李万程
- 作品数：17 被引量：34H指数：4
- 供职机构：湖南师范大学生命科学学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金湖南省自然科学基金湖南省教育厅科研基金更多>>
- 相关领域：生物学农业科学更多>>
- jnk3基因在金鱼和斑马鱼不同发育时期胚胎与成体不同组织中的分化表达被引量：7
- 2011年
- JNKs是丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)家族重要成员,参与应激反应和动物体轴的构建。为了进一步了解JNK家族在动物发育中的功能,首次分离和克隆了金鱼jnk3基因,研究了jnk3在金鱼和斑马鱼组织特异性和胚胎发育特异性表达状况。金鱼jnk3基因cDNA总长1 794 bp,其中阅读框1 293 bp,编码430个氨基酸。对jnk3基因序列及其推导的氨基酸序列进行同源性分析,结果显示,jnk3基因在脊椎动物较为保守,金鱼jnk3基因核苷酸序列与斑马鱼、人的同源性分别为94.1%和80.7%,金鱼jnk3基因氨基酸序列与斑马鱼、人的同源性分别为99.7%和93.4%。jnk3基因在鱼类成体中的表达存在着显著的组织差异,在金鱼和斑马鱼脑和精巢组织的表达具专一性,此外在斑马鱼心脏中也检测到jnk3的表达。RT-PCR检测结果显示,在鱼类胚胎发育中,神经胚期开始检测到jnk3基因mRNA表达,从神经胚到心跳期胚胎,jnk3基因表达水平逐渐增高,此后直至出膜一直保持较高的表达水平。研究表明,jnk3基因可能在鱼类后期的胚胎发育和成体脑、精巢与心脏发育中具有重要作用。
- 陈丽莉邹立军熊振刘姣廖高鹏刘文彬刘少军肖亚梅李万程
- 关键词：金鱼斑马鱼胚胎发育
- PP2A-Aα/β在金鱼及斑马鱼发育中的分化表达模式被引量：1
- 2011年
- 以金鱼和斑马鱼为研究对象,运用RT-PCR和Western Blot技术分析蛋白磷酸酶2A(PP2A)结构亚基A(PP2A-Aα/β)在金鱼、斑马鱼成体9种组织和12个发育时期胚胎中mRNA和蛋白水平的表达情况,得到其分化表达模式为:(1)在mRNA水平上,PP2A-Aα/β在金鱼、斑马鱼9种组织中具有较强表达;种属差异性和组织差异性均较大;结构亚基A的两亚型Aα和Aβ的表达存在差异。(2)在蛋白水平上,PP2A-Aα/β在金鱼、斑马鱼9种组织中均有表达;种属差异性不大但出现明显的组织差异性。(3)PP2A-Aα/βmRNA在金鱼和斑马鱼卵裂期到囊胚期胚胎中大量存在,PP2A-AαmRNA在金鱼眼色素期量剧增推测其对金鱼眼色素的形成至关重要。(4)PP2A-Aα/β基因在金鱼、斑马鱼12个发育时期胚胎中均有较高水平的蛋白存在,提示其为维持胚胎的正常发育发挥重要作用。
- 刘姣付淑君胡雯峰刘方元傅永明唐鸿钊刘文彬肖亚梅刘筠李万程
- 关键词：蛋白磷酸酶2A去磷酸化金鱼斑马鱼
- 金鱼Dishevelled3基因的克隆与分化表达研究
- 2015年
- 目的:本文主要以金鱼中的dvl-3基因为研究对象,研究dvl-3在金鱼不同的组织和胚胎发育时期中可能行使的功能。方法:采用RACE克隆技术获得金鱼dvl-3基因的c DNA全长,再利用半定量RT-PCR技术和蛋白免疫印记(Western blot)技术分析研究dvl-3基因在mRNA水平和蛋白水平上的表达差异。结果:在金鱼不同组织与胚胎发育时期,dvl-3基因在mRNA水平和蛋白水平上具有显著的表达差异性。结论:由此可见散乱蛋白dvl-3在金鱼不同的组织和胚胎发育时期中可能行使不同的功能,但其具体的功能及机制还有待进一步研究。
- 邓美霞张卉琴张翠媛李林芳钟彬彬陈思周柳肖亚梅李万程刘文彬
- 关键词：WNT信号转导通路RT-PCRWESTERNBLOT
- 黄鳝生殖发育不同时期性腺差异蛋白的初步研究被引量：3
- 2009年
- 提取黄鳝从雌性性逆转发育为雄性过程中7个不同生殖发育时期生殖腺的总蛋白,通过考马斯亮蓝染色扫描分析,选出在相对分子质量17附近的一条蛋白带进行基质辅助激光解吸-电离飞行时间质谱分析(MAL-DI-TOF),搜库显示与其匹配的蛋白为二磷酸核苷激酶(Nucleoside diphoshate kinase,NDPK).该蛋白带的表达由雌性发育→雄性发育呈现逐渐减弱的趋势,在黄鳝的性腺发育中,NDPK可能参与了黄鳝生殖腺的性逆转过程.
