徐向明
- 作品数：52 被引量：227H指数：9
- 供职机构：苏州农业职业技术学院更多>>
- 发文基金：江苏省高校自然科学研究项目国家自然科学基金江苏省自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学文化科学医药卫生更多>>
- 犬瘟热病毒基因免疫的探索被引量：2
- 2008年
- 将15只经检测未感染犬瘟热病毒(CDV)且抗体阴性的3月龄普通犬随机分为2组,其中试验组10只,对照组5只。将CDV附着蛋白(H)重组质粒pcDNA-H和融合蛋白(F)重组质粒pcDNA-F混合后,以聚乙烯胺(PEI)作为免疫佐剂(各质粒终浓度均为200μg.mL-1),肌肉接种试验组动物;并以生理盐水接种对照组。病毒中和试验表明:动物在首次免疫后抗CDV抗体中和价为10-0.78±0.14,第2次免疫后为10-1.12±0.20,第3次免疫后达到10-1.55±0.19。在试验组第3次免疫后28 d,所有动物均接种CDV分离株YZ0101;结果发现试验组动物均未出现典型的犬瘟热临床症状,且攻毒后第18天外周血淋巴细胞CDV检测为阴性,而对照组动物均出现典型的犬瘟热临床症状和组织病理变化,且攻毒后第18天外周血淋巴细胞中病毒RNA检测为阳性;这表明用所制备的重组质粒免疫动物对抵抗CDV感染具有保护作用。
- 徐向明朱善元张泉薛整风
- 关键词：犬瘟热病毒基因免疫免疫保护
- 人免疫重建SCID小鼠的研究被引量：3
- 1997年
- ４２只不渗漏ＳＣＩＤ小鼠分别腹腔注射经冷冻、复苏的胎肝或胎肝加胎胸腺细胞，每鼠２×１０７活细胞，建立人胎肝细胞ＳＣＩＤ小鼠模型Ⅰ和Ⅱ，研究人免疫系统。用人肝癌细胞（ＨＨＣＣ）免疫，ＳＣＩＤ鼠出现初始免疫答应，血清人ＩｇＧ平均滴度分别达到５１３．０±８４．２ｎｇ／ｍｌ和７１９．７±２０１．６ｎｇ／ｍｌ，ＩｇＧ峰值分别出现在免疫重建后１０～１２和１０～１４周，特异性抗ＨＨＣＣ抗体滴度分别达到１∶７０．４±３５．０５和１∶２９４．４±１６８．５２，免疫重建后７～８周龄，ＡＢＣ法免疫组化染色，免疫鼠模型肝、脾中可检出标记人的ＣＤ３＋、ＣＤ２０＋Ｔ和Ｂ淋巴细胞克隆和细胞岛。流式细胞仪检测了抗原免疫组和模型组外周血、脾脏、肝脏的人ＣＤ３＋、ＣＤ４＋、ＣＤ８＋、ＣＤ１９＋、ＣＤ２０＋标记的淋巴细胞数，其中标记ＣＤ２０＋淋巴细胞平均值外周血３．１２±３．０３％、脾脏１．４±０．２０％、肝脏２．３２±１．４９％。而无抗原免疫的模型组在肝脏仅有微量或检测不到人标记淋巴细胞。
- 李厚达邓忠彬徐向明薛整风李劲松孙强隋延仿蒋建利
- 关键词：SCID小鼠免疫重建CD20CD3^+鼠模型抗原免疫
- 鸡白细胞介素2对La Sota弱毒苗免疫效果促进作用的初步研究被引量：5
- 2008年
- 为研究鸡白细胞介素2对新城疫La Sota弱毒苗免疫效果的促进作用,纯化真核重组质粒pcDNAChIL-2,细胞转染验证后,将重组质粒分为0,5,10,20和30μg5个剂量组,分别与LaSota弱毒苗同时免疫7日龄雏鸡,免疫后7d,每隔1周分离鸡血清,测量血清中NDV的HI效价。结果表明,混合注射有pcDNAChIL-2重组质粒雏鸡的NDV抗体产生的水平显著升高,其中以20和30μg剂量组最为明显,提示ChIL-2可有效促进La Sota弱毒苗的免疫效果。
- 徐向明朱善元张泉薛整风
- 关键词：鸡白细胞介素2新城疫
- 鸭源新城疫病毒单克隆抗体的研制
- 2010年
- 新城疫（Newcastle disease，ND）是由新城疫病毒（Newcastle disease virus，NDV）引起的禽类的一种高度接触性、烈性传染病，给世界养禽业造成严重的经济损失和危害。以往文献报道水禽为NDV的自然贮存宿主，可以感染但不发病。
