梁维
- 作品数：6 被引量：12H指数：2
- 供职机构：第四军医大学西京医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金陕西省科技攻关计划更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 转录因子SRF促进人腹膜间皮细胞的转分化
- 梁维娄未娟何丽洁王汉民
- 关键词：SRFE-钙粘素Α平滑肌肌动蛋白
- 血清反应因子促进人腹膜间皮细胞的转分化被引量：3
- 2014年
- 目的探讨血清反应因子(SRF)在人腹膜间皮细胞(HPMC)转分化中的作用。方法腹膜间皮细胞由腹膜透析(PD)患者透出液离心后进行培养,观察不同透龄患者的原代腹膜间皮细胞改变,并用免疫荧光细胞化学方法检测SRF及α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Snail、E-钙黏素(E-cadherin)的表达。细胞经高糖刺激发生转分化后,将SRF siRNA转染至细胞中使SRF下调,用免疫荧光细胞化学技术及Western blot法检测E-cadherin和α-SMA、Snail的表达。采用染色体免疫共沉淀(ChIP)及报告基因方法检测SRF与Snail的结合情况。结果无菌收集50例PD患者透出液,原代培养HPMC,随着透析时间的延长,细胞从铺路石样逐渐转变为成纤维细胞样;SRF表达显著增强时,间质标志分子α-SMA的表达增强,而上皮标志分子E-cadherin表达减弱。永生化的HPMC经高糖刺激72 h使其发生转分化后,用小干扰RNA使SRF沉默。与对照组相比,免疫荧光细胞化学染色显示SRF下调后,α-SMA、Snail的表达明显减弱,而E-cadherin表达明显增强;Western blot结果显示SRF的表达水平降低时,E-cadherin表达升高,而α-SMA、Snail的表达明显减少。ChIP结果提示,SRF可与Snail启动子区2个结合位点SRE1和SRE2结合,报告基因结果显示,SRF主要与SRE2位点结合并启动Snail的表达。结论 SRF在已发生间充质转分化的HPMC或腹膜纤维化时高表达,可能通过启动Snail表达来促进HPMC转分化。
- 梁维娄未娟车明文陈景荷何丽洁王汉民
- 关键词：上皮间质转分化E-钙黏素Α平滑肌肌动蛋白
- 血清应答因子抑制剂CCG-1423减轻单侧输尿管结扎大鼠肾小管间质纤维化
- 2015年
- 目的探讨血清反应因子(SRF)抑制剂CCG-1423对单侧输尿管结扎(UUO)大鼠肾间质纤维化的影响。方法将72只无特定病原体(SPF)级SD大鼠中54只行单侧输尿管结扎术(UUO组),另外18只为假手术组(sham组)。UUO组54只大鼠又均分为不注射抑制剂组(空白对照组)、注射0.015 mg/(kg·d)CCG-1423低剂量组[腹腔注射CCG-1423,0.015 mg/(kg·d)]、0.03 mg/(kg·d)CCG-1423高剂量组[腹腔注射CCG-1423,0.03 mg/(kg·d)]。每组分别于术后第3、7、14天,各处死6只大鼠并留取肾脏组织,应用Masson染色检测肾脏纤维化程度,免疫组织化学染色检测肾小管上皮细胞中血清应答因子(SRF)、磷酸化的血清应答因子(p-SRF)、α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、转录因子Snail、上皮性钙黏素(E-cadherin)的表达变化。结果在UUO大鼠模型中随着时间延长纤维化程度逐渐加重,SRF、p-SRF、α-SMA、Snail的表达逐渐增强,E-cadherin的表达逐渐下降。在腹腔注射CCG-1423后Masson染色显示肾脏纤维化减轻,SRF、p-SRF、α-SMA、Snail表达下降,E-cadherin表达增强。结论CCG-1423可抑制UUO大鼠肾组织中SRF的表达,并可减轻肾小管间质纤维化。
