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施长华

作品数：8 被引量：3H指数：1
供职机构：东华大学更多>>
发文基金：国家高技术研究发展计划国家自然科学基金更多>>
相关领域：生物学自动化与计算机技术更多>>

合作作者

文献类型

  • 3篇期刊文章
  • 3篇专利
  • 2篇学位论文

领域

  • 5篇生物学
  • 1篇自动化与计算...

主题

  • 4篇蛋白质内含子
  • 4篇基因
  • 3篇酶切
  • 2篇蛋白质纯化
  • 2篇质粒
  • 2篇双酶
  • 2篇双酶切
  • 2篇目的基因
  • 2篇介导
  • 2篇扩增
  • 2篇基因拼接
  • 2篇鞭毛
  • 1篇蛋白基因
  • 1篇蛋白质反式剪...
  • 1篇生物传感
  • 1篇生物传感器
  • 1篇生物分离
  • 1篇丝蛋白
  • 1篇重组蛋白
  • 1篇蛛丝

机构

  • 8篇东华大学

作者

  • 8篇施长华
  • 6篇孟清
  • 3篇李梦梦
  • 1篇林瑛
  • 1篇汤传龙

传媒

  • 2篇生物学杂志
  • 1篇中国生物化学...

年份

  • 2篇2014
  • 2篇2012
  • 1篇2011
  • 3篇2010
共 8 条 记 录，以下是 1-8
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排序方式：
利用小肽控制的基于蛋白质内含子非层析标签制备重组蛋白(英文)
2014年
基于蛋白质内含子的蛋白质纯化自我断裂标签已经被广泛使用超过15年之久.但这一系统体内表达过程的提前断裂一直是限制这一技术广泛应用的瓶颈,特别是在需要高温表达和长表达周期的真核表达系统中.本研究介绍了一种利用小肽控制的基于蛋白质内含子和非层析标签ELP(elastin-like polypeptide)的自我断裂系统.在这一系统中,蛋白质内含子的体内外活性严格受到其结构互补小肽控制.在体内表达不含有互补小肽时,蛋白质内含子不具有活性;而在体外添加结构互补小肽,蛋白质内含子结构恢复并发生C端断裂反应释放目的蛋白.由于非层析标签ELP的引入,因此整个纯化过程可以简单地通过几步机械沉淀完成.此外,这一系统反应pH、小肽与前体蛋白之间的摩尔比及断裂速率也一并进行了系统的研究.
施长华孟清Wood D W
关键词：小肽蛋白质内含子蛋白质纯化
蛋白质内含子介导的蛋白纯化系统在变性条件下的应用
2012年
由蛋白质内含子介导的亲和蛋白质纯化系统(IMPACT)已得到广泛应用,通过其纯化得到的目的蛋白不含蛋白纯化标签以及多余的氨基酸残基,且操作简单成本低廉。这些优点使得其相对于其他蛋白纯化系统有着无与伦比的优势。但是现有报道都局限于非变性条件下使用,这往往会限制其在一些包涵体蛋白变性条件下使用。以一已知表达形成包涵体形式的丝素蛋白为例,研究IMPACT系统在时变性条件下使用变性剂浓度、温度和诱导断裂还原剂浓度。实验表明,在4 M尿素,100 mM DTT室温作用下蛋白质内含子会获得最大断裂效率(80%)。柱上在线断裂实验表明,其最终蛋白得率超过65%。
汤传龙施长华林瑛孟清
关键词：蛋白质内含子
蛋白质内含子介导的纯化系统的优化及其在生物传感器中的应用
蛋白质内含子是存在于前体蛋白中的一段内含肽,它通过蛋白质剪接反应将两端外显子通过天然肽键相连接。通过突变蛋白质内含子剪接过程中的保守氨基酸,剪接型的蛋白质内含子可转变为断裂型蛋白质原件。例如,将N端首位保守的Cys变成A...
施长华
关键词：蛋白质内含子蛋白质纯化生物传感器甲状腺激素
文献传递
一种重复模块基因拼接方法
本发明涉及一种重复模块基因拼接方法，包括：(1)利用两条PCR引物对目的基因进行扩增；(2)双酶切PCR产物和质粒pET-LIC，片段与载体相连接，转化感受态细胞后得到质粒pET-TS；(3)双酶切质粒pET-TS并回收...
孟清李梦梦施长华
一种小环肽的制备方法
本发明涉及一种小环肽的制备方法，包括：(1)用限制性内切酶分别对扩增出的含intein基因组DNA和载体pET-LIc进行酶切重组，得到质粒pE-IN<Sub>N</Sub>和pE-IN<Sub>C</Sub>；(2)利...
孟清施长华李梦梦
文献传递
蛛丝蛋白基因在大肠杆菌中表达研究被引量：2
2011年
利用大腹园蛛基因组文库筛选获得一段693 bp基因片段,经分析该段基因处于鞭毛状丝基因重复区域,且其中包含了一个完整的重复框架。通过基因密码子优化,在其3′和5′端分别融合蛋白质亲和层析标签,克隆于pET30LIC表达载体中,在不同的大肠杆菌中进行表达试验。实验结果显示：经过密码子优化,融合目的蛋白基因在BL21（DE3）中得到了高效表达,产量达到25-30mg/L,纯化产物纯度达90%以上。SDS-PAGE和W estern-b lotting检测目的融合蛋白均与预期蛋白大小一致。
施长华孟清
关键词：重组蛋白密码子优化
利用蛋白质反式剪接技术剪接蛛丝蛋白
研究证实蛛丝是由蛋白质组成,具有弹性大、强度高、延展性好等特点,使得其成为研究蛋白质结构与功能的热点；同时蛛丝也是理想的生物材料,具有广阔的应用前景。由于生活习性不同,蜘蛛不能像家蚕一样高密度人工饲养,因此应用基因工程方...
施长华
关键词：蛋白质内含子反式剪接
文献传递
一种重复模块基因拼接方法
本发明涉及一种重复模块基因拼接方法，包括：(1)利用两条PCR引物对目的基因进行扩增；(2)双酶切PCR产物和质粒pET-LIC，片段与载体相连接，转化感受态细胞后得到质粒pET-TS；(3)双酶切质粒pET-TS并回收...
孟清李梦梦施长华
文献传递
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