王勤
- 作品数：18 被引量：91H指数：6
- 供职机构：四川农业大学生命科学与理学院更多>>
- 发文基金：国家大学生创新性实验计划四川省教育厅资助科研项目国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生文化科学更多>>
- 谈《动物学》教学中创新创业能力的培养被引量：3
- 2017年
- 探讨在本科生《动物学》课程教学中强化模式动物的介绍,培养学生创新性思维能力,贴近生活,面向实践,培养学生创业意识;改革课程教学和考核方法,建立课程网络资源教学平台和机考平台,保障教学质量。
- 温安祥武佳韵徐华明王勤朱广香解萌姜延志
- 关键词：《动物学》教学改革创新创业
- 伪狂犬病病毒Fa株gE基因的克隆与序列的比较分析
- 该文报道应用PCR扩增、基因重组连接方法,在Puc18质粒的EcoRⅠ、KpnⅠ位点上成功地克隆了伪狂犬病病毒Fa的gE基因.根据伪狂犬病病毒gE基因序列合成一对引物,应用PCR技术体外扩增gE基因,并对扩增产物进行酶切...
- 王勤
- 关键词：伪狂犬病病毒GE基因PCR扩增克隆
- 文献传递
- 两种色型黄粉虫酚氧化酶原的cDNA克隆、生物信息学分析及表达水平检测被引量：3
- 2013年
- 酚氧化酶是黑色素合成和昆虫免疫的关键酶,通常以无活性的酚氧化酶原形式存在。为给黄粉虫Tenebrio molitor遗传分化和免疫防御研究提供参考,本研究采用PCR和RACE技术克隆了黄、黑两种色型黄粉虫幼虫的酚氧化酶原基因Tm-ppo,对其cDNA序列及其推导的氨基酸序列进行生物信息学分析,采用实时荧光定量PCR检测其在两种色型黄粉虫不同发育阶段mRNA表达水平上的动态变化。结果表明:从黄、黑两种色型黄粉虫幼虫中克隆出的两个Tm-ppocDNA序列全长均为2199bp,碱基序列一致性为99%,包含一个2055bp的开放阅读框,编码684个氨基酸,它们的编码蛋白有3个氨基酸差异:第176位(P→A)、256位(V→A)和648位(I→M)。这两个基因分别被命名为Tm-ppo-1和Tm-ppo-2(GenBank登录号分别为JX987235和JX987234)。Tm-ppo-1和Tm-ppo-2编码的酚氧化酶原异构体蛋白(分别为Tm-PPO-1和Tm-PPO-2)存在一个可能的酚氧化酶原水解活化位点(R50～F51残基之间)和一个双铜结合中心(第196～239位残基和第344～411位残基);同时含有一个类似巯基酯区域的序列(第579～588位残基)及一个C-末端保守基序(第634～645位残基);但它们无氨基端疏水信号肽序列,也不存在跨膜区域。Tm-PPO-1和Tm-PPO-2的二级结构由大量的α-螺旋、β-折叠和无规则卷曲组成;三级结构分为前导域(第16～66位残基)、不相邻的功能域Ⅰ(第3～15位残基和第67～181位残基)、功能域Ⅱ(第182～419位残基)和功能域Ⅲ(第420～679位残基)4部分。此外,Tm-ppo-1和Tm-ppo-2在黄、黑两种色型黄粉虫的各发育期均有表达,并且不同发育阶段的mRNA表达水平呈现明显的变化规律:幼虫期﹥成虫期﹥蛹期。同时,环境温度对Tm-ppo-1和Tm-ppo-2的mRNA表达具有显著影响:与常温对照组(25～30℃)相比,42℃暴露24h和48h的两种色型黄粉虫幼虫、蛹和成虫的mRNA表达量明显下调。相同试验条件下,黑色型黄粉虫幼虫�
- 黄琼胡杰王勤
- 关键词：黄粉虫色型酚氧化酶原生物信息学MRNA表达
- 猪伪狂犬病病毒gE基因的研究进展被引量：31
- 2002年
