杜昆
- 作品数：12 被引量：24H指数：4
- 供职机构：汕头大学医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金广东省自然科学基金广东省博士启动基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学自动化与计算机技术更多>>
- 神经母细胞瘤辅酶Ⅱ依赖性视黄醇脱氢/还原酶的功能性表达与生物信息学分析被引量：7
- 2006年
- 目的探讨辅酶Ⅱ依赖性视黄醇脱氢/还原酶(NADP-dependent retinol dehydrogenase/reductase,NRDR)与神经母细胞瘤发生的关系。方法采用RACE方法从神经母细胞瘤细胞SK-N-SH和SY-5-Y中克隆NRDR全长cDNA,对获得的序列进行生物信息学分析,Northern杂交确定NRDR组织分布,免疫荧光染色鉴定NRDR细胞内定位,杆状病毒蛋白表达系统表达克隆的NRDR,反相高压液相色谱测定NRDR催化活性。结果从神经母细胞瘤细胞中克隆了一种新的NRDR全长cDNA片段(NCB I登录号为DQ344810),序列分析表明NRDR属短链醇脱氢酶家族。结论NRDR定位于细胞过氧化物酶体,具有辅酶Ⅱ依赖性视黄醇脱氢/还原酶活性。神经母细胞瘤细胞中NRDR表达调控的改变,可能与神经母细胞瘤的发生有关。
- 刘戈飞李一凡宋旭红杜昆李蕊谢建平黄东阳
- 关键词：神经母细胞瘤生物信息学
- 兔肝辅酶Ⅱ依赖性视黄醇氧化还原酶全长cDNA的克隆与分析被引量：4
- 2006年
- 目的:克隆兔肝辅酶Ⅱ依赖性视黄醇氧化还原酶(NRDR)的全长cDNA,并分析其特征。方法:根据GenBank中已发表的NRDR的cDNA部分序列信息,运用cDNA末端快速扩增技术得到全长cDNA,然后利用生物信息学的方法对其进行分析。结果:得到NRDR全长cDNA序列,并提交到GenBank。分析发现该cDNA具有短链脱氢酶(SDR)家族的保守模序,而且在5′端同一个读码框架内有2个起始密码子。结论:新克隆的NRDR全长序列在GenBank编号为DQ229110,NRDR蛋白属于SDR家族。
- 杜昆谢健平刘戈飞宋旭红黄东阳
- 体重指数与肛瘘术后相关并发症的关联性分析被引量：1
- 2021年
- 目的:探讨体重指数(body mass index,BMI)与肛瘘术后相关并发症的关系。方法:采取回顾性队列研究方法,连续性纳入2019年1月1日—10月31日于深圳市第二人民医院手术治疗的肛瘘患者,观察术后6个月内肛瘘复发、伤口出血、伤口愈合不良、再次手术等术后并发症情况。采用Logistic回归模型分析BMI与肛瘘患者术后并发症间的关联性。结果:最终共纳入患者457例,平均年龄(36.2±9.2)岁,男性396例(86.65%),肛瘘复发51例(11.16%),术后创面出血11例(2.41%),伤口愈合不良51例(11.16%),再次手术32例(7.00%),合并后共计出现术后相关并发症79例(17.29%)。调整相关混杂因素后,BMI与肛瘘术后并发症之间呈显著关联(OR=1.15,95%CI 1.06~1.24)。高BMI(25.89~34.72 kg/m^(2),OR=2.91,95%CI 1.40~6.03)、中BMI(23.32~25.88 kg/m^(2),OR=2.44,95%CI 1.14~5.20)与低BMI(15.57~23.24 kg/m^(2))相比,发生术后相关并发症的风险增加。结论:BMI增加是肛瘘术后相关并发症的危险因素。
- 杜昆杜宁超徐敏马翔廖木春陈小岚
- 关键词：体重指数肛瘘术后并发症
- 术前癌胚抗原水平升高对Ⅰ~Ⅲ期结肠癌患者预后的影响:一项基于SEER数据库的回顾性队列研究被引量：1
- 2021年