- 肖亚梅刘姣陈丽莉邹立军邓觅李万程
- 关键词：黄鳝差异蛋白
- 金鱼蛋白磷酸酶2A-B″家族Alpha和Gamma调节基因的cDNA克隆及mRNA表达被引量：8
- 2009年
- 以金鱼卵巢组织作为材料,运用RT—PCR和cDNA末端快速扩增(RACE)技术克隆得到蛋白磷酸酶2A(PP2A)调节亚基B″家族中γ基因(G5PR)cDNA全序列和α基因(PR130)cDNA部分序列.结果显示γ基因cDNA全长1885bp,编码一个含457个氨基酸的蛋白质.而α基因cDNA长1781bp,编码的多肽共含426个氨基酸,系α亚基的部分蛋白序列.它们与已知其他物种对应的B″家族蛋白质均有着很高的同源性.结构预测分析发现,α和γ两条多肽均存在PP2A调节亚基B″家族成员共有的两个EF-HAND结构域.用RT-PCR的方法检测了这两个基因在金鱼不同组织和胚胎发育不同时期的mRNA表达水平.结果表明,γ亚基在金鱼多种组织和各个胚胎发育时期中均有较高表达且表达量比较平均,仅在卵巢和精巢组织中最为丰富.与γ亚基表达模式相比,α亚基表达呈现明显的组织和胚胎发育阶段差异性,在卵巢和肌肉组织中最高,在肾脏和鳃中最低,在原肠胚、神经胚、脑泡分化和体色素等胚胎发育时期的表达较弱,而在其他时期中的表达较强.据此,推测α、γ两调节亚基可能在金鱼不同组织和胚胎发育过程中起着特定的作用.此外,进一步的分析发现,α基因除参与PP2A全酶功能外还可能具有独立的功能.
- 郑春兵马海立付虎陈合格刘文彬肖亚梅刘筠李万程
- 蛋白磷酸酶-2Ac在不同倍性鱼6种组织中的分化表达模式被引量：5
- 2009年
- 蛋白磷酸酶-2A是最重要的丝氨酸/苏氨酸蛋白磷酸酶之一,对于调控多细胞的生命活动起着非常重要的作用。以异源四倍体鲫鲤及其二倍体父/母本(湘江野鲤/红鲫)和子代三倍体湘云鲫等为实验材料,运用Westernblot技术及荧光免疫组织化学技术等实验手段,得到了Protein Phosphatase-2A(PP2A)的催化亚基在上述不同倍性鱼体内6种不同组织的表达模式:Protein Phosphatase-2Ac(PP2Ac)在异源四倍体鲫鲤及其二倍体父/母本及子代三倍体湘云鲫不同组织中蛋白水平均有表达,而且出现了明显的种属特异性和组织特异性,如在大脑、肌肉、肝脏三组织中,三倍体湘云鲫中PP2Ac的表达相对最高。而在肾脏组织中,PP2Ac在异源四倍体鲫鲤中的表达水平最高,父本与三倍体湘云鲫中的表达比较相近,且最低;而在性腺组织中则是父本精巢中的表达最高;在心脏组织中,PP2Ac在母本红鲫中的表达相对较高。这种明显的种属之间组织特异性可能说明了子代与父母本之间的变异性。荧光免疫组化实验结果显示,从整体水平来看,4种不同鱼的同一组织中,PP2Ac的相对定位是非常相似的,这可能说明了异源四倍体鲫鲤与其二倍体父/母本及子代三倍体湘云鲫之间的遗传相似性。研究结果为进一步探索PP2Ac在脊椎动物不同组织中的功能提供了实验依据。
- 刘文彬王道周洁肖亚梅刘少军刘筠李万程
- 关键词：去磷酸化基因表达
- 红鲫Gsk3β基因克隆与分化表达模式
- 2018年
- 目的:本文以糖原合成酶激酶3β(glycogen synthase kinase 3 beta,Gsk3β)为研究对象,探讨Gsk3β基因在红鲫胚胎发育及成体组织中的表达模式,以及在镉金属胁迫下的分子应答初探。方法:采用RACE克隆技术获得红鲫Gsk3βc DNA全长,半定量RT-PCR技术和Western Blot技术分析Gsk3β在mRNA水平和蛋白水平的表达情况,最后通过特定浓度的镉处理分析Gsk3β的表达情况。结果:通过克隆发现Gsk3β基因全长为2 195 bp,5'端非编码区(UTR)共692 bp,3'非编码区有237 bp。