张文娟
- 作品数：8 被引量：12H指数：3
- 供职机构：天津医科大学第二医院更多>>
- 发文基金：天津市应用基础与前沿技术研究计划天津市自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- luxS基因在变形链球菌生物膜形成中的硫代谢作用
- 2010年
- 目的通过比较在不同条件培养基中变形链球菌IngbrittC国际标准株及luxS基因缺陷株24h生物膜形成的厚度及平均荧光强度,探讨luxS基因在变形链球菌生膜形成中的硫代谢作用。方法建立以圆形玻片为载体的生物膜模型,通过营养补充实验培养两菌株生物膜,利用激光共聚焦扫描显微镜观察测定两菌株生物膜厚度和平均荧光强度。结果当分别加入一定浓度半胱氨酸、蛋氨酸时,缺陷株生物膜厚度有明显增长,但未恢复至标准株水平;加入半胱氨酸,标准株生物膜厚度有所增加;当加入S-腺苷甲硫氨酸时,缺陷株与标准株生物膜的厚度均降低。结论在变形链球菌生物膜形成中,luxS基因不但具有密度感应功能,在硫代谢中也起着重要作用。
- 于丹妮任志明韩育植张文娟
- 关键词：变形链球菌生物膜激光共聚焦扫描显微镜
- Cre/loxP位点特异性重组系统及其在口腔医学领域中的应用被引量：4
- 2011年
- Cre/loxP位点特异性重组系统由Cre重组酶和loxP位点组成。Cre重组酶可识别loxP位点并催化2个loxP位点之间的DNA进行精确的位点特异性重组。该系统作用方式简单、重组效率高,可定时、定位地对基因进行修饰,已成为一种定向改变生物活体遗传信息的重要的试验工具。本文主要就Cre/loxP系统的结构、重组机制、特点及其在口腔医学领域中的应用作一综述。
- 张文娟于丹妮
- 关键词：位点特异性重组CRE/LOXP系统CRE重组酶
- 动态观察变形链球菌luxS基因缺陷株生物膜的形成
- 2010年
- 目的:应用倒置荧光显微镜动态观察变形链球菌(变链菌)Ingbritt C国际标准株及luxS基因缺陷株不同时期生物膜形成的差异。方法:建立以玻片为载体的生物膜模型,分别取两菌株6、18、24、48h的生物膜,观察不同时期两菌株生物膜与玻片的黏附程度,吖啶橙(AO)荧光染色后,倒置荧光显微镜下及时观察生物膜形态及细菌之间相对活动度,并对不同时期的生物膜标本进行处理和保存,观察3个月后倒置荧光显微镜下生物膜形态有无改变。结果:应用倒置荧光显微镜可对孔板内生物膜进行直接动态观察,镜下两菌株生物膜形态多样;6h开始出现细菌聚集成膜,18～24h形成最佳,与玻片黏附牢固而不易冲掉;48h标准株生物膜附着于玻片能力较缺陷株弱,易整体滑落;两菌株生物膜标本经处理保存3个月后镜下形态未发生改变。结论:变链菌标准株与luxS基因缺陷株生物膜具有不同的空间立体结构,形态多样,且在不同时期、生物膜形态、细菌间的相互作用及黏附力不同。
- 任志明于丹妮韩育植张文娟
- 关键词：生物膜吖啶橙显微镜检查
- 无标记的变异链球菌的clpP基因缺陷株的构建被引量：4
- 2010年
- 目的 构建无标记的clpP基因缺陷的变异链球菌（简称变链菌）突变株.方法 设计引物PCR扩增大观霉素（Sp）抗性基因,使loxP位点位于Sp抗性基因的两侧,构建出大观霉素抗性基因盒（loxP-Sp-loxP）.将clpP基因克隆到pGEM-T-Easy TA载体后,双酶切以去除clpP基因的部分序列,并连入loxP-Sp-loxP,得到clpP基因缺陷的同源重组载体pIB△clpP-Sp.将该载体线性化并电转变链菌标准株,大观霉素筛选得到clpP基因缺陷株.再以温敏质粒pCrePA电转缺陷株,Cre重组酶表达并删除选择标记基因,继而在限制性温度下培养以消除pCrePA,获得无标记的clpP基因缺陷株,并进行PCR及DNA测序鉴定.结果 PCR及DNA测序结果表明clpP基因内部分序列已被删除,且无Sp抗性基因,该部位只留有一个34 bp的loxP位点.结论 在变链菌中成功构建出无标记的clpP基因缺陷株,为进一步研究clpP基因的功能及其在变链菌致龋过程中的作用奠定了基础.
