查晓军
- 作品数：4 被引量：15H指数：2
- 供职机构：北京协和医学院更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 人纤溶酶原K5基因的结构改造及其在大肠杆菌中的表达、纯化与鉴定被引量：2
- 2007年
- 目的改造人纤溶酶原Kringle 5(K5)基因,构建RGDRGD-liteK5融合表达质粒,并表达纯化所得RGDRGD-liteK5蛋白。方法以人纤溶酶原K5 cDNA为模板,通过PCR得到RGDRGD-liteK5基因片段,并克隆到质粒pGEX1-λT中,构建重组原核融合表达载体pGEX-RGDRGD-liteK5;在IPTG诱导下,观察融合蛋白在大肠杆菌Rosetta中的表达情况;利用亲合层析柱纯化表达产物,用Western blot分析鉴定表达产物。结果PCR扩增得到274 bp的片段,并成功插入pGEX1-λT质粒;含重组质粒的大肠杆菌在IPTG诱导下表达了特异性的融合蛋白,其分子量为36 kD;获得的融合蛋白经凝血酶酶切后,得到了分子量约为10 kD的RGDRGD-liteK5蛋白;Western blot证实了表达产物的正确性。结论成功地改造了人纤溶酶原K5基因,构建了重组融合表达质粒pGEX-RGDRGD-liteK5,并纯化了其表达产物。
- 查晓军王鹏李保国王健琪翟朝阳
- 关键词：KRINGLERGD序列
- 人纤溶酶原Kringle 5基因的结构改造及其在大肠杆菌中的表达、纯化与鉴定
- 背景与目的：病理性血管生成是肿瘤生长和转移的关键环节之一，因而阻断或抑制新生血管的生成是抗肿瘤治疗的有效策略。同时病理性血管生成也见于糖尿病视网膜病变、动脉粥样硬化、慢性风湿性关节炎等多种疾病。近年来人们对血管的生成机制...
- 查晓军
- 关键词：RGD序列抗肿瘤治疗整合素
- 文献传递
- TSC1/TSC2失活上调LDHB与下调CRABP1的机制与功能
- 膜受体酪氨酸激酶(RTKs)-PI3K/PTEN-AKT-TSC1/2-mTOR信号通路在控制细胞的生长、增殖、分化和存活等过程中起着重要作用。由于该通路包含有很多原癌基因如RTKs、PI3K、AKT和mTOR,和抑癌基...
- 查晓军
- 关键词：MTOR肿瘤
- 文献传递
- Lactoferricin B基因与几种变异克隆的构建及其在酿酒酵母中的表达与鉴定被引量：12
- 2007年
- 目的构建牛乳铁多肽(Lactoferricin B)的真核表达质粒pYES2/Lactoferricin B,实现其在酿酒酵母S.cerevisiae中的表达,并初步检测其不同变异的体外抗菌活性。方法通过分别合成Lactoferricin B基因两条单链的部分序列,让其互为模板、引物进行PCR扩增,得到Lactoferricin B与3种变异的基因序列。将它们克隆到穿梭质粒pYES2中,构建pYES2/Lactoferricin B及3种变异基因重组质粒,转化到大肠杆菌Top10中,让其大量增殖。提取重组质粒经纯化后将其转化到S.cerevisiae中,通过营养缺陷型筛选获得重组酵母菌并通过半乳糖诱导使其表达目的蛋白。经离子交换柱纯化收集目的蛋白后,通过体外抑菌实验比较Lactoferricin B及3种变异重组蛋白的抗菌活性。结果经PCR扩增检验、DNA测序表明成功构建pYES2/Lactoferricin B与3种变异基因重组质粒。提取诱导后的蛋白进行SDS-PAGE电泳及质谱检测,证实目的蛋白的存在,相对分子质量约为3.4×103。在大肠埃希菌及金黄色葡萄球菌的抑菌实验中观测到Lactoferricin B和A17-Lactoferricin B产生了抑菌圈。结论成功构建pYES2/Lactoferricin B及变异基因重组质粒,该重组质粒能在S.cerevisiae中诱导表达目的蛋白,为进一步研究其生物功能及抗菌活性奠定了基础。
- 冯永潜查晓军翟朝阳
- 关键词：抗菌肽基因序列变异酵母表达
