张利能
- 作品数：16 被引量：169H指数：8
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- 发文基金：国家自然科学基金上海市教育委员会重点学科基金国家教育部博士点基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 人肝细胞生长因子杂交瘤细胞株的建立
- 2000年
- 目的 建立能分泌人肝细胞生长因子（ｈＨＧＦ）的杂交瘤细胞株。方法 从４～５月龄的人胎肝中分 离贮脂细胞，与次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖转移酶（ＨＧＰＲＴ）缺陷型人肝癌细胞株（ＳＭＭＣ－７７２１）融合成杂交瘤细胞，用 超滤膜对培养上清液初步分离，并用Ｈ３－ＴｄＲ掺入法测定各组分中ｈＨＧＦ的生物活性。结果 培养上清液中相对分 子质量 １０ ０００～ ３０ ０００的组分ｈＨＧＦ活性显著增高，对小鼠肝细胞增殖有明显的促进作用，并存在量效依赖关系，而 相对分子质量小于１０ ０００或大于 ３０ ０００的组分与对照相比 ｈＨＧＦ活性无明显改变。结论 ｈＨＧＦ杂交瘤细胞的建 立可作为获得ｈＨＧＦ的一条新途径。
- 韩伟国杨伟珠钱宇平吕伟中张利能查锡良
- 关键词：肝细胞生长因子杂交瘤细胞
- 人肝细胞癌中抑癌基因PTEN/MMAC1/TEP1的突变分析被引量：13
- 2000年
- PTEN/MMAC1/TEP1(PTEN)是新近分离到的抑癌基因,在多种肿瘤中存在突变。我们检测了34例人肝细胞癌中PTEN基因第5外显子和第8外显子的突变。采用聚合酶链方法以内含子引物扩增第5和第8外显子,继之以单链构象多态性和测序技术分析PTEN基因突变。有4例肝细胞癌SSCP显示异常条带并经测序证实存在突变。2例发生于第4内含子,突变位点相同;另两例发生于第8外显子,其中1例碱基颠换导致PTEN蛋白产物304位半胱氨酸突变为甘氨酸。
- 张利能查锡良俞强贺建宇
- 关键词：人肝细胞癌抑癌基因PTENMMAC1突变分析
- 调节食欲生殖的信号肽在雄激素致不孕大鼠中的表达及滋肾阴药的作用被引量：19
- 2000年
- 目的 探讨雄激素不孕大鼠 (ASR)肥胖及无排卵的中枢机制及滋肾阴药的作用。方法 给出生 9日龄SD雌性大鼠一次性皮下注射丙酸睾丸酮 ,建立ASR模型。用原位杂交、双标原位杂交的方法检测与肥胖发生有关的几种信号肽 /激素如神经肽Y(NPY)、瘦素 (leptin)受体长体 (OB Rb)、前阿黑皮素原 (POMC)mRNA在ASR下丘脑弓状核 (ARC)的表达含量和其关系 ,以及灌服滋肾阴药后上述指标的变化。结果 ASR呈肥胖、无排卵状态。ASR的ARC中NPYmRNA神经元上有OB RbmRNA表达 ,NPYmRNA神经元与POMCmRNA神经元有突触联系。NPY和POMC基因表达水平明显增加 (P <0 .0 1) ,OB Rb 基因表达水平明显降低 (P <0 .0 1)。中药治疗ASR后 ,大鼠出现减肥和排卵现象 ,ARC中NPY、POMC基因表达下降 ,OB Rb 基因表达上升至正常大鼠水平 (P >0 .0 5 )。结论 ASR肥胖及无排卵可能与NPY、POMC基因过表达、OB Rb mRNA数目减少有关 。
- 孙斐俞瑾武淑芳张利能查锡良
- 关键词：原位杂交方法不育症ASR信号肽
- Hsp70蛋白自身磷酸化对其分子伴侣功能的影响被引量：1
- 2006年
- 近年对分子伴侣蛋白Hsp70作用机制的研究发现,其ATP功能区域X光晶体结构有一个新的钙离子结合区域,这个新的功能区域与Hsp70分子的ADP结合、ATP水解及合成有关.有报道认为,Hsp70蛋白的NDP激酶样作用,通过形成酸不稳定性自身磷酸化中间体催化γ-磷酸基团在ATP和ADP间传递,组氨酸H89与这个新的区域有密切关系,有可能与Hsp70蛋白形成自身磷酸化中间体有关.本研究运用基因定位诱导突变技术,将89位组氨酸以丝氨酸替代(H89S),通过比较Hsp70野生型及突变型蛋白的自身磷酸化过程的改变,及其对Hsp70蛋白体外荧光素酶活性影响的不同,初步探讨Hsp70作用机制.结果发现,突变的H89S蛋白自身磷酸化过程及体外变性荧光素酶重折叠受到抑制.野生型蛋白未受到影响,野生型Hsp70可以形成酸不稳定的自身磷酸化中间体,产生CDP依赖性解磷酸反应,而H89S突变型蛋白不能形成这种反应.89位组氨酸点突变能显著降低ATP酶交换反应及体外变性荧光素酶重折叠水平,但它的自身磷酸化可能并非唯一必需的介导位点或只是一个选择性的功能侧链.
