杨玲玲
- 作品数：7 被引量：5H指数：2
- 供职机构：北京市红十字血液中心更多>>
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- 冷藏对血小板膜糖蛋白GPⅠbα末端糖基脱落的影响被引量：1
- 2015年
- 目的测定冷藏(4℃)保存48 h后血小板膜糖蛋白GPⅠbα末端糖基脱落情况。方法分别以一定浓度梯度的FITC-s WGA、FITC-RCA-1、FITC-ECA标记血小板,应用流式细胞仪检测,确定最佳工作浓度。检测冷藏保存48 h后血小板GPⅠbα末端唾液酸基及次末端半乳糖基脱落情况。结果 FITC-s WGA、FITC-RCA-1、FITC-ECA工作浓度分别为2μg/ml、2μg/ml、30μg/ml时标记效果好。冷藏保存48 h后GPⅠbα末端唾液酸基及次末端半乳糖基脱落较22℃常规保存明显增加,分别增至(156±18)%及(123±13)%,差异有统计学意义(P<0.01)。结论冷藏保存48 h可致血小板膜糖蛋白GPⅠbα末端糖基脱落增加。
- 杨玲玲石丽萍龚晓燕陈立任芙蓉
- 关键词：血小板保存血小板膜糖蛋白流式细胞术
- 噻唑橙光化学法对血浆中病毒灭活作用的研究被引量：3
- 2011年
- 目的探讨噻唑橙(TO)光化学法对血浆中伪狂犬病毒(PRV)和Sindbis病毒的灭活效果。方法配制TO-血浆溶液并测量其吸收光谱,制作照射光源;以PRV和Sindbis病毒为指示病毒,加入血浆以模拟病毒污染血浆;测量病毒灭活动力学曲线;做TO浓度(C)、光照强度(C)、光照时间(T)三因素三水平正交试验(n=4)以确定最优灭活条件;验证最优条件下裸照、血袋充氧前后的病毒灭活效果。结果 TO-血浆最大吸收峰位于476 nm处;病毒灭活动力学曲线显示:在TO 60μmol/L、光强1.06E-01 w.m-2.nm-1条件下,时间5 min,即可将血浆中绝大多数病毒灭活,此后进入平台期;正交试验显示:血浆中PRV及Sindbis病毒最优灭活条件均为:I=1.33E-01 w.m-2.nm-1,T=20 min,C=80μmol/L。在此条件下,灭活效果为裸照PRV≥6.13 LogTCID50(n=8),Sindbis病毒为(5.86±0.29)LogTCID50(n=8);血袋PRV(5.66±0.29)LogTCID50(n=4),Sindbis病毒(3.88±0.25)LogTCID50(n=4);充氧血袋PRV(6.32±0.55)LogTCID50(n=4),Sindbis病毒(6.00±0.35)LogTCID50(n=4)。结论 TO光化学法可有效灭活血浆中病毒,氧含量的增加可以提高病毒灭活的效果。
- 朱家明杨玲玲王卓妍任芙蓉
- 关键词：光化学法病毒灭活伪狂犬病毒辛德毕斯病毒
- 运用甘油磷酸氧化酶法测定冰冻红细胞解冻后残留甘油的含量
- 2016年
- 目的建立测定冰冻红细胞解冻洗涤后残留甘油含量的酶学方法测定工艺。方法进行甘油磷酸氧化酶法的线性范围测定、重复性、准确性（回收试验）、游离血红蛋白干扰试验,并比较不同样本处理方法（钨酸钠裂解法、三氯醋酸裂解法及制备后2 h直接取上清液法）对酶法检测甘油的影响;进行系列浓度甘油红细胞酶法测定结果与传统过碘酸钠滴定法测定结果比对。结果用GPO-PAP法检测甘油浓度在0.05~2.0 g/L时有较好的线性关系,r2=0.9994,Y=0.942 X＋0.0239;甘油含量为0.2 g/L、1.0 g/L的样本,批内CV值分别为2.68%、0.81%（n=20）,日间CV值分别为4.59%、4.37%（n=20）;甘油浓度从0.29~2.09 g/L间其回收率97.1%~100.8%,样本的平均回收率为99.0%;10 g/L游离血红蛋白对GPO-PAP法检测结果无干扰;3种样本处理方法所测得的系列浓度甘油红细胞样品及解冻去甘油红细胞制品（n=18）酶法测定结果一致（P〉0.05）;系列浓度甘油红细胞测定结果显示酶法测定比滴定法更准确,滴定法测定值偏高。结论甘油磷酸氧化酶法可用于冰冻解冻去甘油红细胞制品中残留甘油含量的测定,方法简便、快速、准确、重复性好。3种样本处理方法对GPO-PAP法检测甘油含量无影响。
