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杨芳: 作品数：13 被引量：28H指数：4; 供职机构：中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所更多>>; 发文基金：云南省中青年学术和技术带头人后备人才项目云南省科技创新强省计划项目更多>>; 相关领域：医药卫生生物学更多>>

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甲/戊型肝炎病毒重组抗原基因的克隆及表达被引量：1: 2008年; 将甲肝病毒vp1编码基因（aa 24-171）和戊型肝炎病毒ORF2基因（aa 431-615）通过一段编码柔性甘氨酸链（Gly4 Ser Gly4）的基因片断连接,获得编码HAV/HEV融合蛋白基因（AEAg342）.将该融合基因插入质粒pBV220,构建表达质粒pBV220-AEAg342.将pBV220-AEAg342转化入大肠杆菌BL21中进行表达,表达量约占菌体总量的20%,经离子交换层析纯化,目的蛋白纯度达90%以上.Western blot证实该蛋白能与甲肝及戊肝患者阳性血清发生特异性反映,为进一步开发双价疫苗和联合诊断试剂奠定了一定基础.; 奎翔李鸿钧谢天宏张光明刘馨易山杨芳彭梅马开利孙茂盛; 关键词：甲型肝炎病毒戊型肝炎病毒基因克隆

Neurturin基因的克隆及其在Vero细胞中的表达被引量：1: 2008年; 目的克隆Neurturin(NTN)基因,并在Vero细胞中表达。方法用RT-PCR方法扩增hNTN cDNA,并克隆至pcDNA3真核表达载体中,经Lipofectamine2000转染Vero细胞,挑选稳定表达克隆,用RT-PCR及免疫荧光分析鉴定,并对转染后细胞的形态及生长状况进行分析。结果重组质粒pcDNA3/hNTN转染Vero细胞后获得了稳定表达克隆,且有目的蛋白表达,转染后细胞形态和生长特性发生了一定改变。结论获得了稳定表达NTN蛋白的Vero细胞株,为其移植并进行帕金森病猴基因治疗动物实验奠定了基础。; 马开利孙茂盛施锐张莹杨芳奎翔谭振国李鸿钧; 关键词：VERO细胞克隆帕金森病

TRAIL及其受体的研究进展: TRAIL是最近发现的TNF家族的新成员,与Apo-1L(FasL)有较高的同源性.TRAIL有两类受体,一类是死亡受体,诱导肿瘤细胞或转化细胞凋亡;另一类是'诱骗'受体,保护正常细胞免遭TRAIL的诱导凋亡作用.TRA...; 杨芳中国协和医科大学医学生物学研究所刘红岩; 关键词：TRAIL 受体细胞凋亡肿瘤治疗肿瘤坏死因子; 文献传递

HBsAg/GM-CSF融合蛋白的克隆及其在毕赤酵母中的表达被引量：1: 2005年; 目的在毕赤酵母中表达HBsAg/GM-CSF融合蛋白。方法利用PCR扩增HBsAg和GM-CSF基因,通过15个氨基酸的连接肽将两个片段连接,获得融合基因S-GM,克隆入酵母穿梭质粒pPIC9K中。将重组质粒9K-S-GM电转化毕赤酵母后,G418筛选,甲醇诱导,HBsAg/GM-CSF融合蛋白表达。经SDS-PAGE检测表达水平,Western blot检测表达产物特异性。结果PCR扩增的片段与预期大小一致,HBsAg/GM-CSF融合蛋白在毕赤酵母中获得了表达。Western blot检测,该融合蛋白同时具有HBsAg和GM-CSF的特异性。结论该融合蛋白的获得为提高乙肝疫苗的免疫原性奠定了科学基础。; 席晓蓉李鼎锋孙强明杨芳易山孙茂盛; 关键词：HBSAG GM-CSF 融合蛋白克隆技术毕赤酵母乙型肝炎疫苗