编码含421个氨基酸的蛋白质,蛋白分子量约为46 846.40,等电点为9.05,且与斑马鱼和青鳉的亲缘关系最近。Gsk3β基因在胚胎发育和成体组织中呈现不同程度的表达,在不同组织中,Gsk3β在大脑组织表达最丰富,其次在眼睛,肌肉和精巢中表达相对较高,在卵巢、肝脏、肾脏和皮肤组织表达量相对较低。在不同发育时期,Gsk3β在两细胞期没有表达,之后在后续的不同时期呈现差异表达,出膜期表达最强,其次为肌效期、体节期、神经胚、囊胚期表达次之,在黑色素期和体色素期蛋白表达较弱。在镉处理后的红鲫肝脏中检测Gsk3β基因的表达,发现Gsk3β表达下调。结论:Gsk3β基因在红鲫胚胎发育中起着重要作用,且参与了镉金属胁迫应答,但其具体的分子机制仍有待进一步研究。
- 张卉琴张永勤邓美霞桂赛玉文苑桧刘锦辉陈志男李晓超肖亚梅李万程刘文彬
- 关键词：GSK3Β基因克隆PCRWESTERNBLOT
- 整合素CD29/CD49/CD90在天然性逆转黄鳝雌雄生殖腺中的表达状况被引量：1
- 2007年
- 整合素是细胞黏附分子家族中的一员,参与调节细胞的生长、增殖与分化.黄鳝是一种雌性先熟的雌雄同体鱼类,其性逆转发育机制亟待研究.应用免疫组化方法探讨CD29,CD49,CD90 3种整合素分子在黄鳝雌、雄性发育中的表达状况.研究结果表明,CD29,CD49,CD90在雌性生殖腺各级卵母细胞中均不表达,位于生殖褶边缘的性原细胞中可见表达;在雄性生殖腺的初级精原细胞中表达,但在成团分布的次级精原细胞、各级精母细胞中均未表达.
- 肖亚梅陈丽莉赵如榕刘文彬李万程
- 关键词：黄鳝整合素性逆转生殖腺
- PP-1催化亚基(PP-1c)在成体小白鼠不同组织器官中的分化表达与定位被引量：2
- 2011年
- 为了确定蛋白磷酸酶-1(protein phosphatase-1)的催化亚基(PP-1c)在小白鼠不同器官组织(肌肉、卵巢、肾、胃、脾、大脑、心、肝、肺及乳腺)中的表达模式,运用RT-PCR、Western印迹及荧光免疫组织化学技术等实验手段进行了检测和分析.结果表明,在mRNA水平,PP-1c在大脑中表达最高,卵巢及肺中表达次之,在肌肉、肾、心、肝中表达较低,在胃和乳腺中表达最低;在蛋白质水平,肝中表达最高,肾、大脑、肺和乳腺中表达较高,而肌肉、卵巢、心和脾中表达相对较低,胃中表达最低.免疫荧光组织化学实验结果显示,PP-1c的表达也具有明显的组织特异性和细胞特异性.这些结果为进一步探讨PP-1在哺乳动物不同组织器官中的功能提供了重要的实验依据.
- 刘文彬聂磊惠珊珊胡小慧马慧王玲周磊肖亚梅李万程
- 蛋白磷酸酶PP-1c在不同倍性鱼6种组织中的分化表达模式被引量：3
- 2009年
- 以异源四倍体鲫鲤及其二倍体父/母本(湘江野鲤/红鲫)和子代三倍体湘云鲫等为实验材料,运用W estern-blotting技术及荧光免疫组织化学技术等实验手段,分析了PP-1的催化亚基在上述不同倍性鱼体内的表达模式:蛋白水平检测发现PP-1c在不同倍性鱼的大脑、心脏、肌肉、肾脏、肝脏和性腺6种主要器官组织中均有表达,且不同的组织中显示了明显的差异表达模式,而PP-1c在这4种不同鱼的肌肉组织中的表达差异更显著,其中在异源四倍体鲫鲤中表达最低,在父/母本红鲫中的表达水平相对较高,子代三倍体湘云鲫中的表达最高,这种差异性可能从生化的角度说明了子代与父母本之间的变异性。免疫荧光组化实验结果显示,从整体水平来看,4种不同鱼的同一组织中,PP-1c的表达模式是非常相似的,这可能从蛋白和细胞的水平说明了异源四倍体鲫鲤与其二倍体父/母本及子代三倍体湘云鲫之间的遗传相似性。但对于同一组织的不同细胞的具体表达部位是有差异的,具有细胞特异性。
- 刘文彬刘姣马海立郑春兵付虎袁丹肖亚梅刘少军刘筠李万程
- 关键词：免疫荧光组织化学
