张金强
- 作品数：19 被引量：37H指数：4
- 供职机构：军事医学科学院基础医学研究所更多>>
- 发文基金：国家重点基础研究发展计划国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 蛋白酶激活受体-1促进肺癌细胞侵袭和转移功能的研究被引量：5
- 2007年
- 目的研究蛋白酶激活受体1(PAR-1)对人类肺癌细胞侵袭和转移功能的影响。方法采用阳离子脂质体介导法,将正义和反义 PAR-1重组质粒"pC/PARls"和"pC/PARlas"分别转染至人肺巨细胞癌低转移株(PLA801C)和高转移株(PLA801D)细胞中;采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和 Western 印迹检测转染后 PAR-1基因和蛋白表达水平变化;通过 MTT、软琼脂集落形成、流式细胞仪、细胞-基质黏附和 Transwell 细胞侵袭实验检测 PAR-1对肺癌细胞转移相关功能的影响。结果转染正义和反义 PAR-1分别明显上调和下调了 PLA801C 和 PLA801D 的 PAR-1mRNA 和蛋白表达水平。转染正义 PAR-1对细胞的生长和克隆形成具有促进作用;并可明显增强细胞对细胞外基质的黏附和侵袭能力(与空载体对照组比较均 P<0.01)。相反,转染反义 PAR-1对细胞模型的生长和克隆形成具有抑制作用;能明显降低细胞的 S 期和 G_2/M 期(与空载体对照组比较分别为 P<0.05、0.01)、升高 G_1/G_1期所占比例(P<0.01);还可使细胞对细胞外基质的黏附力(P<0.05)和侵袭力明显降低(P<0.01)。结论正义和反义 PAR-1基因能够分别上调和下调 PAR-1的表达水平;PAR-1能够影响肺癌细胞的生长和增殖、黏附和侵袭特性。抑制 PAR-1的表达可能是一种治疗肺癌的途径。
- 孟宇宏虞积耀张金强路平宁浩勇胡明陆应麟
- 关键词：肿瘤转移肺肿瘤
- 肿瘤及其转移调控的基础研究
- 陆应麟李春海葛学铭张金强范文红王涛凌贤龙徐元基丁秀云王妍杜芝燕
- 利用自身建系建株的肿瘤细胞，经早期克隆（如PLA-801C/D同源性人肺巨细胞癌高低转移株，LM2小鼠肺腺癌高转移株），鉴定成为转移研究的模型或平台。对肿瘤转移密切相关的金属蛋白酶MMP-2、金属蛋白酶组织抑制物（TIM...
- 关键词：
- 关键词：肿瘤转移肿瘤相关基因
- 新鉴定的转移相关基因
- ＜正＞ 对于肿瘤转移的共识,第一点,肿瘤的异质性是一普遍的现象,即不是所有肿瘤细胞都具有转移能力;在同一肿瘤内的不同细胞亚群具有不同的转移潜力。虽然肿瘤细胞必先具有成瘤性,然后才可能在远隔部位生长成为转移灶,所以成瘤性是...
- 陆应麟张金强孟宇宏陈惠华王妍徐元基杜芝燕
- 文献传递
- 肿瘤转移相关新基因MAG-1和MAG-2的克隆被引量：9
- 2003年
- 目的 从两株人肺巨细胞癌细胞株中分离并鉴定人肺癌转移相关基因 ,为探讨肿瘤转移的分子机制奠定基础。方法 以细胞系PLA 80 1的两个具有不同转移潜力的亚克隆为模型 ,利用抑制消减杂交(suppressionsubtractivehybridization ,SSH)技术克隆差异片段 ,对得到的片段经基因芯片筛选后测序并与GenBank数据库进行同源性比较 ,然后用Northern杂交和RT PCR对其中的两条序列进行验证 ,并进行详细的生物信息学分析。结果 获得了 79条在高转移细胞中高表达而在低转移细胞中低表达的序列 ,在与这些序列同源的己知基因中包括两条功能未知的全长cDNA序列BC0 0 62 3 6和BC0 0 2 42 0 ,分别命名为MAG 1和MAG 2。MAG 1定位于 4q2 1,由 4个外显子组成 ,MAG 2定位于 2 q3 5 ,由 9个外显子组成 ,基因长度分别为8.5kb和 5 .2kb。二条序列均有开放阅读框架 (ORF) ,编码产物以α螺旋为主并含有部分片层结构和无规卷曲。结论 MAG 1和MAG 2在高低转移性肺巨细胞癌细胞株中的表达具有显著差异 ,二者的表达与高转移潜能具有相关性 ,提示MAG 1和MAG 2可能参与肿瘤转移过程。
- 张金强孟宇宏杜芝燕陈泽建凌贤龙徐元基陆应麟
- 关键词：肿瘤基因克隆肺癌抑制消减杂交技术SSH
- 肿瘤转移相关蛋白及其编码基因
- 本发明公开了一种肿瘤转移相关蛋白及其编码基因。本发明所提供的肿瘤转移相关蛋白，是具有序列表中SEQ ID №：5氨基酸残基序列的蛋白质，或者是将SEQ ID №：5的氨基酸残基序列经过一至十个氨基酸残基的取代、缺失或添加...
