王丽珩
- 作品数：11 被引量：4H指数：1
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- p210bcr-abl限制性T细胞表位的预测及其特异性CTL细胞的检测
- 目的：预测及鉴定慢性粒细胞白血病抗原 p210的 HLA-A*0201限制性 T 细胞表位, 并检测慢粒患者体内表位特异性 CTL 细胞的频率。
- 王丽珩钱亚云张伟龚卫娟季明春
- 文献传递
- p210^(bcr-abl)抗原的T细胞表位鉴定及其特异性CTL细胞检测被引量：1
- 2009年
- 目的:探讨p210bcr-abl抗原的免疫原性,预测并鉴定该蛋白来源的HLA-A2限制性T细胞表位,并在慢性粒细胞白血病患者中检测其特异性CTL细胞分布。方法:首先利用生物信息学软件预测并选取2个p210bcr-abl来源的表位:BCR-ABL642与BCR-ABL926m;T2细胞亲和力实验鉴定短肽与HLA-A2分子的亲和力;然后制备分别锚合这2种表位的可溶性HLA-A2四聚体,流式检测术检测其特异性CTL细胞在CML患者外周血CD8+T细胞中的频率。结果:与健康人群相比,BCR-ABL642和BCR-ABL926m肽表位限制性CTL细胞的频率在CML患者均明显升高(P<0.01);而来自流感病毒短肽的特异性CTL细胞在两个群体中无统计学差异(P>0.05);另外,BCR-ABL642特异性CTL细胞的频率在CML慢性期和急变期之间有统计学差异(P<0.05)。结论:所选2种肽表位均具有免疫原性,可建立基于这2种短肽的免疫治疗措施。
- 张俊王丽珩龚卫娟钱亚云姜扬文季明春
- 关键词：CTL慢性粒细胞白血病
- 双表达外源性4-1BBL／RANTES的K562细胞活化外周血淋巴细胞的研究
- 目的:探讨双表达外源性4-1BBL／RANTES的K562细胞对T细胞、NK细胞的活化作用,为进一步研究人工抗原提呈细胞提供重要前提。方法:采用分子克隆技术,分别将4-1BBL和RANTES基因插入双表达载体pVITRO...
- 王丽珩曹正锋刘丹钱莉龚卫娟季明春
- 文献传递
- 双表达外源性4-1BBL/RANTES的K562细胞活化外周血淋巴细胞的研究
- 2007年
- 目的探讨K562细胞表达外源性蛋白4-1BBL/RANTES后,对T细胞、NK细胞有无活化作用,为进一步构建人工抗原提呈细胞提供前提。方法采用分子克隆技术,分别将4-1BBL和RANTES基因插入双表达载体pVITRO-2,命名为pV4-1BBL-RANTES。经测序鉴定后,利用脂质体介导的转染及潮霉素筛选,获得稳定双表达4-1BBL、RANTES分子的K562细胞(K562/4-1BBL/RANTES)。经流式细胞仪(FACS)分选后,K562/4-1BBL/RANTES细胞用丝裂霉素C处理,与外周血淋巴细胞孵育24,FACS检测淋巴细胞表面活化性受体CD69的表达;对NK细胞同时检测了活化性受体NKG2D的表达情况。结果受K562/4-1BBL/RANTES细胞刺激后,CD3+T细胞、CD4+T细胞、γδT细胞和NK细胞的活化性受体CD69的表达与未受刺激前相比,均有明显上调;但与单纯K562细胞刺激组相比,无显著差异。另外,CD8+T细胞CD69的表达及NK细胞NKG2D的表达无明显变化。结论将4-1BBL和RANTES共表达于K562细胞,不具备活化淋巴细胞的效应。
- 王丽珩张俊钱莉曹正峰龚卫娟季明春
- 关键词：4-1BBLRANTESK562活化
- 可溶性HLA-A2-IgGFc融合蛋白在昆虫细胞的表达及鉴定
- 2009年
- 目的利用杆状病毒-昆虫细胞表达体系制备可溶性HLA-A2与免疫球蛋白IgGFc段的融合蛋白。方法首先将可溶性HLA-A*0201和IgG3分子Fc段的cDNA基因插入杆状病毒表达载体pFastHTa,形成重组载体pFHT-sHLA-A*0201-IgGFc。将该重组载体转化DH10Bac大肠杆菌,sHLA-A*0201-IgGFc基因同源重组入菌体内杆粒(Bacmid)中。抽提阳性杆粒,转染昆虫细胞Sf9,72 h收集病毒上清。再将病毒上清感染Sf9细胞,96 h收集细胞并裂解,SDS-PAGE观察其表达。细胞裂解液经Ni+-NTA树脂纯化Western-blot法鉴定其蛋白质序列,间接ELISA法鉴定是否形成正确构象。结果融合蛋白不仅与HLAⅠ类分子的构象特异性抗体(W6/32)结合,还与羊抗人IgG抗体结合。结论所制备可溶性HLA-A2-IgGFc融合蛋白序列正确,并在体外形成正确空间构象。
- 王丽珩龚卫娟肖炜明丁岩冰田芳季明春
- 关键词：融合蛋白
- 双表达外源性4-1BBL／CD86的k562细胞活化外周血淋巴细胞的研究
- 目的:为肿瘤过继免疫治疗开发体外激活T细胞、NK细胞的高效途径,研究双表达外源性4-1BBL和 CD86的K562细胞刺激外周血淋巴细胞活化的能力。方法:采用分子克隆技术,分别将4-1BBL和CD86基因插入双表达载体p...