- 夏红英石丽萍龚晓燕陈立杨玲玲任芙蓉
- 关键词：甘油酶法
- 噻唑橙光化学法对红细胞中病毒及细菌灭活作用的研究被引量：2
- 2012年
- 目的探讨噻唑橙(TO)光化学法对红细胞中病毒及细菌灭活效果。方法以伪狂犬病毒(PRV)和辛德毕斯(Sindbis)病毒为指示病毒,分别加入红细胞比积为20%的红细胞悬液中,TO孵育1 h后做476 nm光照射处理;研究病毒灭活动力学特征;做TO浓度(C)、光照强度(I)、光照时间(T)三因素三水平正交试验确定最优灭活条件;最优条件下检测裸照、密闭血袋中、密闭血袋充氧后的病毒灭活效果;最优条件下检测血液污染常见细菌小肠结肠炎耶尔森氏菌、金黄色葡萄球菌及表皮葡萄球菌灭活效果。结果病毒灭活动力学研究显示:在60μmol/LTO、1.06E-01 w·m-2·nm-1光强条件下,照射5 min可将大部分PRV和Sindbis病毒灭活,20 min灭活作用达峰值,分别为5.88和5.12 LogTCID50;正交试验显示:裸照时PRV及Sindbis病毒灭活最优条件均为I=1.33E-01 w·m-2·nm-1,T=20 min,C=80μmol/L;在此条件下,可灭活红细胞中PRV≥6.13LogTCID50(裸照,n=4)、(4.75±0.62)LogTCID50(密闭血袋,n=4)、(6.06±0.16)LogTCID50(密闭血袋充氧,n=4);可灭活红细胞中Sindbis病毒(5.41±0.12)LogTCID50(裸照,n=4)、(3.72±0.77)LogTCID50(密闭血袋,n=4)、(5.76±0.25)LogTCID50(密闭血袋充氧,n=4)。在此条件下细菌灭活效果:小肠结肠炎耶尔森氏菌(5.91±0.13)Log10、金黄色葡萄球菌>6.8Log10、表皮葡萄球菌>6.0 Log10。结论 TO光化学法可有效灭活红细胞中病毒,有氧情况下(裸照或充氧)病毒灭活效果好于密闭无氧。TO光化学法可有效灭活红细胞中细菌。
- 杨玲玲朱家明王卓妍宋美兰任芙蓉
- 关键词：光化学法红细胞病毒灭活伪狂犬病毒辛德毕斯病毒
- 噻唑橙光化学法病原体灭活对红细胞质量的影响被引量：3
- 2012年
- 目的评价噻唑橙(TO)光化学法病原体灭活处理对红细胞质量的影响。方法设实验组(n=10):悬浮红细胞经TO光化学法处理后,在4℃储存0、7、14、21、28、35 d时,分别测定pH、溶血率、钾浓度、ATP浓度、2,3-DPG浓度;对照组(n=10):悬浮红细胞未经TO光化学法处理,测定时间、项目同实验组。结果保存过程中实验组pH、2,3-DPG(μmol/gHb)及ATP(μmol/gHb)下降趋势均与对照组差异不大(P>0.05),实验组分别从0 d的7.03±0.07、9.43±1.14、4.23±0.58下降到35 d的6.57±0.06、0、2.40±0.49,对照组分别从0 d的6.95±0.09、10.67±1.17、5.18±0.64,下降到35 d的6.57±0.07、0、2.99±0.44;实验组和对照组35 d储存期末ATP浓度分别为0 d时的56.7%和57.7%。;实验组在储存期末,溶血率为(0.27±0.06)%,略高于对照组0.11±0.04%(P<0.05),仍满足溶血率≤0.8%的国标要求;钾外漏实验组较对照组增加,35 d时分别为(40.41±2.94)mmol/L和(28.33±3.34)mmol/L(P<0.01)。结论 TO光化学法处理对储存过程中的红细胞的质量影响较小。