- 猪伪狂犬病是猪的重要疾病之一。近年来 ,随着分子生物学研究的深入 ,对伪狂犬病病毒的研究也取得了显著的进展。本文着重对毒力基因gE基因的特性 ,基因的结构特点 。
- 王勤
- 关键词：伪狂犬病病毒GE基因
- 昆虫抗菌肽Gloverins的进化及抗菌差异性的研究被引量：1
- 2015年
- 本研究以抗菌肽Gloverins为研究对象,分析其抗性机理,并根据其编码区序列建立系统发育树,分析Gloverins的进化及结合生物信息学软件分析初步探索抗菌差异性产生的原因。结果表明:Gloverins与细菌或真菌表面的LPS,LTA,PG及昆布多糖相互作用是有效对抗微生物的必要条件。Gloverins的基因序列有一定的保守性,其中,玉米穗虫和棉铃虫同源性最高为98.4%,亲缘关系较近。家蚕中有4个完整的Gloverins基因,其中,Bm Glv1为其他3种同系物的祖先基因。大部分Gloverins对革兰阴性菌具有极强的杀灭作用,而甜菜夜蛾Gloverin(Se Glv)及烟草天蛾Gloverin(Ms Glv)由于其与Toll基因表达的依赖性,与LPS,LTA,PG和昆布多糖的结合位置,α-螺旋比例以及某些关键位点的氨基酸等因素,导致其对革兰氏阳性菌有抗菌活性,而对革兰阴性菌无活性的抗菌特性。
- 刘静刘丽丽李成磊王勤
- 关键词：抗菌肽抗菌活性进化分析
- 中国大鲵促甲状腺激素受体的克隆及序列分析
- 2013年
- 本实验以大鲵脑组织为材料,通过RT-PCR和RACE方法成功获得了中国大鲵Andrias davidianus促甲状腺激素受体(TSHR)cDNA全长序列。该序列编码585个氨基酸,具有典型的G蛋白偶联受体家族的特点,有4个N-糖基化位点,7个跨膜α螺旋。同源分析显示,大鲵TSHR与热带爪蟾、变色龙、人的TSHR同源性分别为70%、70%和67%。同时大鲵与其它脊椎动物TSHR在结构上存在一些差异,如缺乏前导序列、胞外部分序列缩短、没有富含亮氨酸的重复单位(LRRs)等,大鲵TSHR结构上的这些差异是否与其不同的生理功能相关有待进一步研究。利用邻接法对部分脊椎动物TSHR氨基酸序列构建分子系统树,结果显示有尾目大鲵为两栖动物中较早分化的一支,表明其进化地位较原始。RT-PCR组织分布分析发现,TSHR基因在大鲵的甲状腺外组织也有表达,其中性腺组织表达量最高,这可能暗示TSHR与大鲵的生殖调节有关。
- 王勤何青袁月华徐海龙李成磊
- 关键词：克隆甲状腺激素受体
- 猪繁殖与呼吸障碍综合症病毒蛋白结构与功能被引量：10
- 2005年
- 猪繁殖与呼吸障碍综合症是目前严重危害养猪业的一种传染病。近年来国内外对其进行了广泛深入的研究 。
- 王勤郭万柱何涛
- 关键词：蛋白结构基因结构
- 黄粉虫热休克蛋白70基因的克隆、序列分析与表达(英文)被引量：5
- 2013年
- 为给黄粉虫Tenebriomolitor抗逆机理研究提供理论依据,本研究采用PCR和RACE法从黄粉虫幼虫中克隆出一个热休克蛋白70基因Tmhsp70,并运用半定量RT-PCR法检测其在黄粉虫不同发育阶段的mRNA表达水平。结果表明:克隆出的Tmhsp70序列全长2282bp,具有一个富含A的115bp5'-非翻译区和一个1935bp的开放阅读框及一个富含A、T的232bp3'-非翻译区。5'-非翻译区含有7个热休克元件nGAAn,3'-非翻译区末端有长22bp的Poly(A)尾。Tmhsp70编码的黄粉虫热休克蛋白(TmHSP70)具有3个典型的HSP70特征基序(IDLGTTYS,IFDLGGGTFDVSIL和IVLVGGSTRIPKIQQ)和1个胞质HSP70末端特征基序(EEVD),无信号肽和跨膜区域,包含2个主要的结构域,即:N-端42kDa的高度保守ATPase功能域和C-端18kDa的保守多肽结合功能域。