沈彬
- 作品数：8 被引量：9H指数：2
- 供职机构：吉林大学第一医院更多>>
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- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 抑癌基因TIP30对肾癌细胞系786-0的生长抑制作用被引量：3
- 2009年
- 目的:筛选含有外源性TIP30的人肾透明细胞腺癌细胞系786-0,探讨TIP30基因对786-0的生长抑制作用,寻找肾癌基因治疗的潜在靶点。方法:采用RT-PCR技术扩增TIP30基因,构建真核表达载体pcDNA3.1-TIP30,转染786-0细胞,利用RT-PCR及Western blotting检测稳定转染pcDNA3.1-TIP30载体、转染pcDNA3.1(+)空载体及未处理的786-0细胞中TIP30的表达,另通过MTT法检测转染后细胞增殖能力的变化,流式细胞仪测定细胞周期分布的变化。结果:与未处理的和转染pcDNA3.1(+)的786-0细胞比较,转染pcDNA3.1-TIP30的786-0细胞中TIP30基因的mRNA和蛋白表达水平均明显增加(P<0.05);未处理与转染pcDNA3.1(+)的786-0细胞中TIP30的表达水平比较差异无显著性(P>0.05)。转染pcDNA3.1-TIP30的786-0细胞生长抑制率明显高于未处理的和转染pcDNA3.1(+)的786-0细胞(P<0.01)。流式仪检测细胞周期,与未处理的和转染pcDNA3.1(+)的786-0细胞比较,转染pcDNA3.1-TIP30的786-0细胞G0-G1期细胞比例显著增加,S和G2-M期细胞比例降低(P<0.01)。结论:786-0细胞能够稳定表达外源基因TIP30;提高肾癌细胞中TIP30蛋白的表达,可抑制肿瘤细胞的生长;TIP30是肾癌基因治疗的潜在靶点。
- 胡敬海沈彬徐宏王春喜
- 关键词：TIP30基因基因转染抑瘤作用
- RNA干扰靶向抑制膀胱癌细胞株T24的Twist基因表达
- 目的:RNA干扰技术是近年来发展起来的一项基因沉默技术,它能特异性抑制内源性或外源性靶基因。这项新技术在医学领域的应用尤其突出,不仅可以应用于基础研究,还有望成为攻克肿瘤、艾滋病等新的治疗方法。尤其小片段RNA(SiRN...
- 沈彬王春喜
- 文献传递
- RNA干扰Twist基因对人膀胱癌T24细胞化疗敏感性的影响被引量：2
- 2009年
- 目的构建转录因子Twist基因的短发卡状RNA(shRNA)质粒,转染人膀胱癌T24细胞株后检测T24细胞对羟基喜树碱(HCPT)的敏感性。方法体外构建Twist基因shRNA的表达质粒,脂质体法介导将其转染入T24细胞。实验分为正常对照组、非特异性转染组和特异性转染组。采用RT-PCR法和Western印迹法检测转染后Twist mRNA及蛋白的表达。使用四甲基偶氮唑蓝法(MTT)及流式细胞术(FCM)测定Twist shRNA转染T24细胞后细胞对HCPT敏感性的改变。结果Twist shRNA转染组细胞Twist mRNA和蛋白的表达与其他两组相比明显下调(P<0.05);HCPT敏感性与正常对照组相比明显提高(P<0.05)。结论靶向Twist基因的序列特异性shRNA可增强T24细胞对HCPT的敏感性。
- 沈彬管旌旌胡敬海王春喜
- 关键词：RNA干扰羟基喜树碱TWIST基因
- RNA干扰沉默Twist基因对人膀胱癌T24细胞增殖的影响
- 2009年
- 目的研究RNA干扰沉默Twist基因对人膀胱癌T24细胞周期和增殖的影响。方法体外构建Twist基因的shRNA表达载体,Li-pofectamin 2000介导转染膀胱癌T24细胞,采用RT-PCR和Western印迹方法检测特异性shRNA对Twist基因沉默效果,转染后采用MTT法检测shR-NA对细胞增殖的作用;应用PI单染流式细胞术分析细胞周期的改变。结果Twist基因的shRNA表达载体有效下调Twist基因表达(P<0.05)。与对照组比较,细胞增殖明显抑制(P<0.05);同时引起细胞G1期阻滞,RNA干扰后,G1期细胞从(48.17±1.62)%增加到(74.34±3.24)%(P<0.05),S期细胞从(33.71±3.54)%减少到(11.58±1.02)%(P<0.05)。结论Twist-shRNA表达载体可以特异高效地抑制膀胱癌T24细胞Twist基因的表达,从而调控肿瘤细胞周期,抑制肿瘤细胞增殖。