- 王海燕徐向明
- 关键词：鸭源VIRUS烈性传染病接触性
- 猪繁殖与呼吸综合征病毒单克隆抗体的研制和初步应用
- 2012年
- Marc-145细胞扩增猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)TZ1株,制备免疫原来免疫BALB/c小鼠,取脾细胞与骨髓瘤细胞融合。间接ELISA(iELISA)筛选杂交瘤细胞。亚克隆后获得了3株能稳定分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞株,分别命名4B6-F2、8E5-C3、3F8-A3,其中4B6-F2、8E5-C3抗体亚类为IgG2a,3F8-A3为IgG1。iELISA试验结果表明,3株抗体均能与15株临床分离的PRRSV发生特异性反应,而与其它常见猪病原体如PPV、PRV、HCV及PCV2均无反应性;间接荧光抗体试验(IFAT)结果表明,所得到的3株抗体均能与PRRSV反应产生特异性荧光,这些结果为进一步开展PRRSV检测奠定了基础。
- 王海燕王涛刘莉魏宁徐向明
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒单克隆抗体
- 犬瘟热H基因亚单位的克隆和融合表达
- 2008年
- 将犬瘟热H基因亚单位片段(Hs)克隆入原核表达载体pGEX-6p-1中,克隆采用限制性内切酶EcoR I和XhoI酶切pGEX-6p-1以及Hs基因PCR产物,连接成pGEX-6p-1-Hs重组质粒,并将它转化进入大肠杆菌表达受体菌BL21(DE3)中,经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导,可见预计大小为32 kDa的融合蛋白,诱导菌体裂解物经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)后,用GST单克隆抗体进行Western-blotting试验,结果确证了GST-Hs融合蛋白的正确表达,这为今后的进一步研究奠定了基础。
- 徐向明张泉
- 关键词：克隆
- 犬瘟热病毒DNA疫苗接种犬的免疫保护被引量：5
- 2008年
- 用犬瘟热病毒(CDV)囊膜糖蛋白基因(H、F)和核蛋白基因(N)重组质粒DNA和聚乙烯胺(PEI)混合后肌注10只3月龄CDV抗体阴性毕格犬,间隔30 d,共免疫3次,另选择5只犬作为阴性对照。免疫3次后,采用CDV攻毒。对照组呈现出犬瘟热的典型症状和组织病理损害,攻毒3周内,有2只犬衰竭死亡,1只犬症状明显,攻毒第18天外周血淋巴细胞中病毒RNA检测为阳性。DNA疫苗免疫组除出现一过性的体温升高外,未出现明显症状,攻毒后第18天外周血淋巴细胞CDV检测仍为阴性。DNA疫苗免疫后血清ELISA抗体和病毒中和抗体测定显示,首免后机体激发的ELISA抗体滴度很低(101.25±0.615),二免后开始缓慢升高(101.69±0.285),再次免疫后达到102.051±0.214;中和抗体也呈现以上规律,三免后血清中和抗体为101.75±0.190,攻毒后血清ELISA抗体和中和抗体滴度迅速升高(103.02±0.202和102.41±0.245)。试验表明CDV基因免疫对CDV的感染具有较好的保护作用,并能清除进入机体内的病毒。CDV基因免疫只激发较低水平的体液免疫,中和抗体在攻毒前达不到临界保护线(102),但对CDV攻击能产生较好的保护,推测其免疫效力可能源于细胞免疫和记忆性B淋巴细胞。
- 徐向明殷俊杨玲李娜薛整风崔治中
- 关键词：犬瘟热病毒DNA疫苗抗体免疫保护