ATPase功能域的三级结构由2个大球形亚功能域组成,具有1个核苷酸结合中心;多肽结合功能域形成1个双层4股β-折叠片样的三明治结构和2个α-螺旋,内含1个多肽结合通道。此外,黄粉虫Tmhsp70mRNA的表达具有热激诱导和发育调控的特征。半定量RT-PCR分析表明,42℃热激1h的黄粉虫各发育阶段Tmhsp70mRNA的表达量上升了1.4～26.9倍。25℃下1日龄黄粉虫蛹中的Tmhsp70mRNA表达量要高于其余各发育阶段的累积表达量;42℃热激1h后90日龄幼虫中的Tmhsp70mRNA表达量最丰富,既高于30日龄和60日龄幼虫中的累积表达量,也高于15日龄和30日龄成虫中的累积表达量。这些结果为进一步研究黄粉虫热休克蛋白的结构、功能和表达调控及其与抗逆性的关系奠定了基础。
- 黄琼胡杰孙灵王勤
- 关键词：黄粉虫热休克蛋白生物信息学MRNA表达热激
- 中国大鲵Sox19基因全长cDNA序列的克隆及组织表达分析
- 2015年
- 采用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）及cDNA末端快速扩增（RACE）技术克隆了中国大鲵（Andrias davidianus）Sox19基因全长cDNA序列,并进行各组织间的表达分析。中国大鲵Sox19基因全长1290 bp,ORF长858 bp,编码285个氨基酸,位于39~109位的HMG-box是其主要功能区。氨基酸序列分析表明,其与舌齿鲈（Dicentrarchus labrax）、斑马鱼（Danio rerio）及红鳍东方鲀（Takifugu rubripes）的相似度分别为64%、58%、55%。采用邻接法对不同物种的Sox19编码区序列构建分子系统树发现：中国大鲵Sox19基因属于较早从鱼类分化出来的基因,表明Sox19基因从中国大鲵到鱼类的进化速度比较快。荧光定量PCR结果显示,Sox19在所有检测的组织中均有表达,且在心脏中的表达量最高,卵巢中次之,肾脏中的表达量略高于肠道。中国大鲵Sox19基因的发现打破了Sox19基因一直被认为是鱼类所特有基因的观点,填补了两栖类有关此基因的空白,为更进一步的了解Sox19基因在中国大鲵中的重要功能奠定了基础,同时Sox19基因还可作为研究中国大鲵早期胚胎神经系统发育情况的分子标记,为其他两栖类动物的研究提供借鉴。
- 刘静何青刘丽丽李成磊王勤
- 关键词：基因克隆
- 伪狂犬病病毒Fa株gE基因的克隆与序列的比较分析被引量：14
- 2003年
- 根据已发表的伪狂犬病病毒(PRV)的基因序列,设计合成一对引物PCL1和PCL2,以PRVFa株的DNA为模板成功地扩增得到预期的长约1 7kb的特异片段,经酶切鉴定,初步确定为gE基因。将扩增产物经KpnⅠ、EcoRⅠ消化形成粘末端克隆到pUC18质粒,得到了明显大于载体的重组质粒PpgE。重组质粒PpgE经酶切鉴定为含有PRV的gE基因,测序PpgE得到完整的gE基因片段,并与4株不同来源的毒株进行了比较分析。5毒株的gE同源性比较分析发现毒株间同源性最低也高达97%,这体现了gE基因的保守性。分析还表明Fa与TNL同源。同时99%的高同源性也显示Fa、Ea、SH可能是同一毒株。gE序列在1040-1410碱基的高同源性区域作为PRV的PCR检测或作为核酸探针是非常重要的。
- 王勤郭万柱徐志文汪铭书王小玉
- 关键词：伪狂犬病病毒GE基因克隆PCR扩增
