公共文化服务平台

共 8 条记录，以下是 1-8

全选清除导出

排序方式：

登革2型病毒结合血管内皮细胞分子机制的初步研究被引量：1: 2003年; 以ECV304细胞为对象分析登革病毒感染血管内皮细胞的机制。2型登革病毒(DEN2)吸附后微量蚀斑法测定ECV304细胞上清释放的病毒滴度,证实该细胞对DEN2感染有一定的敏感性。机械刮取或胰蛋白酶消化法收集ECV304细胞分离膜蛋白,SDS-PAGE见胰酶处理样品缺失一43 kDa的膜蛋白。将ECV304细胞膜蛋白与-^(35)S-Met标记的DEN2进行病毒重叠蛋白结合试验(VOPBA),有29、34和43 kDa的3种膜蛋白可与DV结合,其中29 kDa的蛋白对胰酶耐受。培养的ECV304细胞中加入重组E蛋白(rEgp)对DEN2吸附进行阻断试验,微量蚀斑法与间接免疫荧光表明rEgp抑制DEN2感染该细胞。VOPBA中rEgp可阻断病毒与细胞膜蛋白的结合。结果表明ECV304细胞表面可能存在29、34、43 kDa的3种与DEN2结合的相关蛋白,DEN2 E蛋白可直接介导DV感染血管内皮细胞。; 魏惠永江丽芳方丹云曾祥凤郭辉玉; 关键词：登革2型病毒血管内皮细胞分子机制

登革病毒致病与免疫机制的系列研究: 江丽芳魏惠永郭辉玉薛耀华洪帮兴周俊梅高阳晏辉钧曹艳英江振友方丹云曾祥凤; 该项目在细胞水平、分子水平和基因水平上对登革病毒致病与免疫机制进行了系列研究，研究结果初步阐明了登革病毒与人血管内皮细胞及单个核细胞的相互作用；首次证明了人血管内皮细胞表面存在登革病毒特异性受体；首次报道在酵母菌中高效表...; 关键词：; 关键词：登革病毒免疫

登革2型病毒全长NS1基因真核表达载体的构建及序列分析: 2004年; 目的克隆登革2型病毒(DEN2)全长NS1基因,构建NS1基因的真核表达重组质粒。方法用RT-PCR技术扩增DEN2(NGC株)全长的NS1基因序列,并定向克隆入pPICZαB的KpnⅠ/XbalⅠ位点,构建真核表达载体pPICZαB-NS1,转化E.coliDH5a菌。阳性重组质粒用PCR、酶切及序列测定等方法鉴定。结果阳性质粒经PCR及KpnⅠ/XbaⅠ双酶切获得了一个核苷酸长度为1134bp的基因;序列测定证实该基因与DEN2(NGC株AF038403)NS1基因序列有99%同源。结论成功构建了含有DEN2全长NS1基因的真核表达载体pPICZαB-NS1,为NS1的进一步酵母表达奠定了良好的基础。; 曾祥凤江丽芳邵焰方丹云魏惠永; 关键词：登革病毒 NS1基因测序真核表达

细胞因子在登革病毒感染中的作用: 2002年; 登革病毒 (DV)感染引起登革出血热 (DHF)及登革休克综合征 (DSS)的发病机理至今尚未阐明 ,早期研究提出与二次异型DV感染引起的“依赖抗体的增强效应”(ADE)密切相关 ,近年来注意到T细胞的激活和细胞因子的释放在DHF/DSS发病中起重要作用。; 曾祥凤; 关键词：登革病毒细胞因子发病机理登革热

