敖大
- 作品数：4 被引量：5H指数：1
- 供职机构：四川农业大学动物医学院动物疫病与人类健康四川省重点实验室更多>>
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- 口蹄疫病毒2B蛋白基因的原核表达及其表达产物的细胞毒性分析
- 2014年
- 为了实现口蹄疫病毒非结构蛋白基因2B在原核表达系统中的可溶性表达并分析其生物学活性,采用SUMO融合技术构建带有2B基因的pSMK-2B重组质粒,然后分别把此重组质粒转入大肠杆菌菌株BL21(DE3)和C43(DE3)中进行诱导表达。通过对比2B蛋白在普通大肠杆菌BL21(DE3)中和抗毒性蛋白的大肠杆菌C43(DE3)中的表达情况,分析了表达蛋白的细胞毒性作用。结果显示,口蹄疫病毒非结构蛋白基因2B只在大肠杆菌菌株C43(DE3)中实现了可溶性表达,表达产物能抑制表达菌的增殖;进一步证实了2B蛋白对大肠杆菌菌株BL21(DE3)和C43(DE3)存在不同水平的毒性作用。本研究获得的可溶性2B蛋白将为其生物学功能的研究提供前提条件。
- 敖大孙世琪董虎徐进孙德惠魏衍全王海明郭慧琛曹随忠
- 关键词：口蹄疫病毒非结构蛋白可溶性表达细胞毒性
- 口蹄疫病毒非结构蛋白2B的离子孔道特性研究
- 病毒离子孔道蛋白(Viroporins)是由病毒编码的一类小分子量、疏水性跨膜蛋白。它们一般由50-120个氨基酸残基组成，至少有一个疏水性跨膜结构域。这些疏水性跨膜区能够与宿主细胞内的磷脂双分子层相互作用并使磷脂双分子...
- 敖大
- 关键词：口蹄疫病毒结构特性生物学功能非结构蛋白膜通透性
- 文献传递
- 嵌合型口蹄疫病毒样颗粒组装研究被引量：5
- 2014年
- [目的]为研究和制备多联或多价口蹄疫病毒样颗粒疫苗奠定基础。[方法]将FLAG序列通过融合PCR技术插入口蹄疫结构蛋白VP1GH-loop可变区,并通过大肠杆菌原核表达技术表达口蹄疫病毒衣壳蛋白VP0、VP3和嵌合型VP1,在体外组装出嵌合FLAG外源多肽的口蹄疫病毒样颗粒。[结果]大肠杆菌表达的口蹄疫衣壳蛋白主要以可溶性存在,在缓冲体系中融合标签被切除衣壳蛋白VP0、VP3和FLAGVP1组装成病毒样颗粒,其大小约25 nm左右。FLAG序列成功插入GH-loop可变区第150-151氨基酸位点之间,外源多肽的插入没有影响衣壳蛋白VP1的空间结构。[结论]口蹄疫loop可变区引入外源抗原是可行的,但外源多肽的大小及理化性质会影响病毒样颗粒的组装效率。
- 董虎郭慧琛敖大韩世充闫丹刘湘涛孙世琪
- 关键词：口蹄疫病毒原核表达
- 猪瘟病毒P7基因的原核表达及表达产物的寡聚化研究
- 2014年
- 采用RT-PCR方法从接种了猪瘟疫苗的家兔脾组织中扩增出了P7基因,将其克隆到表达载体pSMK中,测序验证后转化入表达菌BL21中进行诱导表达。结果显示,重组菌可以表达出分子质量约为19ku的重组融合蛋白,经终浓度为1mmol/L的IPTG诱导2h的表达效果较好。表达产物经Ni柱纯化,可得到纯度较好的目的蛋白。纯化的蛋白置于4℃2d后进行Western-blot检测,发现有多聚体形成;戊二醛交联结果表明,P7蛋白可形成同源寡聚体。此研究结果为进一步研究猪瘟病毒P7基因表达蛋白的性质和功能奠定了基础。
- 孙德惠闫丹董虎魏衍全敖大王海明孙世琪
- 关键词：猪瘟病毒原核表达
