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抗黄曲霉毒素B1单链抗体在大肠杆菌中的表达及优化被引量：4: 2009年; 【目的】继杂交瘤技术后,重组抗体技术是新一代的抗体制备技术。然而如何用原核系统中较多地表达具有生物活性的单链抗体,避免包涵体形成仍是一个需要探讨的问题。【方法】将目的基因scFv-H4克隆到载体pET22b上,分别转入大肠杆菌BL21(DE3)和Origami(DE3)中,通过改变诱导温度和IPTG浓度,比较具有生物活性的蛋白量以及包涵体的量。【结果】在BL21(DE3)中,pET22b能产生大量表达scFv-H4,而BL21(DE3)的含有trxA和gor双突变的衍生菌Origami(DE3)表达的scFv-H4的总量较少,但是具有生物活性的蛋白量较多(35 mg/L培养物),具有生物活性的蛋白比例也较BL21(DE3)高。另外IPTG的浓度对scFv-H4表达没有显著影响,而较高的诱导温度会促使表达的蛋白形成包涵体。【结论】在较低的温度下,pET22b能在Origami(DE3)能较好地表达具有生物活性的scFv-H4,减少包涵体的比例,为后续的抗体性质研究和改造奠定了基础。; 杨炼张艳红丁虎生王丽云陈卫张灏; 关键词：黄曲霉毒素单链抗体

应用抗黄曲霉毒素单链抗体检测酱油中黄曲霉毒素B1被引量：3: 2011年; 利用本实验室制备的抗黄曲霉毒素B1的单链抗体(ScFv),通过棋盘实验确定了抗原抗体的最适工作浓度,在此之上根据间接竞争酶联免疫法(ELISA)绘制标准曲线,检测酱油中AFB1的含量;通过改变样品的盐浓度及pH来确定其对ELISA检测结果的影响。研究结果表明,利用ScFv检测黄曲霉毒素的最小检测值为0.10ng/mL,平均加标回收率在84%～109%之间,本文建立的ELISA方法在pH5～8,盐浓度小于10%时较稳定。本文建立的利用抗AFB1的ScFv检测黄曲霉毒素含量的方法方便快捷,稳定性较好,并且成本较低,适合于食品中黄曲霉毒素的检测。; 刘蓉杨炼孙秀兰张根义张灏姚卫蓉

抗黄曲霉毒素B_1单链抗体的表达载体的比较被引量：4: 2010年; 目的:比较4种不同的pET载体在表达抗黄曲霉毒素B1(AFB1)的单链抗体(scFv)克隆的特点,确定用以表达scFv-H4的合适载体。方法:将目的基因H4分别克隆到载体pET20b、pET22b、pET28a和pET32a上,分别转入大肠杆菌BL21(DE3)或Origami(DE3)中,比较诱导过程中细胞的生长状况和诱导结束后细胞破碎液中scFv-H4的生物活性以及细胞各部分包涵体。结果:pET20b和pET22b能表达具有生物活性的scFv-H4,这些具有生物活性的蛋白主要存在于周质中;pET28a和pET32a不能表达有生物活性的scFv-H4,而pET32a仅能在细胞质中产生大量的包涵体。结论:pET22b可能是表达AFB1的单链抗体较优的表达载体。; 杨炼刘自琴刘蓉陈海琴陈卫张灏; 关键词：黄曲霉毒素单链抗体大肠杆菌 PET

肌苷酸和鸟苷酸的热稳定性和酸稳定性: 呈味核苷酸在食品行业应用越来越广泛,目前主要是用的肌苷酸二钠(IMP)和鸟苷酸二钠(GMP)以等比例配比混合的产物,但是IMP和GMP在呈味特征和稳定性方面有明显的区别,本文讨论了IMP和GMP在热和酸的影响下降解的现象...; 杨炼沈燕霆李英雨河凤洙赵建新; 关键词：肌苷酸鸟苷酸稳定性 PH值高温; 文献传递