- 目的:探讨术前癌胚抗原(carcinoembryonic antigen,CEA)水平升高对Ⅰ~Ⅲ期结肠癌患者预后的影响。方法:采用回顾性队列研究的方法收集SEER数据库中2010—2015年行根治性手术治疗的Ⅰ~Ⅲ期结肠癌患者的临床资料,根据术前CEA水平将患者分为正常组(≤5.0 ng/mL)与升高组(>5.0 ng/mL)。采用Kaplan-Meier法估计两组患者癌症特异性生存期,采用Log-rank检验对生存差异进行评估,采用Cox回归模型分别进行单因素及多因素分析评估术前CEA水平的预后作用,建立AJCC分期联合术前CEA水平的列线图预测模型并分析模型的区分度。结果:最终纳入患者17921例,术前CEA水平正常组11467例(64.0%),CEA水平升高组6454例(36.0%),中位随访时间为45(29,66)个月,末次随访中因结肠癌死亡患者2910例(16.24%),患者总体5年癌症特异性生存率为81.48%(95%CI:80.82%~82.14%)。术前CEA水平升高患者的AJCC分期更晚,分化程度更低,更易发生周围神经浸润。术前CEA水平升高组及正常组患者的5年癌症特异性生存率分别为72.75%及86.25%,差异有统计学意义(P<0.001)。多因素Cox回归分析显示术前CEA水平升高与结肠癌患者术后更短的癌症特异性生存期独立相关(HR=1.74,95%CI:1.62~1.88,P<0.001)。AJCC分期联合术前CEA水平的列线图预测模型的ROC曲线下面积大于单纯AJCC分期模型的ROC曲线下面积(0.71比0.68)。结论:术前CEA水平升高的Ⅰ~Ⅲ期结肠癌患者术后发生癌症特异性死亡的风险更高,术前CEA水平升高是Ⅰ~Ⅲ期结肠癌患者不良预后的独立危险因素。
- 杜昆杜宁超刘安文廖木春陈小岚
- 关键词：结肠癌癌胚抗原
- 兔辅酶Ⅱ依赖性视黄醇脱氢/还原酶的功能性表达、纯化及活性鉴定被引量：5
- 2007年
- 目的:用原核蛋白表达系统对兔辅酶Ⅱ依赖性视黄醇脱氢/还原酶(NRDR)进行功能性表达,并对其活性进行鉴定。方法:从兔肝中克隆出NRDR全长序列,运用Gateway表达系统将其编码区序列构建到表达载体(pDEST 17)上,再转化到大肠杆菌(E.coli)(BL21-AI)中表达出兔NRDR蛋白并鉴定其表达形式;取工程菌裂解上清通过金属离子亲和层析纯化出目的蛋白,再运用反相高效液相色谱法(HPLC)测定该酶的Km值和Vmax值。结果:构建出含兔NRDR编码区(768 bp)的表达克隆,转化到BL21-AI中表达出氨基端含6×His标签的重组兔NRDR蛋白,诱导表达4 h后目的蛋白可占总蛋白量的41.4%;经一步亲和层析得到的兔NRDR纯度为97.2%,比活性提高了64倍;经HPLC测定,该酶对视黄醛的Km值为(4.55±0.33)μmol/L,Vmax为(0.307±0.065)μmol/(min.mg)。结论:应用pDEST 17可在BL21-AI中对兔肝NRDR进行高效的功能性表达。
- 谢健平刘戈飞宋旭红杜昆李蕊梁斌张巧霞黄东阳
- 关键词：纯化
- 一种人神经母细胞瘤辅酶II-依赖性视黄醇脱氢酶cDNA的克隆及特征分析被引量：11
- 2005年
- 背景与目的:检测神经母细胞瘤中新的辅酶II_依赖性视黄醇脱氢/还原酶[NADP(H)_dependen tretinold ehydrogenase/reductase,NRDR]选择性剪接亚型。材料与方法:我们用NRDR特异引物,从人神经母细胞瘤细胞系SK_N_SH和SK_SY_5YcDNA中分别经PCR扩增出635bp和429bpDNA片段,测序证实635bp片段是NRDR,而429bp片段是选择性剪接新亚型。再用快速cDNA末端扩增(Rapidamplification of cDN Aends,RACE)方法得到429bp片段cDNA全长序列。用绿色荧光蛋白与新亚型的融合蛋白做亚细胞定位。结果:得到新亚型全长并命名为humanNRDRA2(hum NRDRA2)(AY616182)。