- 陆应麟张金强蔺合云王妍谭晓刚陈惠华徐元基杜芝燕
- 文献传递
- 肺癌中凝血酶受体-1的表达及意义被引量：8
- 2004年
- 目的 分析凝血酶受体 (PAR 1)在肺癌组织及细胞中的表达情况 ,探讨PAR 1与人肺癌生物学行为的关系。方法 采用免疫组织化学、Westernblot及RT PCR方法检测不同类型肺癌组织及细胞系中PAR 1的表达情况。结果 免疫组化S P法检测PAR 1在 5 2例肺癌组织中表达情况分别为 :腺癌 14 / 2 0例、鳞癌 6 / 16例、大细胞癌 6 / 10例、小细胞癌中 4 / 6例。免疫组化阳性细胞多位于癌巢周边 ,1例侵及支气管软骨处的鳞癌癌巢及另 1例低分化腺癌脉管内的癌栓呈明显阳性 ,1例腺癌组织周围的肺泡上皮不典型增生灶呈明显阳性。Westernblot及RT PCR方法检测结果均显示PAR 1在人肺巨细胞癌细胞系高转移株 (PLA80 1D)中的高表达明显高于其低转移株 (PLA80 1C)。结论 PAR 1在各种组织类型的人肺癌组织中均有不同比例表达。PAR 1在人肺巨细胞癌细胞系高转移株 (PLA80 1D)中的表达明显高于其低转移株 (PLA80 1C)。PAR
- 孟宇宏张金强朱彦君宁浩勇胡明姚林郑集义王妍陆应麟虞积耀
- 关键词：肺癌生物学行为免疫组织化学
- PAR-1对动员肺巨细胞癌PLA801D／PLA801C细胞内Ca^2＋的作用
- 2010年
- 目的通过研究PAR-1对肺巨细胞癌细胞高、低转移细胞株PLA801D和PLA801C[Ca^2＋]i的影响，探讨PAR-1参与调节肺癌细胞转移相关功能的分子机制。方法激光共聚焦显微镜检测PLA801D和PLA801C细胞[Ca^2＋]i；将反义和正义PAR-1分别转染至PLA801D（D-）和PLA801C（C＋）中；用thrombin和TRAP激活PAR-1，观察PAR-1对D-和C＋的[Ca^2＋]i影响。结果PLA801D（荧光强度59．55，下同）和PLA801C（35．46）细胞之间的平均[Ca^2＋]i差异有统计学意义（P〈0．01）。C＋的[Ca^2＋]i（45．77）明显高于其对照组CV（35．46，P〈0．05），D-的[Ca^2＋]i（48．42）明显低于对照组DV（59．55，P〈0．05）。C＋和CV的[Ca^2＋]i分别在加入thrombin 80s和100s后荧光强度分别达峰值48．19±9．84和45．64±9．87（P〈0．05）；二者均在加入TRAP60s后达峰值，分别为111．31±25．00和52．93±11．21（P〈0．05）。D-和DV的[Ca^2＋]i在加入thrombin 60s后达峰值，分别为40．71±5．89和61．07±21．36（P〈0．05），二者均在加入TRAP40s后达峰值，分别为84．98±11．23和102．58±21．48（P〈0．05）。结论PLA801D和PLA801C的转移潜能可能与其细胞的[Ca^2＋]i有关。激活PAR-1能够上调PLA801D和PLA801C的细胞内Ca^2＋信号。PAR-1促进肺巨细胞癌转移的机制与上调细胞内Ca^2＋有关。
- 孟宇宏张金强宁浩勇路平洪柳刘肖康筱玲虞积耀陆应麟