登革病毒2型E蛋白基因真核表达和DNA免疫的研究被引量：2: 2003年; 将编码登革病毒2型(DV2)氨基末端80％的E蛋白的DNA片段克隆到真核表达载体pCXN2 AG强启动子下游,构建成DV2E重组真核表达质粒pCXN-E。间接免疫荧光显示其可在COS-7细胞中表达。ELISA法检测pCXN2-E DNA免疫BALB/c鼠血清中的E抗体变化和维持规律,结果显示三次免疫后2周已有抗体产生,15周时仍维持较高的水平;血清空斑减数中和实验显示其中和滴度高于1:640;流式细胞计数仪(FACS)检测DNA免疫鼠CD4^+、CD8^+T淋巴细胞变化情况,与注射空载体pCXN2的阴性鼠相比,CD4^+淋巴细胞水平略有上升。CD8^+细胞水平有较大升高(p<0.01);动物保护性实验结果显示,当用致死剂量登革病毒攻击免疫鼠时,其保护率为60％。以上结果表明:pCXN2-E在实验动物内表达出的DV2E蛋白可以诱导免疫动物的体液免疫和细胞免疫应答,尤其是MHC-I限制性杀伤性CD8^+T淋巴细胞水平的提高对清除病毒是十分有利的。因此,DV2 E DNA免疫为登革病毒DNA疫苗的发展进行了有益的探索。; 高阳江丽芳方丹云曾祥凤; 关键词：登革病毒2型真核表达 DNA免疫

登革2型病毒重组E蛋白的生物学特性分析被引量：2: 2003年; [目的]检测重组 D2V全长 E蛋白纯化后的免疫反应性与抗原性,为其亚单位疫苗研制奠定基础.[方法]酵母表达上清超滤浓缩后用金属螯合亲和层析(MCAC)法过柱,用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)技术观察蛋白条带.将纯化蛋白与组氨酸抗体、 D2V E单抗进行斑点印迹和蛋白印迹,以确定纯化物是否为含组氨酸尾的 D2V E融合蛋白,并用 ELISA检测纯化 E蛋白与不同 DV抗体的结合反应.用纯化的重组 D2V E蛋白免疫小鼠后测定其产生的抗体类型与滴度,以分析其抗原性.[结果]表达产物经 MCAC柱纯化获得单一的相对分子质量为 69× 103的蛋白,组氨酸抗体与 D2V E单抗的印迹试验证实该条带就是含多聚组氨酸尾型特异的重组 E蛋白(rEgp) , ELISA显示纯化的 rEgp保留有免疫反应性及型特异性,内糖苷酶 H消化证实其含有 N联高甘露糖残基.接种 rEgp可诱生针对 D2V抗原与重组 E蛋白的高效抗体.[结论]纯化的 D2V全长 E蛋白保留其免疫原性和免疫反应性,并具有型特异性.; 魏惠永江丽芳曾祥凤方丹云郭辉玉; 关键词：登革热病毒膜糖蛋白类重组蛋白质纯化

DEN2重组E蛋白免疫学性质研究及其单克隆抗体的制备: 登革病毒基因组为单股正链RNA,全长11kb,编码C-PrM/M-E3个结构蛋和NS1-NS2a-NS2b-NS3-NS4a-NS57个非结构蛋白.由E基因编码的包膜糖蛋白E(Envelope glycoprotein,...; 曾祥凤; 关键词：登革病毒 E蛋白单克隆抗体 NS1基因逆转录-聚合酶链反应; 文献传递

DEN2重组E蛋白单克隆抗体的制备及其生物学活性被引量：2: 2005年; [目的]研制登革病毒E蛋白特异性单克隆抗体,鉴定其各种生物学特性.[方法]用纯化的Pichia pastoris酵母表达的DEN2重组E蛋白作为抗原,免疫Balb/c小鼠,采用传统的细胞融合、有限稀释法克隆化杂交瘤细胞,制备稳定分泌McAbs的细胞株.采用硫酸铵沉淀法纯化腹水中的McAbs,用ELISA、IFA、Western Blot和空斑减数中和实验等鉴定McAbs的各种生物学活性.[结果]用ELISA、IFA检测证实5株杂交瘤细胞产生的McAbs与DEN2重组E蛋白和DEN全病毒均有较高的亲和力;Western Blot分析发现其中3株杂交瘤细胞(3G3,6G11,4E3)分泌的McAbs能与其相对分子质量Mr=(66～69)×103的DEN2重组E蛋白结合.空斑减数中和实验证实所获得的单克隆抗体具有中和登革病毒感染C6/36细胞的作用.[结论]成功地制备了5株抗登革病毒E蛋白特异性的McAbs,为进一步研究E蛋白的结构和功能及临床诊断试剂盒研发打下了基础.; 曾祥凤江丽芳方丹云汤云霞魏惠永晏辉钧; 关键词：E蛋白 DEN 单克隆抗体生物学活性登革病毒杂交瘤细胞

全选清除导出

共1页<1>

曾祥凤