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徐倩: 作品数：22 被引量：4H指数：1; 供职机构：南通大学医学院更多>>; 发文基金：南通市应用研究计划项目江苏省高等学校大学生实践创新训练计划项目更多>>; 相关领域：医药卫生农业科学更多>>

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一种周期型马来丝虫M29表位基因蛋白疫苗制备方法: 本发明公开了一种效果好周期型马来丝虫M29表位基因蛋白疫苗制备方法，包括引物设计、PCR扩增Bm‑myosin基因、Bm‑myosin基因片段纯化和T载体的连接以及转化、阳性重组克隆的筛选和鉴定、Bm‑MYOSIN二级结...; 方政方浩王颖颖徐倩吴佳倩张波王慧陶然谢东方; 文献传递

周期型马来丝虫复合多价蛋白疫苗的制备方法: 本发明公开了一种周期型马来丝虫复合多价蛋白疫苗的制备方法，包括周期型马来丝虫pcDNA3.1（+）-BmCPI/BmGAPDH重组质粒的抽提、基因转染、阳性克隆的筛选、阳性克隆的提取和扩大培养、阳性克隆的冻存、检测阳性克...; 方政王慧方浩陆施娟徐倩胡迎青童海燕徐邦生; 文献传递

简便的周期型马来丝虫M29表位基因蛋白疫苗制备方法: 本发明公开了一种简便的周期型马来丝虫M29表位基因蛋白疫苗制备方法，包括引物设计、PCR扩增Bm‑myosin基因、Bm‑myosin基因片段纯化和T载体的连接以及转化、阳性重组克隆的筛选和鉴定、Bm‑MYOSIN二级结...; 方政王颖颖方浩徐倩吴佳倩张波王慧陶然谢东方; 文献传递

易操作周期型马来丝虫M29表位基因DNA疫苗的制备方法: 本发明公开了一种易操作周期型马来丝虫M29表位基因DNA疫苗的制备方法，以我国流行的周期型马来丝虫为研究对象，扩增马来丝虫myosin基因片段，构建了周期型马来丝虫myosin真核表达重组质粒。根据测序结果分析，推测其氨...; 方政吴佳倩徐倩方浩张波陆施娟陶然刘芹谢东方; 文献传递

周期型马来丝虫M29表位基因蛋白疫苗的用途: 本发明公开了一种周期型马来丝虫M29表位基因蛋白疫苗的用途，所述周期型马来丝虫M29表位基因蛋白疫苗制备方法包括引物设计、PCR扩增Bm‑myosin基因、Bm‑myosin基因片段纯化和T载体的连接以及转化、阳性重组克...; 王颖颖方政方浩徐倩吴佳倩张波王慧陶然谢东方; 文献传递

周期型马来丝虫M29表位基因蛋白疫苗的制备方法: 本发明公开了一种周期型马来丝虫M29表位基因蛋白疫苗的制备方法，包括引物设计、PCR扩增Bm-myosin基因、Bm-myosin基因片段纯化和T载体的连接以及转化、阳性重组克隆的筛选和鉴定、Bm-MYOSIN二级结构预...; 方政徐倩吴佳倩方浩王颖颖张波王慧陶然谢东方; 文献传递

简便的周期型马来丝虫M29表位基因蛋白疫苗制备方法: 本发明公开了一种简便的周期型马来丝虫M29表位基因蛋白疫苗制备方法，包括引物设计、PCR扩增Bm‑myosin基因、Bm‑myosin基因片段纯化和T载体的连接以及转化、阳性重组克隆的筛选和鉴定、Bm‑MYOSIN二级结...; 方政王颖颖方浩徐倩吴佳倩张波王慧陶然谢东方; 文献传递

周期型马来丝虫M29表位基因蛋白疫苗的制备方法: 本发明公开了一种周期型马来丝虫M29表位基因蛋白疫苗的制备方法，包括引物设计、PCR扩增Bm‑myosin基因、Bm‑myosin基因片段纯化和T载体的连接以及转化、阳性重组克隆的筛选和鉴定、Bm‑MYOSIN二级结构预...; 方政徐倩吴佳倩方浩王颖颖张波王慧陶然谢东方; 文献传递

效果好的周期型马来丝虫M29表位基因蛋白疫苗制备方法: 本发明公开了一种效果好周期型马来丝虫M29表位基因蛋白疫苗制备方法，包括引物设计、PCR扩增Bm‑myosin基因、Bm‑myosin基因片段纯化和T载体的连接以及转化、阳性重组克隆的筛选和鉴定、Bm‑MYOSIN二级结...; 方政方浩王颖颖徐倩吴佳倩张波王慧陶然谢东方; 文献传递

周期型马来丝虫复合基因重组质粒和相应表达蛋白的免疫学研究被引量：2: 2014年; 目的构建周期型马来丝虫半胱氨酸蛋白酶抑制剂／3-磷酸甘油醛脱氢酶（BmcPI／，BmGAPDH）复合基因重组质粒，并转染人宫颈癌细胞（Hela）进行重组蛋白表达。将重组质粒和相应表达蛋白进行免疫学研究比较。为研制新型的抗丝虫基因工程疫苗提供理论及实验依据。方法扩增周期型马来丝虫目的编码基因。将目的基因片段和载体分别双酶切后进行连接，构建复合基因重组质粒pcDNA3．1（＋）-BmCPI/BmGAPDH，鉴定后转染Hela细胞，以G418筛选转染细胞，进而通过RT-PCR和十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS—PAGE）鉴定G418筛选后的单克隆抗性细胞株。亲和层析纯化所表达的重组蛋白并通过免疫蛋白印迹法（Westernblot）对纯化的重组蛋白进行生物学鉴定。60只BALB／c小鼠分5组，每组12只，第2、4、6周分别免疫1次。磷酸盐缓冲液（PBS）对照组为注射PBS100μl；空质粒／CpG对照组为注射pcDNA3．1100μg和CpG30μg；复合重组质粒／CpG组为注射pcDNA3．1-BmCPI／BmGAPDH100μg和CpG30μ；复合重组蛋白／CpG组为注射pcDNA3．1-BmCPI／BmGAPDH复合重组蛋白50P-g和CpG30μg；复合重组质粒／复合重组蛋白／CpG组前2次注射pcDNA3．1-BmCPI／BmGAPDH100μg和CpG30μg；后1次注射pcDNA3．1-BmCPI／BmGAPDH复合重组蛋白50μ和CpG30μg。用RT—PCR方法检测肌肉组织内目的基因；用酶联免疫吸附试验（ELISA）、特异性增殖试验（MTT法）分别检测免疫小鼠血清抗体效价、T淋巴细胞刺激增殖指数和血清中细胞因子干扰素（INF）-γ、白细胞介素（IL）-4水平。结果复合重组质粒pcDNA3．1（＋）-BmCPI／BmGAPDH免疫小鼠后，从小鼠肌肉组织扩增出目的基因。复合重组质粒／复合重组蛋白／CpG组小鼠免疫4、6周后血清抗体效价（1695．12±1．43、3199．63±1．34）均高于复合重组质粒／CpG组（712．69±1．08、1510．08±1．43，P均〈0．05; 王慧方政徐倩陆施娟钱一言徐怿琳方浩徐邦生; 关键词：马来丝虫半胱氨酸蛋白酶抑制剂 3-磷酸甘油醛脱氢酶复合基因表达蛋白

徐倩

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