目的:构建乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)重组腺病毒,为HBV的相关研究提供一种高效率、便捷的实验手段。方法:将HBV1.3倍体的片段构建到pAdTrack-TO4穿梭载体上,再经限制性核酸内切酶PmeⅠ线性化后转入含有腺病毒骨架载体pAd-Easy1的BJ5183感受态中进行重组并鉴定。鉴定正确后的重组腺病毒质粒经PacⅠ线性化后转染入HEK-293细胞进行病毒包装,获取HBV1.3倍体的重组腺病毒(Ad-HBV1.3)。通过荧光显微镜进行感染效率的检测;用ELISA、Western blot方法在蛋白水平检测HBV蛋白表达情况;小鼠尾静脉注射HBV1.3倍体的重组腺病毒,检测经腺病毒感染后的小鼠体内HBV表达情况。结果:在Ad-HBV1.3腺病毒感染后,细胞的感染效率可达到95%以上;ELISA实验检测实验组乙型肝炎s蛋白(hepatitis B virus S protein,HBs)、乙型肝炎e蛋白(hepatitis B virus E protein,HBe)表达量明显高于对照组;Western blot结果显示感染Ad-HBV1.3腺病毒后可有高水平的HBs表达;动物实验显示小鼠在注射Ad-HBV1.3腺病毒后体内HBs在第3天即可开始表达,5 d达到峰值,7 d后逐渐下降。结论:本研究成功构建了可表达HBV的重组腺病毒,其感染效率可高达95%,为HBV相关研究提供一种简单高效的研究手段。