- 龚卫娟曹正锋刘丹王丽珩钱莉季明春
- 文献传递
- 双表达外源性4-1BBL／IL-15的K562细胞活化外周血淋巴细胞的研究
- 目的:为肿瘤过继免疫治疗开发体外激活T细胞、NK细胞的高效途径,研究双表达外源性4-1BBL和 IL-15的K562细胞刺激外周血淋巴细胞活化的能力。方法:采用分子克隆技术,分别将4-1BBL和IL-15基因插入双表达载...
- 曹正锋刘丹王丽珩钱莉龚卫娟季明春
- 文献传递
- 加载bcr-abl抗原肽的HLA-A*0201四聚体的制备和初步应用
- ＜正＞目的：选取来自 bcr-abl 融合蛋白的两个9 肽：A 肽（LLYKPVDRV）,B 肽（YLKALQRPV） （第一位的“S”改为“Y”,第2位的“S”改为“L”,增加其稳定性及亲和力）,分别加载至 HLA-A...
- 钱亚云王丽珩张伟龚卫娟季明春
- 文献传递
- 双表达外源性4-1BBL/IL-15的K562细胞活化外周血淋巴细胞的研究被引量：1
- 2007年
- 为肿瘤过继免疫治疗开发体外激活T细胞、NK细胞的高效途径,研究双表达外源性4-1BBL和IL-15的K562细胞刺激外周血淋巴细胞活化的能力。采用分子克隆技术,分别将4-1BBL和IL-15基因插入双表达载体pVITRO-2,命名为pV4-1BBL-IL-15。经测序鉴定后,利用脂质体介导的转染及潮霉素筛选,获得稳定双表达4-1BBL、IL-15分子的K562细胞(K562/4-1BBL/IL-15)。经流式细胞仪(FACS)分选后,K562/4-1BBL/IL15细胞和K562细胞分别用丝裂霉素C处理,与外周血淋巴细胞孵育24 h,FACS检测淋巴细胞表面活化性受体CD69的表达。对NK细胞不仅同时检测活化性受体NKG2D的表达,还用乳酸脱氢酶释放法观察NK细胞受不同刺激细胞作用后,细胞毒活性的变化。结果显示受K562/4-1BBL/IL15细胞刺激后,T细胞CD69的表达无明显变化。γδT细胞CD69表达增长5倍。NK细胞CD69表达增长6倍,而NKG2D的表达增加1.5倍;NK细胞受K562/4-1BBL/IL15细胞作用72 h后,细胞毒活性明显提高。提示双表达4-1BBL/IL-15的K562细胞能够高效激活γδT细胞及NK细胞,有望用于肿瘤的过继免疫治疗。
- 曹正锋万兵王丽珩刘丹龚卫娟季明春
- 关键词：4-1BBLIL-15K562活化
- 人工抗原递呈细胞K32/4-1BBL/CD86的制备及其功能的初步研究
- ＜正＞目的：为肿瘤过继免疫治疗开发体外激活 T 细胞、NK 细胞的高效途径,研究人工抗原递呈细胞 K32/4-1BBL/CD86刺激外周血淋巴细胞活化的能力,进一步在动物体内评价经此人工抗原递呈细胞活化后的 PBMC 对...
- 王海洋曹正锋王丽珩龚卫娟季明春
- 文献传递
