李榕
- 作品数：15 被引量：19H指数：3
- 供职机构：石河子大学生命科学学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金转基因生物新品种培育专项国家科技重大专项更多>>
- 相关领域：农业科学生物学文化科学轻工技术与工程更多>>
- 一个棉花微管结合蛋白基因GhSP1L5的克隆及表达分析
- 2014年
- 利用RT-PCR技术从处于快速伸长发育时期的棉花纤维组织中克隆得到Spiral1-Like(SP1L5)基因(GhSP1L5),其开放读码框为315 bp,编码105个氨基酸的蛋白质,生物信息学分析表明,GhSP1L5蛋白N端和C端较为保守,并含有SCOP结构域,是典型的微管结合蛋白。进化树分析表明该基因与SP1L5家族基因的亲缘关系较近。构建原核表达载体pET28a-GhSP1L5,转化大肠杆菌BL21(DE3)并进行体外诱导表达,通过SDS-PAGE检测目的蛋白的表达,获得分子质量约为12 kD的重组蛋白。QRTPCR结果分析表明GhSP1L5基因在开花后15和20 dpa的纤维组织中表达量较高,在棉纤维发育的其他时期及根、茎、叶组织中表达量较低。
- 李榕寇伟谭兰贺怡梁卓李鸿彬
- 关键词：棉花纤维微管结合蛋白
- 转基因棉花室内种质筛选新方法研究被引量：3
- 2014年
- 为进一步改进转基因棉花室内筛选系统,使用5000mg·L-1浓度卡那霉素分别对转Bt基因棉花和非转基因棉花品种新陆早33的种子进行卡那霉素影响侧根生成的实验研究,经过卡那霉素溶液处理的棉花种子在基质中培养5d后进行数据统计,然后分别提取生成和不生成侧根的棉花幼苗子叶DNA,进一步经聚合酶链式反应(PCR)鉴定确认。结果表明:用5000mg·L-1的卡那霉素对2个品种进行筛选时,Bt棉89%有侧根形成,而新陆早33仅2%有侧根发生。PCR鉴定结果也显示有侧根生成的棉花幼苗具有卡那霉素抗性基因NPTII和抗虫基因Bt。实验结果与预期结果一致,所以这种筛选新方法可以作为有效快捷的转基因棉花室内筛选方案。
- 寇伟李榕陈英杰崔百明郑银英
- 关键词：侧根转基因棉花
- 棉花色氨酸脱羧酶GhTDC基因促进烟草BY2细胞的伸长被引量：1
- 2015年
- 色氨酸脱羧酶(Tryptophan decarboxylase,TDC)在生长素(Indoleacetic acid,IAA)合成和植物器官发育等过程中发挥重要作用,其参与纤维发育的研究现有报道。本研究将陆地棉Gh TDC基因转化烟草BY2悬浮细胞,分析TDC在细胞伸长发育过程中的功能。本研究采用RT-PCR方法从陆地棉胚珠和纤维组织中克隆得到Gh TDC基因,该基因的c DNA全长包含完整开放读码框为1491 bp,编码497个氨基酸的多肽,理论分子质量为54.67 ku。生物信息学分析结果表明,Gh TDC蛋白是一个亲水性蛋白,其含有磷酸吡哆醛结合位点和催化结构域。进化树分析结果表明,棉花Gh TDC与黑升麻Ar TDC的亲缘关系上较近。构建原核表达载体p ET32a-Gh TDC并转化大肠杆菌BL21(DE3)诱导表达,获得分子质量约为54 ku的重组蛋白,重组蛋白具有较高的酶催化活力。q RT-PCR结果分析结果表明,Gh TDC基因在纤维突起时期的开花前3 d和纤维快速伸长发育时期的开花后5-15 d表达丰度较高。将Gh TDC转基因转化烟草BY2悬浮细胞,烟草悬浮细胞的伸长发育获得了显著促进。本研究结果为研究Gh TDC基因在细胞伸长发育过程中的重要调控作用提供了参考。
- 谢全亮李榕贺怡梁卓李鸿彬
- 关键词：棉花纤维发育细胞伸长
- 费尔干猪毛菜液泡膜氢离子焦磷酸酶基因SfVP的克隆、序列分析及表达被引量：3