幽门螺旋杆菌单链抗体的筛选及鉴定被引量：1: 2008年; 为了获得幽门螺旋杆菌特异性单链抗体scFv,通过噬菌体展示技术,首次直接用幽门螺旋杆菌细胞Hp对噬菌体单链抗体文库Tomlinson进行单链抗体的筛选,经5轮筛选后,通过ELISA方法检测,从随机挑选的96个克隆中获得了8株阳性克隆。再分别将阳性克隆与10种常见菌进行ELISA的交叉反应,最终得到1株特异性表达抗Hp的scFv的噬菌体JH1。随后又进一步对JH1所表达的scFv基因进行PCR扩增,分别得到scFv的VH片段、VL片段,全长基因分别为527 bp、368 bp和935 bp,这些包含着部分载体序列的DNA片段与理论值相符。通过对scFv全长基因进行测序,在NCBI中进行基因序列比对,与已报道的一种植物RNA病毒的复制酶单链抗体基因序列有96%同源性。; 纪卿丁虎生杨炼王铁斌张灏陈卫; 关键词：幽门螺旋杆菌噬菌体展示 SCFV 细胞筛选 ELISA

电渗析在粗菊糖纯化过程中的应用被引量：9: 2006年; 菊糖具有很高的营养价值和良好的功能性质,但由于粗菊糖含盐量高,粗蛋白多,含有大量的单、双糖,限制了其在食品工业中的应用,所以需要对粗菊糖进行纯化。鉴于已报道的一些纯化方法存在一些不足,本文讨论了电渗析对粗菊糖纯化过程的影响。在不同操作电压下,分析了粗菊糖在电渗析过程中电导率、pH、灰分,粗蛋白质含量,和糖分组成的变化。电渗析1h后,粗菊糖料液中灰分的去除率达到70%,粗蛋白质去除率达到47%,同时电渗析不会引起菊糖糖分组成的明显变化。实验证明电渗析对除去粗菊糖中的无机盐和游离氨基酸非常有效,能大大减轻后续纯化操作的压力,是粗菊糖纯化的一种经济、有效的操作。; 杨炼江波冯骉金征宇; 关键词：菊糖电渗析脱盐纯化低聚糖

抗黄曲霉毒素B1单链抗体的筛选和鉴定被引量：4: 2009年; 【目的】从Tomlinson(I)噬菌体抗体库中筛选人源化抗黄曲霉毒素B1单链抗体蛋白(scFv)并进行鉴定。【方法】分别采用甘氨酸洗脱、胰蛋白酶洗脱、游离AFB1竞争洗脱和AFB1竞争洗脱加胰蛋白酶处理4种方法对噬菌体抗体进行特异性洗脱。将筛选到的噬菌体阳性克隆转化到大肠杆菌(Escherichia coli.)HB2151,IPTG诱导表达scFv。ELISA检测和基因序列测定。【结果】比较4种洗脱方法,发现用AFB1竞争加胰蛋白酶洗脱筛选到阳性克隆的的概率最高,把此方法得到的阳性噬菌体克隆转化大肠杆菌HB2151表达,竞争性ELISA检测得到2个能特异性结合游离的AFB1阳性克隆。间接性ELISA测定相对亲和力分别为0.4μg/mL和0.7μg/mL。测序证实scFv属于人类免疫球蛋白可变区。【结论】利用噬菌体展示技术获得高特异性抗黄曲霉毒素B1的人源化单链抗体,本实验方法可以为其它抗半抗原重组抗体的筛选提供一定的借鉴意义。; 王铁斌丁虎生杨炼纪卿陈卫张灏; 关键词：黄曲霉毒素B1

肌苷酸和鸟苷酸的热稳定性和酸稳定性: 呈味核苷酸在食品行业应用越来越广泛,目前主要是用的肌苷酸二钠（IMP）和鸟苷酸二钠（GMP）以等比例配比混合的产物,但是IMP和GMP在呈味特征和稳定性方面有明显的区别,本文讨论了IMP和GMP在热和酸的影响下降解的现象...; 杨炼沈燕霆李英雨河凤洙赵建新; 关键词：肌苷酸鸟苷酸稳定性 PH值高温

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杨炼