- 陈景荷何丽洁车明文梁维孙世仁王汉民
- 关键词：肾小管间质纤维化
- 转录因子Twist促进腹膜透析患者腹膜纤维化的作用机制研究被引量：9
- 2013年
- 目的探讨转录因子Twist对腹膜透析患者腹透流出液人腹膜间皮细胞(HPMCs)的作用及相关机制。方法将腹膜透析患者透出液离心后进行HPMCs培养,检测Twist、E-cadherin、α-SMA、Bmi-1的蛋白及免疫荧光表达。分别采用上调质粒pcDNA3.1-Twist和空载体pcDNA3.1转染HPMCs,检测Twist、E-cadherin、α-SMA以及Bmi-1的蛋白及免疫荧光表达。分别采用Twist的siRNA质粒和空载体pSlience转染转分化的HPMCs,检测Twist、E-cadherin、α-SMA以及Bmi-1的蛋白及免疫荧光表达。采用Bmi-1的siRNA质粒转染转分化的HPMCs,检测E-cadherin、α-SMA以及Bmi-1的蛋白及免疫荧光表达。结果免疫荧光及Western blotting检测结果显示,随着透龄增加,E-cadherin表达降低,Twist、α-SMA及Bmi-1表达增加(P<0.05)。与空载体组相比,HPMCs过表达Twist后,E-cadherin表达减弱,Twist、α-SMA及Bmi-1表达增加(P<0.05)。用小干扰RNA使Twist沉默后,E-cadherin表达增加,Twist、α-SMA及Bmi-1表达减弱(P<0.05)。用小干扰RNA使Bmi-1沉默后,E-cadherin表达增加,α-SMA、Bmi-1表达减弱(P<0.05)。结论 Twist参与了腹膜纤维化的发生发展过程,其作用部分是通过Bmi-1促进HPMCs的转分化实现的。
- 贾真姬丽华陈景荷梁维车明文何丽洁孙世仁王汉民
- 关键词：腹膜纤维化TWIST转录因子BMI-1钙黏着糖蛋白类肌动蛋白类
- 转录因子Sp1促进肾小管上皮间质转化的体外实验研究
- 2012年
- 目的:研究转录因子Sp1促进肾小管上皮间质转化(EMT)以及肾脏纤维化的作用和机制。方法:用30 mL/L浓度的低氧培养肾小管上皮细胞HK-2,采用Real-time PCR及Western blot法分别检测细胞中转录因子Sp1,E-cadherin和α-SMA的mRNA和蛋白表达水平。构建SP1基因的小干扰RNA载体,并将其转染低氧处理的HK-2肾小管上皮细胞。Real time PCR及Western blot法检测转录因子SP1对HK-2细胞EMT标志物的影响。结果:低氧处理后的HK-2细胞上皮标志物E-cadherin表达显著下降,而间皮标志物α-SMA的表达显著增加,提示HK-2细胞发生EMT。同时发现低氧处理后HK-2中转录因子Sp1的mRNA水平和蛋白水平表达逐渐增加。将Sp1的小干扰RNA载体转染HK-2细胞,得到下调Sp1表达的肾小管上皮细胞系。结果显示,与对照组相比,敲减Sp1的低氧处理的HK-2细胞中上皮细胞标志物E-cadherin表达未见显著下降,而间质细胞标志物α-SMA的表达未见显著增加,提示此时的HK-2细胞未发生EMT。结论:转录因子Sp1可促进HK-2肾小管上皮细胞的EMT。
- 周美兰娄未娟姬丽华梁维何丽洁
- 关键词：转录因子SP1EMT
- 转录因子SRF促进人腹膜间皮细胞的转分化
- 目的 探讨血清反应因子(Serum response factor,SRF)在人腹膜间皮细胞(human peritoneal mesothelial cells,HPMCs)转分化中的作用及机制.方法 1.将腹膜透析液...
- 梁维娄未娟何丽洁王汉民