已知NRDR有8个外显子,而新亚型hum NRDRA2由选择性剪接造成了第4和第6外显子丢失,从第5外显子开始读码框架前移1bp,导致随后的编码区框码漂移(frameshift),同时蛋白翻译终止信号提前出现,产生仅有188个氨基酸的蛋白,其中第137氨基酸以后的序列相对于NRDR完全发生改变,同时C_末端的过氧化物酶体定位信号_SRL丢失,却在160～176氨基酸处出现了一个细胞核定位信号。我们在ESTs库中未找到与其相同的剪接形式,提示它可能是神经母细胞瘤特有的一种NRDR剪接亚型。用GFP_NRDRA2融合蛋白做该蛋白的亚细胞定位,发现发绿色荧光的细胞均已悬浮,但悬浮状态不佳,而作为对照的NRDR另一亚型则能定位成功,提示NRDRA2蛋白可能具有一定的细胞毒性。结论:人神经母细胞瘤NRDRA2选择性剪接亚型羧基端框移突变并有核定位序列;该蛋白可能是一种细胞毒性蛋白。
- 李一凡刘戈飞宋旭红杜昆黄东阳
- 关键词：选择性剪接
- 兔辅酶Ⅱ依赖性视黄醇脱氢/还原酶多克隆抗体的制备
- 2009年
- 目的:制备兔辅酶Ⅱ依赖性视黄醇脱氢/还原酶(NRDR)多克隆抗体。方法:应用原核表达的兔NRDR免疫豚鼠,制备豚鼠抗兔NRDR多克隆抗体,并以Western blot法分析抗体特异性。结果:免疫豚鼠获得了高效价抗血清,效价为1∶2 000时检测极限为160 ng蛋白,与NRDR蛋白能特异性结合。结论:获得的多克隆抗体应用于Western blot中检测兔NRDR效果良好,为NRDR的进一步研究打下基础。
- 谢健平刘戈飞宋旭红李蕊梁斌杜昆
- 关键词：多克隆抗体
- 肿瘤最大直径和术前癌胚抗原水平与Ⅰ-Ⅲ期结肠癌患者预后的相关性研究
- 目的 本研究旨在探讨肿瘤大小与术前癌胚抗原水平对行根治性切除术的Ⅰ-Ⅲ期结肠癌患者预后的影响，以及将肿瘤大小和术前癌胚抗原水平与结肠癌AJCC分期相结合后能否提高AJCC分期对Ⅰ-Ⅲ期结肠癌患者预后的预测能力，并最终也...
- 杜昆
- 关键词：结肠癌肿瘤大小癌胚抗原
- 文献传递
- 人神经母细胞瘤NRDR新剪接亚型A2的亚细胞定位被引量：1
- 2007年
- 背景与目的:研究hNRDRA2在真核细胞中的定位情况,并验证其羧基端预测的核定位信号(NLS)是否能引导蛋白核输入。材料与方法:分别构建hNRDRA2和NLS的绿色荧光蛋白(GFP)融合表达载体,瞬时转染人神经母细胞瘤细胞SK-N-SH、KP-N-NS及猴胚肾细胞COS-7,观察融合蛋白在3种细胞中的分布情况。结果:测序表明重组质粒构建正确,分别转染3种不同的细胞后,融合蛋白GFP-NLS表达阳性的细胞主要分布于细胞核中,GFP-A2表达阳性的细胞弥散分布于细胞质。结论:预测的NLS具有核定位功能,但携带该NLS的hNRDRA2外源表达的蛋白并不定位于细胞核。
- 李蕊宋旭红刘戈飞梁斌谢健平杜昆张巧霞黄东阳
- 关键词：核定位信号亚细胞定位绿色荧光蛋白
- 辅酶Ⅱ依赖性视黄醇脱氢/还原酶的表达与多克隆抗体制备被引量：3
- 2006年
- 目的制备辅酶Ⅱ依赖性视黄醇脱氢/还原酶(NRDR)多克隆抗体。方法应用大肠杆菌BL21-AI表达NRDR,制备NRDR包涵体,使用从SDS-PAGE凝胶中回收的重组NRDR作为免疫原,采用肩胛骨下注射作为免疫途径免疫兔。斑点杂交测定抗血清效价,HiTrapProteinG柱纯化兔IgG,免疫印迹鉴定抗体特异性。结果BL21-AI对NRDR进行了高效表达。回收的NRDR蛋白溶液的浓度为0.36mg/ml,回收率为48.5%。所有免疫的动物在第2次追加免疫之后都产生了高效价的抗血清,血清的效价是1∶500,检测极限是8ngNRDR蛋白。纯化后的NRDR抗体具有较高的免疫活性和特异性。结论建立了高效制备辅酶Ⅱ依赖性视黄醇脱氢/还原酶多克隆抗体的方法。
- 刘戈飞宋旭红梁斌杜昆黄东阳
- 关键词：基因表达多克隆抗体免疫
