酶失活的保护作用。同时,还比较了氨基酰化酶在不同浓度脲溶液中变性时失活和构象变化的速度。1mol/L,2mol/L脲变性时失活速度常数为为1.62×10^(-2)S^(-1)和2.05×10^(-2)S^(-1),但是酶分子的整体构象尚未发生明显变化。3mol/L脲变性时,失活速度常数为2.56×10^(-2)S^(-1),而变性速度常数为3.72×10^(-3)S^(-1)。失活速度比构象变化速度快大约一个数量级。在4mol/L,5mol/L,6mol/L脲溶液中变性时,酶分子快速失活,而其构象变化速度常数分别为5.27×10^(-3)S^(-1)。5.47×10^(-3)S^(-1),5.56×10^(-3)S^(-1)。可见,在相同浓度的脲溶液中,氨基酰化酶的失活速度明显快于酶分子整体构象变化的速度。上述结果表明,含有辅基金属离子Zn^(2+)的氨基酰化酶的活性部位较酶分子的整体结构也具有一定的柔性。
- 王洪睿王希成王希成张彤
- 关键词：氨基酰化酶失活构象
- DTNB标记的肌酸激酶的水解及氰解反应的研究
- 1993年
- 本文研究了DTNB标记的肌酸激酶(S,S′-二-TNB-CK)氰解反应,发现在Degani等人的氰解反应的条件下,同时有水解反应存在。当没有KCN存在时,在pH9.5的条件下,DTNB标记的CK可以迅速地被水解,并释放出TNB基团。水解反应呈双相的一级反应,在快相反应中每个酶分子大约释放一个TNB基团。当水解后的产物进一步与KCN反应时,每个酶分子大约又释放一个TNB基团,反应则呈单相的一级反应。上述结果表明在DTNB修饰酶中,两个被修饰的巯基分别处于二聚体肌酸激酶的每一个亚基的活性部位上,其中一个TNB基团在水解反应中迅速被释放出来而另一个以很慢的速度反应并很难反应完全。而水解产物进行氰解时,那个很难被水解的TNB基团此时被释放出来。这表明了肌酸激酶的两个亚基结合是不对称的,因而导致两个活性部位的巯基处于不同的化学微环境中。此外还发现在水解过程或氰解过程中伴随着TNB基团的释放,活性部位部分巯基被还原成游离巯基,同时活力也得到部分恢复并呈正相关作用。这进一步说明CK中可反应的半胱氨酸巯基是酶的必需基因,并处于酶分子的活性部位上。
- 何飚王洪睿王希成王希成
- 关键词：肌酸激酶化学修饰水解
- 氨基酰化酶分子中并不存在二硫键被引量：7
- 1995年
- 用NR/R双向对角线SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳结果表明氨基酰化酶分子中并不存在二硫键.MNP滴定氨基酰化酶的结果表明,酶分子中的10个半胱氨酸巯基有8个是可反应基团,另外2个内埋巯基在7mol/L盐酸胍溶液中被暴露出来,并可与MNP反应.DTNB测定的结果表明,酶分子中的10个半胱氨酸巯基有4个可反应巯基,6个DTNB所不能接触的巯基经7mol/L盐酸胍变性后,可以与DTNB作用.两种巯基试剂测定的结果均表明氨基酰化酶分子中含总巯基数为10个.这一数据与氨基酰化酶序列分析所得到的半胱氨酸残基数是一致的.因此进一步证实了氨基酰化酶分子中确无二硫键的存在.
- 王洪睿张彤张彤王希成周海梦
- 关键词：氨基酰化酶二硫键双向电泳
- 氨基酰化酶在低浓度脲溶液中的失活并非解聚所致
- 1994年
- 氨基酰化酶(Aminoacylasc,EC3.5.1.14)是一个含金属锌离子的二聚体酶,亚基分子量约为43 000.Zn^(2+)位于每个亚基的活性部位上,且为酶的活性所必需,过去的研究结果表明锌离子对酶活性部位结构有一定的稳定作用,最近报道的氨基酸序列表明,该酶分子中有16个色氨酸残基和18个酪氨酸残基.
- 王希成张彤王洪睿周海梦
- 关键词：氨基酰化酶解聚失活
- MNP对氨基酰化酶的不可逆抑制作用的研究被引量：3
- 1995年
- 用有机汞试剂MNP(2-chloromercuri-4-nitrophen01)对氨基酰化酶进行了修饰。在MNP存在的情况下,连续监测了氨基酰化酶催化底物的反应过程,发现MNP对氨基酰化酶的抑制作用为构象变化型,即在MNP与氨基酰化酶的必需半胱氨酸巯基反应之前,先使酶的构象发生了一个较快的变化,同时得到了这个构象变化的速度常数以及MNP与巯基反应的速度常数。
- 王洪睿王泽峰张彤周海梦
- 关键词：氨基酰化酶动力学水解酶
