张晓溪
- 作品数：14 被引量：33H指数：3
- 供职机构：广西大学更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划国家自然科学基金国家科技重大专项更多>>
- 相关领域：农业科学生物学政治法律更多>>
- 水牛7sk/U6启动子克隆、活性分析及抗口蹄疫转基因小鼠模型建立
- 水牛具有适应性强、耐高温高湿、抗病力强、耐粗饲、容易饲养、使用年限长等优点,非常适合我国南方农村饲养,是我国南方极具开发价值的大家畜。口蹄疫是一种由口蹄疫病毒引起的以侵害偶蹄动物为主的急性、热性、高度接触性传染病,被世界...
- 张晓溪
- 关键词：水牛口蹄疫病毒RNA聚合酶
- 多个抗口蹄疫shRNA串联表达载体、其构建方法及其应用
- 本发明一种多个抗口蹄疫shRNA串联表达载体、其构建方法及其应用，属于基因工程、病毒学领域。本发明构建了多个抗口蹄疫shRNA串联表达载体，并利用慢病毒介导方法将该载体转入BHK-21细胞中获得对口蹄疫病毒复制有抑制作用...
- 石德顺张晓溪崔奎青刘庆友李湘萍
- 文献传递
- 丙戊酸处理对不同类型供体细胞猪手工克隆胚胎发育潜能的影响
- 2014年
- 为探讨丙戊酸(VPA)处理对不同供体细胞来源猪手工克隆(HMC)重构胚发育效果的影响,分别以猪卵巢颗粒细胞(GC)、猪胎儿成纤维细胞(PFF)和转基因猪胎儿成纤维细胞(Tr-PFF)为供体细胞,采用不同浓度(0、25、50、75、100、150nmol/L)VPA处理,观测比较不同试验组之间猪HMC重构胚发育的效果。结果显示,以GC为供体50nmol/L VPA处理组的猪HMC重构胚囊发育率达到48.92%,囊胚细胞总数为80.33个,极显著高于其他浓度组(P<0.01);以PFF为供体50、75nmol/L VPA处理组猪HMC重构胚囊胚率分别为52.82%和51.41%,极显著高于其他浓度组(P<0.01),其中50nmol/L处理组囊胚细胞总数为75.67,极显著高于其他浓度组(P<0.01);以Tr-PFF为供体100nmol/L VPA处理组的猪HMC重构胚囊胚率为42.74%,囊胚细胞总数为75.67,极显著高于其他浓度组(P<0.01)。结果表明,不同类型供体细胞对猪HMC重构胚的体外发育潜能有显著的影响,一定浓度的VPA处理可显著提高猪HMC重构胚体外发育囊胚率和细胞数,不同类型的供体细胞最佳VPA处理浓度亦有不同。
- 吕玲燕孙俊铭陆杏蓉张晓溪谢炳坤潘天彪刘庆友崔奎青石德顺
- 关键词：供体细胞VPA
- 水牛RNA聚合酶III启动子的克隆与鉴定被引量：1
- 2014年
- 【目的】获得有效的水牛RNA聚合酶III启动子序列,为开展水牛源细胞的基因特异沉默研究奠定基础。【方法】通过启动子上、下游保守序列对水牛源启动子7SK、U6进行克隆和启动子关键顺式作用元件识别,利用一段针对EGFP的shRNA片段(shEGFP)对水牛7SK、U6启动子进行功能性分析,然后分别在水牛源及鼠源细胞中与pEGFP-N1共转染,转染48h后用荧光显微镜检测EGFP的表达情况,并用流式细胞仪和荧光实时定量PCR检测EGFP沉默表达情况。【结果】克隆获得水牛7SK、U6启动子序列分别为430和357bp,其OCT-1(或CACCC盒)及TATA盒高度保守。连接shEGFP后与pEGFP-N1共转染细胞,通过荧光显微镜可观察到细胞发生了明显的荧光表达沉默现象;通过流式细胞分析,发现水牛7SK和U6启动子引导的shEGFP在水牛源细胞中沉默效率高达93.82%和87.45%;荧光实时定量PCR检测结果显示,在转染bu7SK-shEGFP和buU6-shEGFP的水牛源BFF细胞中,EGFP表达水平均显著低于其他物种启动子的细胞转染组(P<0.05),而在鼠源PT67细胞中,水牛启动子的启动效率与其他物种启动子差异不显著(P>0.05)。【结论】水牛7SK和U6启动子可高效启动shRNA表达,且具有一定的物种特异性。