丙型肝炎病毒多表位抗原在恒河猴中的免疫应答及保护性试验被引量：4: 2002年; 利用ＨＣＶ抗原多表位来研制ＨＣＶ疫苗是目前的一个新方向。本研　究利用ＨＣＶ的ＨＣＶ的５个保守表位串联，并加入破伤风类毒素上的一个Ｔ细胞激活位点，设计成　一个ＨＣＶ多表位抗原基因ＰＣＸ，在大肠杆菌中表达，用此蛋白免疫恒河猴，诱导猴体产生了较　高的抗体水平，滴度达１∶１０００以上，在免疫后的６０周抗体滴度仍达１∶４０以上。同时，在免　疫后６周用人ＨＣＶ阳性血清攻击猴子，免疫ＰＣＸ的猴子出现一过性ＡＬＴ升高，在攻击后三周内用　ＲＴ－ＰＣＲ检测到猴血清内ＨＣＶ的ＲＮＡ阳性。结果表明，免疫多表位的ＰＣＸ蛋白可以诱导机体产生　高水平的免疫应答。; 和绍清杨芳代解杰胡方黄建生李琦涵; 关键词：丙型肝炎病毒多表位抗原体液免疫恒河猴免疫应答

TRAIL及其受体的研究进展被引量：5: 2003年; TNF相关的凋亡诱导配体 (TNF relatedapoptosisinducingligand ,TRAIL)是最近发现的TNF家族的新成员 ,与Apo 1L(FasL)有较高的同源性。TRAIL有两类受体 ,一类是死亡受体 ,诱导肿瘤细胞或转化细胞凋亡 ;另一类是“诱骗”受体 ,保护正常细胞免遭TRAIL的诱导凋亡作用。TRAIL及其受体的发现为肿瘤的治疗提供了一个新的方向。; 杨芳; 关键词：TRAIL 受体细胞凋亡肿瘤治疗

sTRAIL基因的表达、纯化及其生物学活性的初步研究: 2003年; 在原核表达系统中表达重组人可溶性肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体 (sTRAIL)分子 ,纯化表达产物 ,并进行初步的生物学活性的研究中 ,通过提取外周血淋巴细胞总RNA进行RT PCR克隆sTRAILcDNA ,构建sTRAIL的原核表达载体 ,用限制性酶切和DNA测序进行鉴定 ,IPTG诱导表达。以发酵罐放大培养 ,SDS PAGE和Western blot确认表达 ,用亲和层析和阳离子层析纯化表达产物 ,使用L92 9、Qay肝癌、K5 6 2人白血病等肿瘤细胞鉴定活性。结果发现重组表达的sTRAIL融合蛋白占总蛋白的 39% ,单纯蛋白纯化后纯度达 95 % ,用抗人TRAIL多抗可以确认表达了TRAIL分子 ,能诱导几株肿瘤细胞凋亡。原核表达系统正确表达了TRAIL分子 ,并摸索了中试生产的条件。; 杨芳徐维明刘红岩龙海亭肖红剑李燕; 关键词：TRAIL 原核表达纯化生物学活性

腺病毒介导TRAIL基因治疗裸鼠皮下肺癌细胞移植瘤: 2007年; 为探讨重组腺病毒介导TRAIL基因通过瘤内注射治疗裸鼠皮下非小细胞肺癌细胞移植瘤的疗效及作用机制.以20只Balb/c裸鼠皮下接种建立裸鼠皮下人非小细胞肺癌细胞移植瘤模型,当瘤体直径达到0.5 cm时随机分成4组,分别为PBS组(Ⅰ)、空载体病毒Ad组(Ⅱ)、重组腺病毒Ad-TRAIL组(Ⅲ),sTRAIL组(Ⅳ).每隔2d注射1次,共注射4次.观察各组瘤体生长情况及免疫组化(TUNEL)法测定肿瘤组织细胞凋亡的情况.结果与对照组(Ⅰ),(Ⅱ)比较,第(Ⅲ),(Ⅳ)经治疗后肿瘤的生长速度明显减慢,肿瘤体积存在显著差异(P<0.05).TUNEL法检测原位肿瘤组织细胞凋亡,第Ⅲ,Ⅳ组的凋亡细胞明显比第Ⅰ,Ⅱ组多.重组腺病毒介导TRAIL基因能够通过引起细胞凋亡有效地抑制肿瘤的生长.; 杨芳李鸿钧李亮助易山施锐孙茂盛; 关键词：基因治疗重组腺病毒 TRAIL 裸鼠

