栗瑞兰
- 作品数：14 被引量：41H指数：5
- 供职机构：内蒙古农业大学动物科学学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金内蒙古自治区自然科学基金国家科技支撑计划更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>
- 葡萄糖对绒山羊精子冷冻保存及代谢的影响被引量：5
- 2018年
- 旨在研究葡萄糖对绒山羊精子冷冻保存及代谢的影响。本研究将混合后的精液样品,在含有不同浓度葡萄糖(0、28、56、84和112mmol·L^(-1))的冷冻稀释液进行冷冻-解冻,利用计算机辅助精液分析系统(CASAS)、流式细胞仪和酶标仪检测精子的运动性能、精子DNA完整性、顶体完整性、质膜完整性和精子中ROS和Ca2+水平,以及精子中ATP浓度、精子悬浮液中乳酸和丙酮酸浓度。结果表明,在冷冻稀释液中添加56mmol·L^(-1)葡萄糖可以显著提高绒山羊精子冷冻-解冻后的精子活力、完整顶体和完整质膜的精子比率(P<0.05),但各组间完整DNA的精子比率差异不显著(P>0.05)。56mmol·L^(-1)葡萄糖组精子细胞中ROS水平极显著高于其它各组(P<0.01);28和56mmol·L^(-1)葡萄糖组精子细胞中Ca2+水平极显著低于其它各组(P<0.01);与其它各组相比,56和84mmol·L^(-1)葡萄糖组精子细胞中ATP浓度极显著升高(P<0.01)。精液解冻后,在低葡萄糖浓度组(28~56mmol·L^(-1))的精子悬浮液中未检测到乳酸,而112mmol·L^(-1)组检测到大量乳酸(P<0.01);当冷冻稀释液中添加低浓度的葡萄糖(28~84mmol·L^(-1)),葡萄糖对精子悬浮液中丙酮酸的产生存在剂量依赖性作用,而高浓度(112mmol·L^(-1))组中丙酮酸产生减少(P<0.05)。综上表明,在冷冻稀释液中添加56mmol·L^(-1)葡萄糖可以促进绒山羊精子冷冻-解冻过程中的代谢,提高其冷冻保存效果。
- 栗瑞兰张通刘志红王瑞军王瑞军张家新
- 关键词：绒山羊精子冷冻保存葡萄糖乳酸
- 生长分化因子-9对牛卵丘细胞增殖的影响被引量：2
- 2014年
- 研究生长分化因子-9(growth differentiation factor-9,GDF-9)对牛卵丘细胞增殖的影响。采用MTT法检测不同浓度GDF-9对卵丘细胞增殖的影响,结果表明,GDF-9能促进卵丘细胞的增殖,且GDF-9与卵丘细胞增殖效应存在浓度梯度关系;在卵丘细胞增殖过程中,FSH在一定程度上与GDF-9发挥协同作用。在GDF-9和FSH的作用下,去除卵母细胞的卵丘细胞复合体(oocytectomized cumulus cell complexes,OOX)也可以保持较好的发育形态。实时定量PCR结果表明,随着GDF-9浓度的增加,卵丘细胞扩展相关基因PTX3、HAS2及PTGS2的表达量也增加。总之,以上的研究结果表明,GDF-9可以促进卵丘细胞的增殖,对卵丘细胞功能的发挥起着重要的作用。
- 欧阳效晴张春强栗瑞兰张通范晓梅高丽霞赵濛张家新
- 关键词：增殖生长分化因子-9
- C型钠肽预处理对牛卵母细胞体外成熟的影响被引量：3
- 2014年
- 旨在研究C型钠肽(C-type natriuretic peptide,CNP)预处理对牛卵母细胞体外成熟(In vitro maturation,IVM)的影响。以常规的牛卵母细胞体外24h成熟培养为对照,研究了CNP预处理牛卵母细胞6h,再进行成熟培养28h后(CNP预处理组)的牛卵母细胞成熟情况。结果表明,CNP预处理组的牛卵母细胞成熟效果明显提高,其受精后的囊胚率和囊胚细胞数都明显高于对照组((51.55%±2.50%),(156.2±11.0)和(28.13%±3.80%),(116.3±19.0),P<0.05);卵母细胞中线粒体分布由未成熟时的周边分布变为成熟时的均匀分布;而CNP预处理6h的卵母细胞中线粒体多呈半周边分布,在随后的28h成熟培养中也变为均匀分布;CNP预处理组的成熟卵母细胞线粒体DNA的拷贝数为(510 078.4±28 906.0),明显高于对照组的((416 558.5±51 743.0),P<0.05)。综上表明:C型钠钛预处理可以有效改善牛卵母细胞的体外成熟质量。