- 张晓溪刘庆友邓彦飞罗婵崔奎青石德顺
- 关键词：水牛克隆基因沉默
- 两株水牛伊氏锥虫内转录间隔区基因序列的测定与系统进化关系
- 2009年
- 为研究从水牛分离到的伊氏锥虫广西株和湖北株的分类学地位,对2株伊氏锥虫的核糖体基因内转录间隔区(ITS1-5.8S-ITS2)基因进行了克隆和测序分析。用CLUSTALX1.83软件多重比对分析了序列差异,应用MEGA4.0软件绘制系统进化树。结果表明,这2株水牛伊氏锥虫的ITS1-5.8S-ITS2rRNA基因扩增产物分别为1102bp和1095bp,序列存在多态性,其中广西株的ITS-1序列长为340bp,ITS-2序列长为582bp,湖北株的ITS-1序列长为339bp,ITS-2序列长为587bp。系统进化分析显示,这2株伊氏锥虫分布在同一大枝的不同亚群中。
- 石云良李健黄维义张为宇张居作付强张晓溪黄文忠何国声
- 关键词：水牛伊氏锥虫系统进化分析
- 第三代慢病毒高效率包装系统的建立被引量：22
- 2009年
- 慢病毒介导法是最有前途的转基因动物生产方法之一,高滴度慢病毒颗粒的包装是慢病毒转基因动物技术的关键。本研究应用含有增强型绿色荧光蛋白基因(eGFP)的第3代慢病毒载体系统,用脂质体转染法将慢病毒系统4质粒共转染293T包装细胞,培养48～72h收集病毒上清液,通过超速离心进行浓缩,采用批量快速测定法(LaSRT)测定病毒滴度。结果显示,用脂质体转染法包装的慢病毒能成功地感染293T细胞,经检测病毒滴度达到5×108IU/mL以上,初步建成了高滴度慢病毒包装平台,为慢病毒介导制作转基因动物奠定了良好的研究基础。
- 张磊刘庆友胡天张晓溪崔奎青陆凤花石德顺
- 关键词：慢病毒转基因动物
- 乳腺特异性表达人Amylin基因载体、转基因动物的构建方法及应用
- 本发明提供乳腺特异性表达人Amylin基因载体，还提供乳腺特异性表达人Amylin基因转基因动物及其应用。本发明利用β‑酪蛋白启动子启动人Amylin基因，构建了乳腺特异性表达人Amylin基因载体，并将该载体转入动物基...
- 刘庆友黄孔威李志鹏崔奎青石德顺刘福航赵海潞张晓溪
- 文献传递
- 慢病毒介导多短发卡RNA串联载体构建与体内外抗口蹄疫效果评估被引量：2
- 2014年
- 【目的】探讨应用多短发卡RNA（ shRNA）串联沉默口蹄疫病毒RNA复制的可行性。【方法】针对口蹄疫病毒（Foot and mouth disease， FMDV）非结构蛋白基因3B和3D保守区域设计合成3个shRNA的串联片段，并分别用3个不同序列的启动子引导，成功构建了3shRNA串联的慢病毒RNAi载体。利用慢病毒3质粒包装系统共转于293T细胞包装成慢病毒颗粒。利用包装的慢病毒处理细胞及乳鼠，并接种FMDV，观察FMDV抑制情况。【结果和结论】结果显示，慢病毒处理BHK-21获得的转基因细胞中检测shRNA表达；通过O型FMDV接种发现转基因细胞对口蹄疫病毒的复制有明显的抑制，其中在接种后24 h病毒拷贝量仅为普通细胞的1/3；O型FMDV毒株接种于抗口蹄疫慢病毒载体预处理过的3～5日龄乳鼠，在5 LD50滴度下全部乳鼠均存活，在20 LD50滴度下存活率也提高50％。构建的慢病毒介导多shRNA串联表达抗口蹄疫载体能提高BHK-21细胞和乳鼠对口蹄疫病毒的抵抗力，有效地避免了5 LD50滴度内乳鼠的死亡现象，具有抵抗口蹄疫病毒毒性的良好性能。
- 张晓溪李兰玉刘庆友郑海学李湘萍崔奎青石德顺
- 关键词：口蹄疫病毒慢病毒载体