- 朱家明杨玲玲任芙蓉王卓妍
- 关键词：红细胞病原体灭活红细胞质量光化学法
- 红细胞吸收噻唑橙动力学观察被引量：1
- 2012年
- 目的了解噻唑橙(TO)在红细胞保养液MAP液中的吸收光谱特性及其稳定性;了解红细胞(RBC)对TO吸附吸收、洗脱的动态过程。方法用MAP液配制120 mmol/L TO-MAP液,4℃避光保存,于配制后d 0、3、17,分别用可见紫外分光光度计进行350～600 nm扫描,观察其吸收光谱的变化;配制成TO-MAP-RBC悬液,于第0、2、4、12、24 h分别离心,取上清液测定其350～600 nm的扫描光谱;取储存2 d的TO-MAP-RBC液,离心弃上清,加生理盐水洗涤6次,每次间隔20 min,收集每次洗涤液,测定其350～600 nm扫描光谱。结果 MAP液中TO吸收主峰位于468 nm,在430 nm和520 nm有2处肩峰,储存0、7 d TO-MAP液扫描线几乎完全重叠,储存17 d扫描线略有降低;TO-MAP-RBC悬液0、2、4、12、24 h其上清液的扫描线有较大的降低;洗涤液的扫描光谱显示,第1～2次洗涤TO被洗脱的量较大,第3～6次洗涤TO被洗脱的量较小,并趋于平稳。结论 TO在MAP液中非常稳定,这为TO光化学病原体灭活提供了必要条件;TO可被红细胞吸附或吸收;TO洗脱的动力学过程提示,为降低TO对测定红细胞活性功能指标的影响,可增加洗涤次数及延长洗涤间隔。
- 杨玲玲朱家明王卓妍任芙蓉
- 关键词：红细胞光谱病毒灭活
- 血小板膜糖蛋白GPⅠbα末端重新糖基化的研究
- 2017年
- 目的建立冷藏(4℃)保存48 h血小板膜糖蛋白GPⅠbα(CD42b)末端半乳糖基化及唾液酸化的方法。方法冷藏保存48 h后,将半乳糖基化底物UDP-gal及唾液酸化底物CMP-Neu Ac加入血小板保存袋中,37℃复温1h,分别以FITC-s WGA、FITC-ECA标记血小板膜糖蛋白GPⅠbα末端β-Glc NAc及β-Gal糖基,流式细胞术检测糖基化效果。以FITC-CD42 b抗体标记血小板膜糖蛋白GPⅠbα,流式细胞术检测冷藏保存以及糖基化处理对于GPⅠbα蛋白量的影响。以金属蛋白酶(metalloproteinase,MP)抑制剂GM6001抑制MP对GPⅠbα的剪切,验证冷藏保存以及糖基化处理对GPⅠbα的量的影响,并阐明其机制。结果 FITC-s WGA、FITC-ECA标记结果显示,冷藏保存48h后37℃复温1h处理(无论是否加入糖基化底物)可致膜表面GPⅠbα末端糖基暴露(以FITC荧光强度表示)明显降低,FITC-s WGA荧光强度由1918.2±526.2降至1316.2±368.1,FITC-ECA荧光强度由8036.6±1466.3降至5672.6±1522.7(P<0.05);同时可致膜表面GPⅠbα蛋白量降低,由1582.9±123.1降至1380.7±136.7(P<0.05);加入GM6001后,GPⅠbα蛋白量恢复至对照组水平1602.2±153.2。相对荧光强度分析显示,冷藏保存48h与冷藏保存48h后37℃复温1h处理组FITC-s WGA/CD42b比值分别为2.23±0.56与2.11±0.38,FITC-ECA/CD42b比值分别为2.02±0.36与1.91±0.33,二组之间无统计学差异。结论冷藏保存48h后37℃复温1h处理可致血小板膜糖蛋白GPⅠbα量减少;减少系复温处理激活MP所致;通过此处理方式实现血小板糖蛋白GPⅠbα重新糖基化不可行。
- 杨玲玲任芙蓉石丽萍王卓妍朱家明夏红英
- 关键词：血小板膜糖蛋白金属蛋白酶