- 张春强欧阳效晴张通栗瑞兰范晓梅张家新
- 关键词：牛卵母细胞体外成熟线粒体
- GPx5在内蒙古绒山羊附睾中的表达被引量：2
- 2017年
- 为研究GPx5在内蒙古绒山羊附睾中的表达模式,对初情期、体成熟期、老龄期3个生殖生理阶段绒山羊附睾及睾丸中的GPx5从mRNA和蛋白水平进行了检测。结果显示各生殖生理阶段绒山羊睾丸中均未见GPx5表达,附睾中均有GPx5表达。各生殖生理阶段附睾表达区域及表达量存在差异:初情期,GPx5 mRNA和蛋白主要表达于附睾头部;体成熟期,附睾各区域GPx5 mRNA和蛋白的表达量极显著高于其他阶段,附睾起始部和附睾头部为主要表达区;老龄期,GPx5 mRNA和蛋白主要表达于附睾头部,但较体成熟期明显减少。免疫组化定位显示GPx5蛋白主要分布于附睾上皮细胞,而且各年龄阶段绒山羊附睾腔内精子上都有明显的GPx5阳性信号。研究表明绒山羊附睾GPx5的表达区域及表达量变化与动物生殖生理阶段直接相关。
- 范晓梅栗瑞兰栗瑞兰张通张家新
- 关键词：绒山羊附睾精子
- 绵羊腔卵泡中葡萄糖和生殖激素及其受体基因表达的相关性分析
- 2020年
- 通过分析绵羊不同直径腔卵泡中葡萄糖与生殖激素(FSH、LH和17β-E2)含量和相关受体基因表达的相关性,阐明不同腔卵泡发育中葡萄糖和生殖激素对卵泡生殖调控的机制。根据绵羊腔卵泡不同直径划分为小卵泡组(2.0~3.4 mm)、中卵泡组(3.5~5.4 mm)和大卵泡组(>5.5 mm)3组,收集其卵泡液及颗粒细胞(GCs)。采用AnnextinV-FITC测定小、中和大卵泡中GCs凋亡情况;利用放射免疫法检测小、中和大卵泡组中葡萄糖浓度及FSH、LH和17β-E2的含量;运用qRT-PCR技术检测小、中和大卵泡GCs中FSHR、LHR和G6Pase基因的转录水平。结果显示,不同直径绵羊腔卵泡中GCs凋亡无显著差异(P>0.05);随着腔卵泡直径的增大,卵泡液中葡萄糖浓度、FSH、LH和17β-E2的含量均升高;同时,GCs上FSHR、LHR、G6Pase基因的转录水平极显著升高(P<0.01)。不同直径腔卵泡中,葡萄糖浓度与FSH含量均呈显著正相关,仅在大卵泡中与LH呈显著正相关(P<0.05)。另外,葡萄糖浓度与FSHR、G6Pase基因的表达量呈显著正相关,只在大卵泡中与LHR表达量呈显著正相关(P<0.05)。随着绵羊腔卵泡生长,葡萄糖与生殖激素含量和相关受体基因表达量具有显著相关性,共同参与调节卵泡发育。
- 刘春洁栗瑞兰宋慧子王兆琛杜炜张家新
- 关键词：绵羊葡萄糖生殖激素受体基因卵泡发育
- 绒山羊附睾上皮细胞培养方法的建立及其生长特性被引量：8
- 2017年
- 本研究旨在建立一种简单易行、获取细胞纯度高的绒山羊附睾上皮细胞体外培养体系。10~12月龄绒山羊附睾头部分别采用酶消化法和改良组织块消化法进行原代培养,利用免疫细胞化学染色法和免疫荧光化学法对细胞进行鉴定,同时利用流式细胞仪和CCK法分别检测细胞纯度和增殖情况,在电镜下观察细胞超微结构。结果表明,两种培养方法所获的细胞均呈岛屿状克隆生长和较好的增殖能力,具有活跃的分泌和代谢功能;上皮细胞特异性的角蛋白18和附睾特异性的谷胱甘肽过氧化物酶5(GPx5)的表达以及流式细胞仪结果显示,两种方法所获细胞均为纯度较高的附睾上皮细胞,但改良组织块消化法获得原代细胞需要的时间长,酶消化法获得原代细胞时间短,获得的细胞量大。本研究结果为进一步研究绒山羊附睾上皮功能提供了良好的基础。
- 范晓梅张通栗瑞兰边小娜张家新
- 关键词：细胞培养酶消化法
- GPX5在成年绵羊附睾中的表达与蛋白定位被引量：8
- 2015年
