李少方
- 作品数：10 被引量：10H指数：2
- 供职机构：华南农业大学兽医学院更多>>
- 发文基金：广东省自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 猪GAPDH基因实时荧光定量PCR方法的建立
- 本研究旨在建立猪GAPDH基因的real-time PCR技术,为猪功能基因mRNA水平的定量分析提供有用的方法学基础.根据GenBank中猪GAPDH基因的序列设计引物,建立了基于SYBR Green I染料技术的re...
- 孔留五康艳梅何逸民曹宗喜李少方张桂红
- 关键词：内参基因
- 广东鸽禽Ⅰ型副粘病毒基因Ⅶ型的分离鉴定
- 鸽禽Ⅰ型副粘病毒(Pigeon Avian Paramyxovir- us Type I,PA/PMV-Ⅰ)感染,通常又称为鸽新城疫,或鸽瘟,是鸽的一种急性烈性传染病。自1985年,
- 邹永新李少方廖新权张桂红刘思伽
- 文献传递
- 猪瘟病毒p80基因丝氨酸蛋白酶功能区的原核表达及小鼠免疫试验
- 2007年
- 根据已发表的猪瘟病毒Alfort株的全基因组序列,设计2对引物以Shimen细胞毒株为材料,一步法提取总RNA,利用RT-PCR和套式PCR,成功扩增出p80全长基因,包括丝氨酸蛋白酶以及NTPase/RNA解旋酶功能区,大小约为2.0kb。将p80基因中的丝氨酸蛋白酶基因克隆到原核表达载体pET-32a中,获得重组质粒pET-p80。将重组质粒转化大肠杆菌Rosetta(DE3)中,IPTG诱导表达得到分子量约为43ku的目的蛋白,与理论大小相符。将菌体蛋白经Ni柱纯化,获得纯化重组p80蛋白,Western blot检测表明,表达的目的蛋白能与CSFV阳性血清发生反应。用纯化的p80蛋白免疫Bal b/c小鼠,成功制备了抗p80蛋白的抗血清。
- 鲁絮许信刚张彦明张淼涛李少方
- 关键词：猪瘟病毒原核表达免疫
- 三株水禽源H5N1亚型AIV全基因组分析及致病性研究
- 禽流感作为严重危害养禽业和人类健康的一类动物传染病一直受到广泛的关注。本文对广东地区的两株水禽源H5N1亚型AIV进行了分离鉴定、生物学特性和致病性研究。研究结果表明：
AIV—Duck-07毒株：EID50...
- 李少方
- 关键词：禽流感生物学特性氨基酸序列
- 两株猪圆环病毒2型ORF2基因的克隆和序列分析被引量：4
- 2007年
- 根据GenBank中猪圆环病毒2型(PCV-2)ORF2基因序列,设计一对引物,从分离的PCV-2GZ株、HN株的细胞培养物中扩增出ORF2基因(702bp)。将此基因片段克隆入pMD18-T载体,筛选获得重组质粒pMD-ORF2,并对其测序。结果表明,所克隆的ORF2基因与其他PCV-2的ORF2基因核苷酸序列同源性在90.6%～99.6%之间,推导的氨基酸序列同源性在88.9%～98.7%之间。
- 何逸民罗玉均潘全会吴翠花曹宗喜孔留五李少方张桂红
- 关键词：圆环病毒2型ORF2
- 猪繁殖与呼吸综合征病毒变异株RT-PCR鉴别诊断方法的建立被引量：1
- 2009年
- 孔留五何逸民康艳梅罗玉均李小康潘全会李少方吴翠花张桂红
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒变异株基因组结构开放阅读框呼吸道症状
- 广东部分地区鸽禽Ⅰ型副黏病毒分子流行病学研究被引量：3
- 2009年
- 为了解广东近年来鸽禽Ⅰ型副黏病毒(PA/PMV-Ⅰ)基因变异情况,为新型疫苗毒株的筛选以及PA/PMV-Ⅰ的免疫防制提供依据,我们对广东不同地区在1999年～2007年发生PA/PMV-Ⅰ鸽群开展流行病学调查、病原分离鉴定,从中筛选出8株病毒进行F基因RT-PCR扩增、测序和相似性分析。结果表明,8株PA/PMV-Ⅰ之间核苷酸与推导的氨基酸同源性分别为83.7%～99.9%和87.9%～99.6%,其中P199902-1株和P200201-1株之间的氨基酸相似性最高达99.6%,与其他6株的氨基酸相似性则相对较远。遗传进化树分析结果表明,P199902-1、P200201-1、P200301-5、P200401-3株和P200705-1株属于基因Ⅵ型;P200001-2株属于基因Ⅱ型,与疫苗株LaSota-46株亲缘关系较近;P200103-5与P200603-5株属于基因Ⅶ型与国内广西等地的鸡源NDV流行株Chicken/Gx/14/2005和NDV0210149株亲缘关系最近。
- 邹永新李少方廖新权张桂红肖智远刘思伽李利娜
- 关键词：F基因遗传进化分析
- 广东鸽禽Ⅰ型副黏病毒基因Ⅶ型的分离鉴定被引量：2
- 2009年
- 2007年在广东某发病鸽群中分离到一株鸽禽Ⅰ型副黏病毒(GM01),经测定,其鸡胚平均死亡时间(MDT)为76h,鸡脑内接种致病指数(ICPI)为1.3,在鸡和鸡胚上为中等毒力病毒。应用RT-PCR对F基因片段进行扩增并测序,结果表明该F蛋白裂解位点处氨基酸序列为112R-R-Q-K-R-F117,是典型的强毒株序列。用DNASTAR软件对GM01株F基因片段与国内外相关的NDV参考株进行比较,结果表明GM01株与Chicken/Gx/14/2005株的核苷酸和氨基酸相似性分别为98.6%和98.4%;与Pigeon-Gxp40毒株核苷酸和氨基酸相似性分别为98.5%和98.7%,在遗传进化树中位于同一个分支,同属于基因Ⅶ型;与国内代表性弱毒疫苗株LaSota毒株和NDV强毒株F48E9的核苷酸及氨基酸相似性分别为84.1%和86.5%及86.3%和88.0%。
- 李少方邹永新廖新权张桂红刘思伽
- 鸵鸟新城疫免疫程序的制定及现场应用试验
- 2009年
- 本文通过对鸵鸟新城疫病毒母源抗体及疫苗免疫后抗体消长动态的检测,制定出了鸵鸟新城疫的免疫程序:首免:21日龄,新城疫病毒灭活疫苗,0.5～1.0mL/只,肌注;二免:55～60日龄,新城疫病毒灭活疫苗,1.5～2.0mL/只,肌注;三免:100日龄,新城疫病毒灭活疫苗,3.0～5.0mL/只,肌注;以后每4～5个月加强免疫接种一次,至出售;种鸟免疫接种新城疫病毒油乳剂灭活疫苗,7.0～10.0mL/只,肌注,原则上每6～7个月加强一次,但要避开产蛋高峰期。该免疫程序经现场应用3年,免疫效果良好,至今未见该病的发生流行。
- 李少方关建新张桂红
- 关键词：鸵鸟新城疫免疫程序
- 猪GAPDH基因实时荧光定量PCR方法的建立
- 本研究旨在建立猪GAPDH基因的real-time PCR技术,为猪功能基因mRNA水平的定量分析提供有用的方法学基础.根据GenBank中猪GAPDH基因的序列设计引物,建立了基于SYBR GreenⅠ染料技术的rea...
- 孔留五康艳梅何逸民曹宗喜李少方张桂红
- 关键词：内参基因
- 文献传递