- 犬瘟热病毒OP株囊膜糖蛋白F基因片段表达产物的免疫原性被引量：4
- 2003年
- 根据已发表的犬瘟热病毒 OP株核酸序列设计 2对引物 ,以犬瘟热病毒 OP株感染 Vero细胞收获病毒提取的RNA为模板 ,应用 RT- PCR扩增出 F基因的 76 9、832 bp片段。将 PCR产物按正确的阅读框架定向克隆进 p GEX- 6 p-1载体中谷胱甘肽 - S-转移酶 (GST)基因的下游 ,再将重组质粒转化入宿主菌 BL2 1 中 ,在 37℃ 1 .0 mmol/ L IPTG诱导下 ,F基因 2个片段获得了良好的表达。表达产物经聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定 ,确定所表达的融合多肽大小分别为5 4 0 0 0、5 6 0 0 0。将表达产物回收后混合免疫小鼠 ,IFA显示 ,免疫小鼠血清能与病毒感染细胞呈现特异反应 ,并表现出 1∶ 1 6的中和抗体活性 ,表明体外表达的
- 徐向明吉荣崔治中李厚达秦爱建殷俊杨玲刘岳龙金文杰
- 关键词：犬瘟热病毒囊膜糖蛋白F基因免疫原性间接免疫荧光试验
- CpG-ODN增强表达犬瘟热病毒H蛋白重组质粒免疫效果的分析被引量：1
- 2008年
- 为提高犬瘟热病毒(canine distemper virus,CDV)重组质粒的免疫应答水平,合成4条CpG-寡脱氧核苷酸(CpG-oligodeoxynueleotides,CpG-ODN);通过体外淋巴细胞增殖试验确定1条刺激活性最显著的CpG-ODN,序列为5-′TCGTCGTTTTGTCGTTTTGTCGTT-3′。将30只健康毕格犬随机均分为2大组,每大组再分为5小组,分别以不同的剂量肌肉注射CDV附着蛋白(H)重组质粒pcDNA-H和选定的CpG-ODN。在免疫后的第2、4、6周分别测定各组动物的抗CDV中和抗体和γ-干扰素水平。结果表明选定的CpG-ODN对提高抗CDV中和抗体效价和干扰素水平具有一定作用,且与对照组差异显著(P<0.05);但不同剂量的质粒pcDNA-H和CpG-ODN的效果不同,其中以30μg/只的CpG-ODN和50μg/只的pcDNA-H的剂量组合效果最佳。以选定剂量的CpG-ODN和pcDNA-H免疫5只健康毕格犬,同时以质粒pcDNA-H与生理盐水作为对照;4周后所有动物均接种CDV组织匀浆毒。结果发现试验组动物均未出现犬瘟热临床症状,且攻毒后第3周CDV检测为阴性,而pcDNA-H对照组和生理盐水对照组动物的CDV检测阳性率为2/5和5/5;这表明CpG能够明显促进重组质粒pcDNA-H的免疫保护作用。
- 徐向明朱善元张泉薛整风李厚达
- 关键词：CPG-ODN犬瘟热核酸疫苗
- 荧光定量RT-PCR检测H5亚型禽流感病毒方法的建立与验证被引量：5
- 2011年
- 根据H5亚型禽流感病毒HA基因上的保守序列,设计合成引物,以H5亚型禽流感病毒HA基因重组质粒为标准品绘制标准曲线,建立了荧光定量逆转录聚合酶链反应检测方法。结果表明,本试验建立的标准曲线循环阈值(Ct值)与模板浓度具有良好的线性关系,相关系数为0.995,灵敏度约为8拷贝/μL,相当于8个AIV颗粒,对新城疫病毒和其他禽病病毒无交叉反应,特异性好、重复性佳,为H5亚型禽流感病毒检测提供了一种特异、敏感、快速、低成本、高通量、生物安全性好的定量检测方法。对178份临床泄殖腔棉拭子样品的检测,该方法结果与经典病毒分离方法符合率大于90.0%,在禽流感病毒临床样品快速筛检、流行病学监测等方面显示了良好的应用前景。
- 曹军平陆桂平徐向明顾敏徐全刚刘武杰彭大新刘秀梵
- 关键词：H5亚型禽流感病毒荧光定量RT-PCR