- 彭诚于丹妮张文娟韩育植任志明
- 关键词：变异链球菌CIPPCRE/LOXP重组系统
- 利用Cre/loxP系统构建无标记的htrA基因缺失的变链菌突变株被引量：4
- 2011年
- 目的:利用Cre/loxP位点特异性重组系统构建口腔变异链球菌htrA基因缺陷株,并删除选择标记。方法:PCR扩增变链菌的htrA基因片段并克隆到pGEM-T-EasyTA载体。随后插入卡那霉素(Km)抗性基因盒(loxP-Km-loxP)并替换htrA基因的部分序列,使htrA基因失活,构建出htrA基因缺失的同源重组载体pIB△htrA-Km。将该质粒电转化变链菌标准株,抗生素筛选出发生同源重组的菌株,再用含cre基因的热敏质粒pCrePA电转化,删除Km抗性基因。在限制性温度下培养,消除质粒pCrePA,获得无标记的变链菌htrA基因缺陷株,经PCR及DNA测序鉴定。结果:PCR及DNA测序分析证明htrA基因的部分序列及Km抗性基因均被删除,该部位只留下一个loxP位点。结论:成功构建出了变链菌htrA基因缺失突变株,并删除了抗性标记,为进一步研究htrA基因缺失对变链菌致龋毒力的影响奠定了基础。
- 张文娟于丹妮韩育植任志明
- 关键词：丝氨酸内肽酶类基因缺失
- 应用Cre-loxP＊系统构建无标记的变形链球菌双基因缺陷株被引量：2
- 2011年
- 目的 利用以Cre-loxP为基础的位点特异性重组系统Cre-loxP＊构建变形链球菌的htrA和clpP双基因缺失突变株,为利用该系统构建无标记的多基因缺陷株奠定基础.方法 将htrA基因克隆到pGEM-T-Easy TA载体,并插入卡那霉素抗性基因愈（lox71-Km-lox66）使htrA基因失活,获得htrA基因删除载体pGEM-T-△htrA/Km.用相同方法构建带有大观霉索抗性标记的clpP基因删除载体pGEM-T-△clpP/Sp.用pGEM-T-△htrA/Km转化变形链球菌标准株,筛选出发生同源重组的菌株.用cre表达质粒pCrePA转化同源重组菌株,删除抗性基因.由于pCrePA的热敏复制子,改变温度培养可消除pCrePA,得到无标记的htrA基因缺失突变株MS△htrA,并经聚合酶链反应（PCR）及DNA测序鉴定.用同样的方法在MS△htrA中删除clpP及大观霉索抗性标记,获得无标记的htrA和clpP双基因缺失突变株MS△htrA-△clpP.结果 PCR及DNA测序鉴定结果表明,htrA和clpP基因及抗性标记已被删除,无标记的htrA和clpP双基因缺失突变株成功构建.结论 利用位点特异性重组系统Cre-loxP＊初步构建出变形链球菌的无标记htrA和clpP双基因缺失突变株,为将该系统应用于构建口腔变形链球菌无标记的多基因缺陷株提供了实验依据.
- 于丹妮张文娟彭诚韩育植任志明
- 关键词：基因缺失
- 利用Cre-loxP系统构建变链菌无标记的htrA、clpP单基因缺陷株及htrA和clpP双基因缺陷株
- 目的：将同源重组技术与Cre-loxP位点特异性重组系统结合起来，在变链菌中构建htrA基因缺陷株和clpP基因缺陷株，并分别删除其抗生素抗性标记，获得无标记的单基因突变株，为构建无标记的基因缺陷株奠定基础。利用以Cre...
- 张文娟
- 关键词：变异链球菌
- 变形链球菌luxS基因在硫代谢中的功能研究被引量：3
- 2011年
- 目的 采用前期实验已构建成功的luxS基因缺失的变形链球菌突变株,分析luxS基因在口腔变形链球菌的密度感应及硫代谢中的双重作用.方法 在不同硫限定条件培养基（半胱氨酸、蛋氨酸、标准株无菌上清液、S-腺苷高半胱氨酸、S-腺苷甲硫氨酸,空白对照为脑心浸液培养基）中分别对不同培养时间（24、48 h）的变形链球菌标准株和突变株的生长进行吸光度值（A值）的测定与分析,通过激光扫描共聚焦电子显微镜观察测定并比较不同培养条件下两菌株生物膜厚度的差异.结果 在半胱氨酸培养基中培养48 h,突变株生长A值及生物膜厚度均有所增长,分别为（1.301±0.009）和（45.009±0.429）μm,但未及标准株水平（P＜0.05）;在蛋氨酸及S-腺苷高半胱氨酸培养基中培养24 h,突变株的生长A值及生物膜厚度与空白对照相比均有所补充,在蛋氨酸培养基中突变株的生长A值及生物膜厚度分别为（0.448±0.028）和（37.068±2.392）μm,在S-腺苷高半胱氨酸培养基中,突变株的生长A值及生物膜厚度分别为（0.460±0.005）和（27.343±1.107）μm,但均未及标准株水平（P＜0.05）,48 h时达到标准株水平;在标准株上清液培养基中突变株的生长A值及生物膜厚度均明显增高且超过标准株水平;在S-腺苷甲硫氨酸培养基中两菌株的生长A值及生物膜厚度与空白对照相比均有不同程度的降低.结论 luxS基因在变形链球菌中不但具有密度感应功能,在硫代谢方面也发挥着一定作用.
- 于丹妮任志明韩育植张文娟
- 关键词：生物膜
