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FⅧ A1亚基His99Arg突变导致FⅧ超不稳定性及一期法和二期法检测FⅧ活性不一致的研究: 目的探讨FⅧHis99Arg突变患者FⅧ蛋白不稳定的分子机制并解释患者一期法和二期法FⅧ活性(FⅧ:C)检测结果不一致的原因。方法凝血功能筛查进行血友病表型的检测。一期法及二期法检测患者血浆FⅧ:C;将患者血浆在不同温度...; 游国岭秦欢欢王学锋丁秋兰奚晓东王鸿利

His99Arg突变患者血浆凝血因子Ⅷ活性的稳定性研究: 2013年; 目的探讨His99Arg突变致患者血浆凝血因子Ⅷ(FⅧ)活性检测结果变化大及一期法和二期法FⅧ活性检测结果不相符的分子发病机制。方法以凝固法检测先证者及家系成员凝血酶原时间(PT)、活化部分凝血活酶时间(APTT),FⅧ活性(FⅧ∶C)、FⅨ∶C等。基于APTT途径的一期法和基于发色底物法途径的二期法检测FⅧ∶C,测定患者血浆分别在37、25、4、-20及-80℃时的FⅧ∶C,测定56℃时患者血浆FⅧ∶C稳定性(一期法)及FⅧ蛋白的热稳定性(EILSA法);以长链PCR及序列特异PCR检测F8基因内含子22及内含子1倒位,对F8基因所有外显子及其侧翼序列测序;以PyMOL软件分析FⅧ突变蛋白的三维结构;构建His99Arg突变表达载体,转染HEK293T细胞后博莱霉素筛选稳定表达细胞株,测定培养上清FⅧ∶C稳定性。结果先证者血浆FⅧ∶C:一期法检测为14.7%,二期法检测为1.2%。和正常人相比,患者血浆在室温放置<2 h时FⅧ∶C迅速下降,>2 h后FⅧ∶C基本稳定在1%左右;在4℃孵育时FⅧ∶C下降的趋势和室温放置时基本相似;FⅧ∶C在37℃随孵育时间延长而明显下降,孵育10 min后FⅧ∶C下降了93.9%;不管在-20还是在-80℃,患者血浆放置1个月后,其FⅧ∶C基本完全丧失;56℃时患者血浆FⅧ∶C的半衰期仅为正常人的1/4(2 min/8 min);在56℃时患者FⅧ稳定性下降明显,重链和轻链解离速度是正常人的3倍(2 min/6 min)。F8基因分析发现患者存在g.30716A>G突变而导致His99Arg氨基酸改变;三维结构模型分析显示His99Arg突变后,Arg99残基与His1957及Ser1959残基间的距离由3.49和3.42分别变为4.19和2.39。体外表达研究显示培养上清液中的FⅧ具有与患者血浆FⅧ相似的不稳定表现。结论 His99Arg突变引起FⅧ空间结构发生变化和FⅧ重链和轻链解离速度加快。His99Arg突变后FⅧ∶C的稳定性明显下降,造成常规条件下FⅧ∶C检测结果变化大及一期法和二期法FⅧ∶C�; 游国岭王学锋丁秋兰秦欢欢许冠群张利伟奚晓东王鸿利; 关键词：DNA突变血友病A

ABO基因调控区变异对其表型的影响被引量：7: 2019年; 目的探讨ABO基因调控区增强子、启动子变异对ABO表型的影响。方法对4名来自上海儿童医学中心血型鉴定正反不符的患儿标本,采用ABO-Rh血型确认卡(DG Gel Confirm)、中性卡(DG Gel Neutral)、抗球蛋白检测卡(DG Gel Coombs)在全自动血型检测系统上做血清学血型鉴定、抗球蛋白试验和抗体筛查,采用PCR结合直接测序法检测患儿及其中1个家系的ABO基因增强子、启动子、第1—7外显子及其邻近内含子序列。结果4名患儿的红细胞分别与凝胶卡中抗-A、抗-B试剂反应出现弱阳性或双群现象(DP),其表型分别为ABweak、Aweak、Aweak、AweakB型。DAN测序:4名患儿基因型分别为ABO*A1.02/B.01、ABO*A1.02/O.01.02、ABO*A1.01/O.01.02、ABO*A1.02/B.01/O.01.04,同时ABO基因调控区增强子或启动子分别存在变异现象;2例为增强子微卫星拷贝数异常、其中1例伴启动子变异,2例为血型嵌合体引起增强子突变而导致的血型抗原弱表达。病例3患儿父母表型分别为A和B型,基因型分别为ABO*A1.02/O.01.01和ABO*B.01/O.01.02。结论ABO基因调控区对ABO血型的正常表达起着非常重要的作用,增强子异常或启动子的变异将导致ABO血型抗原的表达减弱;检测增强子序列也可以发现可能存在的ABO血型嵌合体。; 王静顾玉微游国岭王成云顾萍潘秋辉; 关键词：ABO血型启动子变异