- 2014年
- 植物液泡膜氢离子焦磷酸酶(Vacuolar H+-PPase,VP)能够酸化液泡并为液泡的次级转运系统提供能量,在植物耐盐性方面发挥着着重要作用。本研究采用RT-PCR结合RACE方法,从费尔干猪毛菜中(Salsola ferganica)克隆得到液泡膜质子焦磷酸酶基因SfVP,该基因的cDNA全长2738 bp,包含1个2301 bp的完整开放读码框(ORF),编码766个氨基酸的多肽。氨基酸序列分析表明其属于H+-转运无机焦磷酸酶超家族成员,具有典型的H+-PPase结构域,其疏水性较强,含有12个跨膜螺旋结构。SfVP序列比对显示具有H+-PPase的3个保守序列CS1、CS2和CS3,其中CS1中含有保守的底物催化位点,与烟草的NtVP氨基酸序列相似性为95.3%。半定量RT-PCR结果表明,SfVP的转录表达丰度随着600 mmol/L NaCl处理时间的增加而升高,处理12 h后显著增加并一直维持在较高水平。
- 贺怡钱雯婕袁磊李榕谭兰谢全亮李鸿彬
- 关键词：RACE
- 过量表达棉花GDSL脂肪酶提高甘蓝型油菜油脂含量的研究被引量：4
- 2014年
- GDSL脂肪酶作为一种脂质水解酶具有广泛的底物特异性，在植物的油脂代谢、生长发育等众多生理过程中发挥着重要作用。利用RT—PCR技术从发育的陆地棉种子中克隆得到棉花的GDSL脂肪酶基因的cDNA，该基因开放读码框为1068bp，编码含有356个氨基酸的蛋白质。对棉花种子发育不同时期进行半定量PCR分析的结果表明，在种子发育15—20d时，GhGLIP基因的表达量较高。将该基因构建到真核表达载体pCAMBIA2300中，转入农杆菌GV3101后转化甘蓝型油菜野油19，通过筛选和鉴定获得转基因阳性油菜株系。转基因油菜的GDSL脂肪酶活力获得了显著提高，转基因油菜种子的油脂含量比野生型油菜提高了8．68％，提高比率为24．3％。
- 郝晓云蔡永智袁哈利李榕王斐李鸿彬
- 关键词：棉花种子油脂含量甘蓝型油菜
- 陆地棉GhPLDα基因的克隆、序列分析及表达
- 2014年
- 【目的】棉花磷脂酶D(GhPLDα)基因的克隆、序列功能结构域分析及表达。【方法】以陆地棉胚珠和纤维为材料提取总RNA,利用RT-PCR技术扩增得到PLDα基因的cDNA片段,将其构建到原核表达载体pET-28a中,转化大肠杆菌BL21(DE3)并进行体外诱导表达,通过SDS-PAGE检测目的蛋白的表达,利用分光光度法检测酶活性,采取RT-PCR方法检测基因表达。【结果】从发育的棉花胚珠和纤维混合材料中克隆得到的磷脂酶基因的开放读码框为2 421 bp,编码包含807个氨基酸的蛋白质,分子量约为88 kDa。通过同源序列比对和功能结构域分析,GhPLDα具有典型的磷脂酶D家族(HKD)结构域,同时还存在蛋白激酶C结构域2(C2结构域)。构建了pET28a-GhPLDα原核表达载体;获得分子量约为88 kDa左右的重组蛋白GhPLDα。半定量RT-PCR结果表明GhPLDα基因可能参与棉花胚珠与纤维发育过程。【结论】GhPLDα基因的克隆、序列分析和表达为进一步研究棉花GhPLDα基因在胚珠和纤维发育中过程的功能奠定了基础。
- 谭兰李榕袁哈利贺怡梁卓谢全亮李鸿彬
- 关键词：棉花
- 高校新进教师入职培训问题分析及策略
- 2021年
- 高校教师是高校发展的核心力量,是高校长远发展的重要载体,新进教师则是高校教育长远的新生力量和继代传承,对高校未来发展影响不可忽视。新进教师的岗前教育培训与高校未来发展受到我国以及世界各国高校的关注与重视。而高校入职培训因存在课程形式单一,部分内容浅显、针对性较弱、新教师培训积极性不高以及教师角色转换缓慢等问题,是新进教师培训效果不佳最重要因素。针对这一问题,本文从培训课程内容设计与新教师的角度逐一分析问题的原因,并提出几点建议,为提高高校新教师入职培训的质量,促进高校师资力量的创新与发展提供思路。