- 【目的】研究谷胱甘肽过氧化物酶-5(glutathione peroxidase type-5,GPX5)在成年绵羊附睾的表达特征以及GPX5蛋白在附睾中的定位,为绵羊精子在附睾中抗氧化机制的研究提供理论依据。【方法】采取年龄相近的成年蒙古绵羊的附睾、睾丸和输精管。每一只公羊的附睾分别按照附睾头、附睾体和附睾尾进行分割。样品保存于-80℃冰箱,采用实时荧光定量PCR和Western blotting的方法,对成年绵羊的附睾、睾丸和输精管的GPX5表达量进行分析。将新鲜的组织样品各部分切取适合大小浸泡于4%多聚甲醛溶液中24h,按照石蜡切片的方法制作组织切片。用GPX5特异性抗体孵育组织切片,利用DAB显色试剂盒对阳性信号进行标记。【结果】实时荧光定量PCR结果显示,成年绵羊附睾头GPX5基因的表达量极显著高于附睾体和附睾尾(P<0.01),而在输精管和睾丸几乎不表达。Western blotting的结果显示,GPX5蛋白在成年绵羊附睾头高表达,在附睾体和附睾尾有微量蛋白存在,睾丸和输精管中未发现GPX5蛋白。这表明GPX5主要在成年绵羊附睾头表达;经过免疫组化染色分析,GPX5蛋白主要位于附睾头上皮细胞质以及静纤毛,附睾体和附睾尾中的GPX5蛋白主要集中在静纤毛。在附睾头、附睾体和附睾尾中的精子上以及附睾腔都可以观察到GPX5蛋白,表明GPX5蛋白从附睾上皮分泌到附睾腔中,随着精子在附睾中的运输与精子结合。【结论】在成年绵羊附睾中,GPX5主要由附睾头上皮细胞合成和分泌,在附睾管腔中与精子结合,为精子功能的正常发挥提供保护。
- 栗瑞兰张通范晓梅欧阳效晴张春强曹俊伟张家新
- 关键词：绵羊附睾基因表达蛋白定位
- 牛生长分化因子GDF-9基因真核表达载体的构建及过表达
- 引言/目的 生长分化因子9(growth differentiation factor9,GDF-9)是卵源性分泌因子,卵母细胞分泌的GDF-9作用于卵丘细胞,主要表现在对卵丘细胞增殖、分化、代谢、凋亡等生物学过程中,同...
- 欧阳效晴张春强栗瑞兰张通范晓梅张家新
- 生长分化因子9在牛卵丘卵母细胞复合体体外成熟过程中的表达被引量：6
- 2013年
- 旨在探讨牛卵丘卵母细胞复合体(Cumulus-oocyte complex,COCs)体外成熟过程中生长分化因子9(Growth differentiation factor 9,GDF-9)基因表达和卵丘细胞扩展的关系。运用实时荧光定量PCR技术检测GDF-9基因在牛卵丘卵母细胞复合体体外成熟过程中(0、6、12、18、24和28h)的相对表达变化,同时观察了卵丘细胞扩展情况。结果表明,GDF-9mRNA的表达量在牛卵丘卵母细胞复合体体外成熟过程中呈现一定的规律性变化,随着成熟培养的进行,其表达量逐渐增加,在成熟培养12h时表达量最高,但随后又逐渐降低,在成熟培养24h表达量最低;卵丘细胞在IVM 12h开始出现明显的扩散,而且随着成熟时间的延长,卵丘细胞的扩散程度在不断增加。研究结果表明:高水平的GDF-9mRNA表达与卵丘细胞开始扩散的时间一致,揭示GDF-9基因可能在牛卵丘细胞扩散和卵母细胞体外成熟过程中起着重要的作用。
- 欧阳效晴杨淑青张春强栗瑞兰张通张家新
- 关键词：GDF-9体外成熟
- GDF-9基因真核表达载体的构建及其对牛卵丘细胞扩展相关基因表达的影响被引量：1
- 2015年
- 为构建牛生长分化因子9(GDF-9)基因真核表达载体,观察GDF-9基因真核表达载体转染牛卵丘细胞后对卵丘扩展相关基因表达的影响,试验在质粒pcDNA4myc-his的多克隆位点插入GDF-9基因构建真核表达载体pcDNA4myc-his-GDF-9,用脂质体转染牛卵丘细胞,利用Western blotting检测了GDF-9蛋白的表达量,同时利用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)技术检测牛卵丘细胞中卵丘扩展相关基因的表达量。结果发现,转染了pcDNA4myc-his-GDF-9的牛卵丘细胞中检测到GDF-9蛋白的表达,且牛卵丘细胞扩展相关基因PTGS2、PTX3和HAS2的表达量显著提高(P<0.05),表明牛pcDNA4myc-his-GDF-9可有效地转染到牛卵丘细胞中,该试验结果为进一步研究GDF-9基因的功能奠定了基础。
- 栗瑞兰欧阳效晴张春强张通范晓梅张家新
- 关键词：GDF-9真核表达载体