F8基因大片段缺失所导致的一例重型血友病A的分子发病机制研究被引量：3: 2013年; 目的对F8基因大片段缺失所导致的重型血友病A患者进行基因断裂点分析，探讨其分子发病机制。方法筛查患者凝血功能相关指标，明确血友病A表型诊断。采用长距离PCR及序列特异PCR进行内含子22和内含子1倒位的检测，并对F8基因的所有外显子及其侧翼序列直接测序。基因步移的方法确定F8基因断裂点。断裂点特异双重PCR对携带者进行诊断。多重荧光PCR法检测6个微卫星DNA位点（F8Up226、F8Up146、F8Int13、F8Int25、F8Down48、DXS1073）多态性对家系进行遗传连锁分析验证。结果先证者FⅧ活性〈l％，诊断为重型血友病A。患者F8内含子22及内含子1倒位均为阴性。F8基因4～7号外显子多次PCR扩增后电泳未见相应条带，其余外显子测序未发现突变。基因步移PCR扩增产物经测序发现F8基因共缺失27685个碱基，并在断裂点融合处存在2个微小同源碱基，且插入7个碱基（CTCTrCC）。断裂点特异性双重PCR结果显示胎儿及该患者的女儿均为缺失携带者，与基因连锁分析结果相吻合。结论F8基因4—7号外显子缺失导致患者发生重型血友病A，微小同源介导的末端连接等机制可能介导了缺失的发生。断裂点特异双重PCR为携带者的诊断提供了一个可靠的方法。; 游国岭陆晔玲戴菁王学锋丁秋兰许冠群张利伟王鸿利; 关键词：血友病A 突变外显子多重聚合酶链反应

凝血因子缺陷症的基因诊断、发病机制及防治: 王学锋丁秋兰戴菁陆晔玲吴润晖梁茜吴希王鸿利蔡晓红游国岭; 项目所属科学技术领域属血液病学血栓与止血领域，内容涉及遗传性凝血因子缺陷症的基因诊断，分子致病机制及预防和治疗的基础与临床研究。主要技术创新内容及特点：遗传性凝血因子缺陷症是一类单基因遗传病，重型患者致残致死率100%。...; 关键词：; 关键词：基因诊断发病机制个体化治疗

法洛氏四联症患者心脏转录调控网络解析: ＜正＞背景心脏发育过程中基因会受到时间与空间上的精确调控,当正常基因表达收到干扰时往往会引发心脏发育异常从而导致天性心脏病（congenital heart defect, CHD）的产生。因此,了解先天性心脏病患者的基...; 张晓青施国丞游国岭祝忠群傅启华陈会文王波; 文献传递

先天性并指(趾)畸形的分子遗传缺陷机制研究: 游国岭郑昭璟杨海鸥张晓青耿娟傅启华

多指(趾)畸形的分子遗传缺陷机制研究: 游国岭傅启华王志刚

先天性并指(趾)畸形的分子遗传缺陷机制研究: 游国岭

F8基因新的异常内含子1倒位的分子机制研究: ＜正＞目的:本研究对1例新发现的异常内含子1倒位的家系进行临床诊断,基因诊断及致病机制的研究,并阐释新的异常内含子1倒位的重组机制。方法:应用长距离PCR及序列特异PCR进行内含子22和内含子1倒位的检测。多重荧光PCR...; 游国岭迟昆陆晔玲戴菁王学锋丁秋兰奚晓东王鸿利; 文献传递

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