- 谢全亮李锦张彦兵李榕谢双全王斐李鸿彬
- 关键词：入职培训角色转换
- 植物GDSL脂肪酶家族研究进展被引量：4
- 2013年
- GDSL脂肪酶是一种新的脂肪酶家族成员,由于对其研究起步较晚,尤其是对植物GDSL脂肪酶的研究较少,因此对它们的很多功能和特点的研究还不够深入。近年来的研究表明,GDSL脂肪酶催化位点非常灵活,在与底物结合后其构象会改变,因此,该类酶具有多种潜在的功能。目前,已经克隆和鉴定了部分植物GDSL脂肪酶基因,分析并鉴定了一些基因的功能。对植物中GDSL脂肪酶的功能方面研究较多的是其参与植物生长发育、油脂代谢和抗逆性反应等。文章介绍了植物中的GDSL脂肪酶在结构和生理功能等方面的研究进展。
- 郝晓云蔡永智钱雯婕袁哈利李榕李鸿彬
- 关键词：植物脂肪酶
- 棉纤维细胞色素单加氧酶基因GhCYP714A1促进活性氧的累积被引量：3
- 2017年
- 本研究利用RT-PCR技术从陆地棉纤维组织中克隆得到了1个棉花细胞色素P450基因(Cytochrome P450714A1)的全长c DNA序列,将该基因命名为GhCYP714A1。序列分析发现,该cDNA包含1563 bp的完整开放读码框,编码521个氨基酸的蛋白质,理论分子质量为57.31 kDa;氨基酸序列生物信息学分析显示,Gh CYP714A1蛋白具有跨膜结构域和多个蛋白结合位点;进化树分析结果表明,棉花Gh CYP714A1与禾草SiCYP714B1在进化上亲缘关系上较近;半定量RT-PCR的组织表达特异性分析表明GhCYP714A1基因与纤维突起形成发育有关。本研究构建了pET28a-GhCYP714A1原核表达载体并进行体外诱导表达,获得分子质量约为57.31 kDa的重组蛋白。将GhCYP714A1基因转化烟草验证其参与活性氧产生的功能,与非转基因的野生型烟草相比,转基因烟草叶片中具有较高的H_2O_2累积。本实验结果为深入研究该基因在棉纤维发育中的作用奠定了基础。
- 辛珊李榕谢全亮寇伟李鸿彬
- 关键词：棉花纤维发育细胞色素P450基因细胞伸长活性氧
- 棉花GhSP1L基因克隆与表达分析
- 2015年
- 【目的】棉花Spiral1-LIKE(SP1L)基因(Gh SP1L)的克隆、功能序列分析及原核表达。【方法】通过RT-PCR从棉纤维中克隆Gh SP1L基因,进行Gh SP1L蛋白的功能结构域分析,构建原核表达载体p ET28a-GhSP1L,进行蛋白体外诱导表达,SDS-PAGE分析蛋白的表达情况;RT-PCR检测Gh SP1L基因的表达特征。【结果】从陆地棉纤维组织中克隆得到Gh SP1L基因的全长c DNA,其开放读码框为318 bp,编码106个氨基酸的蛋白质,理论分子质量为11.76 k Da。对氨基酸序列进行生物信息学分析,其N端和C端较为保守,含有SCOP结构域,属于SP1L家族蛋白,能够在其他微管蛋白协助下与微管结合,SPR1的定位可能与其结合的微管结合蛋白相关。构建了p ET28a-Gh SP1L原核表达载体,并通过体外诱导表达后获得分子质量约为12 k Da左右的重组蛋白Gh SP1L;半定量RT-PCR结果表明,Gh SP1L基因开花后3 d的纤维组织中表达量较高。【结论】Gh SP1L基因的克隆、序列分析和表达,重组蛋白的诱导表达,为深入研究该基因在棉纤维发育中的作用奠定了基础。
- 李榕寇伟梁卓谢全亮李鸿彬
- 关键词：棉花纤维微管结合蛋白