- 沈彬管旌旌姚子明胡敬海王春喜
- 关键词：膀胱肿瘤TWIST基因RNA干扰细胞增殖
- 肾细胞癌及癌旁组织中TIP30蛋白的表达及临床意义被引量：3
- 2009年
- 目的探讨肾细胞癌组织中Tat结合蛋白(TIP30)的表达及其临床意义。方法采用S-P免疫组织化学染色法对65例肾细胞癌组织及其癌旁组织中TIP30蛋白表达进行检测。同时采用Western印迹方法检测22例肾细胞癌及其癌旁新鲜标本中TIP30蛋白的表达。结果免疫组化结果显示,TIP30蛋白阴性表达率在肾癌组中为49.2%(32/65),显著高于癌旁组织10.8%(7/65)(P<0.01)差异有统计学意义;TIP30蛋白的阴性表达在肾癌各病理类型中差异无统计学意义(P>0.05);TIP30蛋白在肾细胞癌中的阴性表达与浸润程度(P<0.01)、淋巴结转移(P<0.05)以及肾静脉癌栓有关(P<0.05)。Western印迹结果显示在77.3%(17/22)的肾细胞癌组织中有TIP30蛋白低表达。结论TIP30蛋白的阴性表达与肾细胞癌发生、发展有关;作为抑癌基因产物,TIP30蛋白可在蛋白质水平为临床估计病情及预后提供一个有意义的客观指标。
- 胡敬海沈彬王春喜
- 关键词：肾细胞癌免疫组化WESTERN印迹
- RNA干扰Twist基因对人膀胱癌T24细胞体外增殖和化疗敏感性的影响
- 目的:研究RNA干扰Twist基因对T24细胞体外增殖和化疗药物敏感性的影响。方法:构建重组表达质粒pGenesil-shRNA-Twist并导入人膀胱癌细胞系T24细胞株,逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)和Wes...
- 沈彬王春喜
- 文献传递
- RNA干扰Twist基因真核表达载体的构建与筛选被引量：1
- 2009年
- 目的:构建编码Twist mRNA的短发卡样RNA(shRNA)质粒表达载体,并筛选出基因沉默效果最明显的shRNA质粒表达载体。方法:以Twist mRNA编码区中第777位和第845位序列作为RNA干扰靶点,分别构建2个shRNA质粒表达载体和1个阴性对照质粒表达载体,构建后通过PCR酶切电泳和质粒测序进行鉴定。经鉴定后分别转染稳定表达Twist基因的膀胱癌T24细胞,RT-PCR和Western blotting分别从mRNA和蛋白质水平检测抑制效果。结果:构建的质粒表达载体PCR鉴定均可扩增出400 bp的目的条带,插入片段测序结果与合成的shRNA结果一致。靶向Twist基因的shRNA对膀胱癌T24细胞中Twist基因mRNA抑制率为90%,蛋白质抑制率为86%,两种干扰质粒中shRNA1干扰效果最明显。结论:成功构建了靶向Twist基因的shRNA质粒表达载体,其中抑制效果最为明显的shRNA质粒表达载体为pGenesil-shRNA1质粒。
- 沈彬胡敬海管旌旌王春喜
- 关键词：RNA干扰质粒TWIST基因
- 抑癌基因TIP30真核表达载体的构建和序列测定
- 2009年
- 目的构建抑癌基因TIP30的真核表达载体并进行序列测定。方法从人正常肾组织中提取总RNA,采用RT-PCR技术扩增TIP30的基因编码区序列,将PCR片段定向克隆至真核表达载体pcDNA3.1(+),并进行序列测定。结果提取人正常肾组织总RNA并经RT-PCR扩增后,产生特异性条带,位置在800bp左右,与预期相符;pcDNA3.1-TIP30用BamHI和EcoRI双酶切后产生2条带,均与预定位置相符;TIP30基因编码区序列与GenBank登录号AF039103文献报道的序列同源性为100%,目的基因与载体正确连接。结论成功克隆了抑癌基因TIP30的基因编码区序列,并构建了其真核表达载体pcDNA3.1-TIP30,为后续转染和表达的实验研究奠定了基础。
- 胡敬海管旌旌沈彬姚子明王春喜
- 关键词：TIP30真核表达载体克隆
