- 牛转FAD3B基因胎儿成纤维细胞中内参基因的稳定性评估被引量：4
- 2012年
- 采用RT-PCR扩增亚麻种子(Linum usitatissimumLinn)FAD3B基因,构建不同启动子的两种重组真核表达载体pIRES-AcGFP-CMV-FAD3B和pIRES-AcGFP-CAG-FAD3B,通过qRT-PCR检测转基因细胞中FAD3B基因的表达水平。以不同过表达水平的转基因细胞为试验对象,评价9种候选内参基因ACTB、GAPDH、18S rRNA、UXT、PPP1R11、RPS15A、SF3A1、EEF1A2和HMBS的稳定性。根据GeNorm、NormFinder和BestKeeper 3种统计学算法得到的稳定性值对基因进行排序。结果显示,内参基因稳定性的综合排序为PPP1R11>EEF1A2>18S rRNA>RPS15A>GAPDH>HMBS>UXT>ACTB>SF3A1,其中PPP1R11和EEF1A2是最稳定的内参基因。稳定内参的选择可以更加准确地校正基因的表达水平,从而为阐述基因的功能奠定了坚实的基础。
- 王子东苏建国段彪杨春荣高广琦康峰张荣芳胡晓明扈廷茂李光鹏
- 关键词：转基因细胞内参基因GENORMNORMFINDER
- 亚麻脂肪酸去饱和酶基因FAD3B表达载体构建、鉴定与表达研究及牛转基因细胞中内参基因稳定性评价
- Omega-3多不饱和脂肪酸(ω-3PUFA)对人体健康非常重要，但哺乳动物自身不能合成ω-3PUFA。为了使哺乳动物体内表达去饱和脂肪酸酶，使动物体内能够实现从ω-6到ω-3PUAF的转化，动物转基因技术是有效且可行的...
- 王子东
- 关键词：荧光定量PCR转基因载体
- 牛卵泡抑素基因克隆及真核表达载体构建被引量：1
- 2011年
- [目的]克隆牛的卵泡抑素基因(Follistatin,FSTN)基因,构建真核表达载体。[方法]用Trizol法从牛的卵巢中提取总RNA,反转录成cDNA,用带有酶切位点牛FSTN的特异性引物扩增其完整编码区序列,连接到T载体、测序,序列无误后亚克隆入真核表达载体pIRES2-AcGFP1中,酶切及PCR鉴定载体。[结果]经酶切及PCR鉴定表明成功构建了真核表达载体pIRES2-AcGFP1-FSTN。[结论]成功构建了真核表达载体pIRES2-AcGFP1-FSTN,为促进肌肉生长的转基因优质肉牛品种培育奠定了基础。
- 康峰苏广华苏建国段彪王子东李光鹏
- 关键词：基因克隆真核表达载体构建