- 关键词：肺肿瘤巨细胞PAR-1
- 杂合启动子HREAF的构建及其肝癌特异性分析被引量：2
- 2003年
- 本研究将在几乎所有肝癌细胞中均有高特异性的杂合启动子HREAF用于构建肝癌特异性溶瘤腺病毒。根据文献报道的缺氧应答元件(HRE)和人甲胎蛋白(AFP)核心启动子(AF0.3)基因序列,设计并合成2对引物,采用PCR方法从肝癌细胞基因组DNA中扩增获得大小分别约为.560 bp的HRE DNA片段和310 bp的AF0.3 DNA片段,连接到pGEM-T Easy载体进行测序,证明获得了HRE和AF0.3的基因片段。将HRE和AF0.3的PCR产物分别进行PstI和SspI酶切并末端补平后直接连接,将此约700 bp的连接产物克隆到pGEM-T Easy载体进行测序,证明杂合启动子HREAF构建成功。将HREAF亚克隆至腺病毒穿梭载体pShuttle并在其后克隆入受其调控的腺病毒早期基因E1,构建成肝癌特异性溶瘤腺病毒穿梭载体pShuttle-HREAF-E1,经PCR及酶切鉴定。将pShuttle-HREAF-E1转染肺癌细胞株及AFP产量不等的不同人肝癌细胞株,经Ela的RT-PCR检测证实杂合启动子HREAF可调控目的基因在AFP产量不等的不同人肝癌细胞系中特异性高表达。杂合启动子HREAF及腺病毒穿梭载体pShuttle-HREAF-E1的构建为进一步研制肝癌特异性重组溶瘤腺病毒及其体内外肝癌特异杀伤作用的研究打下了基础。
- 陈泽建杜芝燕徐元基张金强陈惠华陆应麟
- 关键词：肝癌溶瘤腺病毒基因克隆
- 凝血酶受体-1在肺癌组织中的表达及其与转移的关系被引量：4
- 2006年
- 目的研究凝血酶受体(PAR)-1在肺癌组织中的表达及其与肺癌侵袭、转移的关系。方法免疫组织化学SP法、形态学计量及逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测肺癌原发灶和转移灶组织(36例液氮冻存肺癌组织、80例石蜡包埋肺癌组织)中PAR-1的表达。结果具有侵袭和转移部位的癌巢、脉管内癌栓、癌周围的肺泡上皮不典型增生灶及支气管腺导管上皮不典型增生灶均呈现较强的阳性反应。肺癌组织PAR-1蛋白表达阳性率为73.8%(59/80例);转移组85.7%(48/56)与非转移组45.8%(11/24)之间差异有统计学意义(P<0.05)。转移和非转移(P<0.05)、原发灶和转移灶(P<0.05)、肿瘤组织和肺组织(P<0.01)各组之间PAR-1蛋白含量差异有统计学意义;而肿瘤大小、组织学类型和组织学分化各组间差异无统计学意义(P>0.05)。肺癌组织PAR-1 mRNA表达阳性率63.9%(23/36例);转移组78.3%(18/23例)与非转移组38.5%(5/13)之间差异有统计学意义(P<0.05)。结论PAR-1过度表达与肺癌的转移表型、组织发生及恶性表型有关;PAR-1可能是肺癌转移过程中发挥重要作用的因素之一。
- 孟宇宏虞积耀陆应麟朱彦君张金强宁浩勇胡明刘肖康筱玲段玮
- 关键词：肺肿瘤肿瘤转移
- 肺癌转移相关基因的快速克隆
- 2002年
- 张金强王妍陆应麟
- 关键词：肺癌转移相关基因快速克隆肿瘤转移