HBsAg/GM-CSF融合蛋白在毕赤酵母中的表达及其免疫原性研究: 2005年; 为探索一种提高乙肝病毒表面抗原免疫原性的新方法,用PCR和基因重组技术构建HBsAg与GM-CSF的融合基因,并在毕赤酵母中分泌表达HBsAg/GM-CSF(S-GM)融合蛋白。表达产物用SDS-PAGE检测,W estern b lot分析,离子交换柱纯化后免疫昆明鼠,ELISA检测免疫小鼠血清中抗HBsAg的抗体水平。结果显示S-GM融合蛋白在毕赤酵母中获得了表达,离子交换柱一步纯化即可得到纯度达90%以上的S-GM。W estern b lot分析S-GM可分别与抗HBsAg及抗GM-CSF的抗体特异结合。ELISA检测发现第一次免疫后4w出现抗HBsAg的抗体,加强免疫后融合蛋白组几乎全部阳转,且抗体水平较HBsAg组(P=0.009<0.05)及HBsAg和GM-CSF的混合物组(P=0.032<0.05)高。HBsAg/GM-CSF融合蛋白能够在毕赤酵母中表达,且可增强HBsAg的免疫原性,为提高乙肝疫苗的免疫效果提供了新的思路与方法。; 席晓蓉易山杨芳李鸿钧刘馨孙茂盛; 关键词：HBSAG GM-CSF 融合蛋白毕赤酵母免疫原性

重组TRAIL腺病毒抑制肺癌细胞生长和诱导凋亡的作用被引量：5: 2007年; 目的:研究重组TRAIL腺病毒(Ad-TRAIL)对人非小细胞肺癌细胞株YTMLC、A549、H460抑制生长和诱导凋亡的作用,探讨Ad-TRAIL用于非小细胞肺癌基因治疗的可能性。方法:培养肿瘤细胞,分别加入Ad-TRAIL、sTRAIL,并设Ad、PBS作对照。倒置显微镜、吖啶橙染色后荧光显微镜、电镜进行细胞形态结构观察;肿瘤细胞生长抑制实验检测细胞存活率,绘制肿瘤细胞生长抑制曲线;DNA凝胶电泳、PI染色、TUNEL染色和流式细胞术检测肿瘤细胞的凋亡;集落形成实验观察肿瘤细胞集落形成能力。结果:Ad-TRAIL组、sTRAIL组与空腺病毒Ad组、PBS阴性对照组相比均明显抑制非小细胞肺癌细胞株YTMLC、A549、H460的增殖。DNA凝胶电泳出现DNA梯形条带;形态学观察发现Ad-TRAIL组的肿瘤细胞具有细胞凋亡的形态;Ad-TRAIL作用的YTMLC细胞有较高比例(8.55%)的亚二倍体凋亡峰,而Ad和PBS组分别为1.08%和0.47%;Ad-TRAIL组被TUNEL标记的细胞比例为10.6%,高于Ad组的1.13%。Ad-TRAIL组的集落数为28±7,而PBS和Ad对照组分别为257±18,193±12。结论:Ad-TRAIL对非小细胞肺癌细胞具有抑制生长和诱导凋亡的作用,Ad-TRAIL有可能用于非小细胞肺癌的基因治疗。; 杨芳孙茂盛易山谢天宏施锐李鸿钧; 关键词：肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体重组复制缺陷型腺病毒凋亡非小细胞肺癌

杨芳

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