- 水牛泌乳期与非泌乳期乳腺组织miRNAs表达谱鉴定及差异表达分析被引量：2
- 2017年
- 旨在鉴定分析水牛乳腺泌乳期和非泌乳期miRNA的表达谱和差异作用机制。采集水牛泌乳期和非泌乳期乳腺组织,利用Solexa测序技术构建2个时期miRNAs表达谱,鉴定前体miRNAs、成熟miRNAs和新miRNAs,分析miRNAs的第一偏好性核苷酸和染色体分布,发掘水牛泌乳期和非泌乳期高表达及差异表达miRNAs。结果显示,本研究构建了水牛泌乳期和非泌乳期乳腺组织2个miRNA表达谱,分别获得12 768 110和12 569 467条18~31nt的高质量序列。测序确认了归属259个miRNAs家族的359个成熟miRNAs和363个pre-miRNAs及5个水牛特有的miRNAs。U是19和25nt miRNAs的5′端最普遍的核苷酸。bbu-let-7b、bbu-let-7a、miR-26a和miR-21等miRNAs在2个时期均呈现高表达;bbu-miR-148a、143、200c、200a和bbu-let-7f等miRNAs在非泌乳期特异性高表达。bbu-miR-125b、29a和bbu-let-7c等miRNAs在泌乳期特异性高表达。bbu-miR-148a、143、200a、141和30a-5p等miRNAs在泌乳期的表达量下降为非泌乳期的1/2以下。而bbu-miR-26a、29a、125b、99a和bbulet-7c等miRNAs在泌乳期表达量大于或等于2倍非泌乳期丰度。本研究构建了水牛泌乳期以及非泌乳期乳腺组织2个miRNAs表达谱,测序确认了259个水牛miRNAs家族的359个成熟miRNAs和363个前体miRNAs,5个水牛特有miRNAs和10个高差异表达miRNAs,为进一步阐明奶水牛泌乳关键miRNAs作用机制奠定了基础。
- 蔡小艳鲍正攀古景开邓凯张晓溪任艳萍沈朋雷石德顺刘庆友
- 关键词：水牛乳腺组织信号通路
- 猪卵母细胞体外成熟的发育潜力及核移植重构胚构建方法的研究被引量：3
- 2009年
- 为了提高猪体细胞核移植重构胚发育潜力,本研究对体外成熟28h、32h、36h、40h、44h、48h、52h和56h的猪卵母细胞分别进行去核构建重构胚。研究结果表明,成熟44h的卵母细胞核移植后有较高的融合率(58.99%)、卵裂率(67.52%)和囊胚率(22.78%),而成熟48h的卵母细胞则分别为56.51%、65.73%和15.96%;且卵龄为44h的卵母细胞核移植后分裂率与囊胚率显著高于卵龄为40h、36h、32h、28h的卵母细胞的分裂率与囊胚率(P<0.05)。卵龄为48h的卵母细胞融合率高于卵龄为52h卵母细胞的融合率(P<0.05)。同时我们还探讨了不同去核方法(盲吸法、Hochest33342染色法和Spindle-view system)对猪体细胞核移植重构胚发育能力的影响。研究结果发现,盲吸法、Hoechest33342染色法和Spindle-view system法的去核率分别达到76.33%,100.00%和98.40%。Hoechest染色法去核率显著高于盲吸法的去核率(P>0.05),而与Spindle-view法去核率没有差异(P>0.05)。三种方法在融合率和囊胚率方面差异不显著(P>0.05),但Hoechest染色法的分裂率较低,差异显著(P<0.05)。进一步的研究表明,细胞质内注射进行核移植构建重构胚的分裂率和囊胚率分别为68.13%和6.44%;透明带下注射法则为60.37%和8.08%,两者差异不显著(P<0.05);两者均可运用于猪体细胞的核移植,这为建立有效的猪体细胞核移植体系提供了参考。
- 黄雅琼石德顺张晓溪张顺谭世俭陆凤花王晓丽杨素芳蒋建荣刘庆友
- 关键词：卵母细胞核移植重构胚发育潜力
