温玲
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- 突变型Axin2对细胞增殖的影响及其机制的研究
- 2008年
- 目的Axin是新近发现的Wnt信号传导系统的抑癌基因,本文在体研究其羧基端缺失突变(mtAxin2)对细胞增殖的影响并探索其相关机制。方法采用pCMV-Flag-mtAxin2质粒瞬时转染293细胞,并用G418筛选稳定表达mtAxin2的细胞株;使用Dual-Luciferase报告检测系统检测Firefly和Renilla荧光酶活性,采用Trpan Blue染色方法检测细胞增值活性,用流式细胞仪检测mtAxin2对细胞周期的影响,应用Western blot方法检测mtAxin2对Wnt信号传导系统下游基因的影响,G0/1细胞同步化S期进入实验研究mtAxin2对细胞生长影响的机理。结果经G418筛选后在293细胞中获得的细胞株,western blot检测可见明显的mtAxin2蛋白表达;Western blot和Dual-Luciferase报告检测系统显示在稳定表达mtAxin2的细胞株中β-catenin蛋白水平增加,TCF活性增高;通过Trypan Blue排除实验计数绘制细胞生长曲线,显示mtAxin2促进细胞的生长;流式细胞仪检测发现在稳定表达mtAxin2的细胞株中S期细胞的比例较高。Western blot结果显示在稳定表达mtAxin2的细胞株中β-catenin蛋白水平上升的同时,磷酸化的β-catenin蛋白水平却下降,下游基因产物CyclinD1和cdc2表达也增加;G0/G1期同步化细胞释放后12h流式细胞仪检测发现稳定表达mtAxin2的细胞株中S期细胞比例明显增加,为293细胞的2～3倍。结论Wnt信号传导系统在细胞生长中起重要作用,mtAxin2通过cyclinD1促进了细胞的增殖,发挥癌基因的作用。
- 王凤玮温玲朱思伟王新卓尹晓东张超王贺桐刘万国
- 关键词：突变细胞增殖