- 吕元明陶蕾张利能
- 关键词：HSP70自身磷酸化
- Der f2重组蛋白用于变应性鼻炎患者血清ELISA检测被引量：2
- 2010年
- 目的:以重组表达的野生型粉尘螨变应原蛋白质第2组(Derf2)分作为固相包被抗原,建立间接酶联免疫吸附试验(ELISA)法,检测粉尘螨致敏的持续性变应性鼻炎患者血清中的特异性IgE浓度。方法:经过皮肤点刺试验证明的24例粉尘螨反应阳性血清和2例阴性血清作为IgE血清样本。以粉尘螨变应原蛋白质第2组分固相包被酶标板,辣根过氧化物酶(HRP)标记的抗人IgE单抗作为第2抗体组成测试系统分析特异性IgE。结果:间接ELISA系统检测灵敏度为0.73U.mL-1。在4.0U.mL-1、12.0U.mL-1、22.0U.mL-1浓度,批内重复性和批间重复性分别为9.5%,7%,6.1%和12.8%,9.1%,7.2%。24例皮试阳性患者血清经ELISA分析,有22例阳性。结论:以粉尘螨变应原蛋白质第2组分作为固相包被抗原的间接ELISA法可用来对患者血清sIgE作定量或定性分析,有助于持续性变应性鼻炎的实验诊断。
- 徐枫王建中张利能
- 关键词：特异性免疫球蛋白E
- 人肝细胞癌抑癌基因PTEN的缺失和突变分析被引量：10
- 2000年
- 张利能余强贺建宇王丽影查锡良
- 关键词：肝细胞癌抑癌基因基因突变
- DAPK基因CpG岛的异常甲基化在人膀胱癌组织中的意义被引量：6
- 2008年
- 目的探讨DAPK基因CpG岛的异常甲基化在膀胱癌组织中的意义。方法选择临床膀胱癌组织标本24例和癌旁组织标本22例进行研究。用免疫组织化学和Western blot方法分别检测DAPK基因和DNMTl基因在不同组织中的表达情况。采用甲基化特异PCR（MSP）方法检测不同组织标本中DAPK基因的甲基化状态。结合上述结果分析DAPK基因甲基化及其表达状态与肿瘤之间的关系。结果DAPK基因表达于细胞质及胞膜，在正常膀胱黏膜中强表达，在膀胱癌组织中弱表达或不表达。在膀胱癌组织中有14例（14／24，58．3％）检测到DAPK基因的甲基化改变，而正常组织中未检测到其甲基化。甲基化改变与肿瘤病理分级无显著相关性，但是与肿瘤肌层浸润（P〈0．05）及复发（P〈0．05）明显相关。结论DAPK基因的甲基化改变可能是肿瘤复发的一个重要预测指标。肿瘤组织中DNMTl的高表达提示其在调节肿瘤组织抑癌基因甲基化中发挥重要作用。
- 胡礼炳王国民张利能
- 关键词：膀胱癌甲基化蛋白激酶
- 膀胱癌细胞中DAPK基因启动子甲基化状态分析被引量：15
- 2007年
- 目的分析DAPK抑癌基因在T24、5637、ScaBER三种膀胱癌细胞中的表达情况及该基因启动子区的甲基化状态。方法采用半定量RT-PCR和Western blot分别检测三种膀胱癌细胞中DAPK基因的表达,用甲基化特异PCR(MSP)方法检测三种细胞中的DAPK基因启动子甲基化状态。观察甲基转移酶(DMNT)抑制剂5-aza-2'-deoxy-eytidine(5-aza-CdR)对以细胞中的基因表达和甲基化状态的影响。结果T24细胞中未检测到DAPK基因的表达,也未检测到启动子甲基化;5637细胞中该基因表达水平极低,在SeaBER细胞中该基因的表达较前两者要高。5637细胞和ScaBER细胞中均有甲基化改变。2.5μmol/l浓度的5-aza-CdR可以有效上调5637和SeaBER细胞的DAPK基因的表达。结论抑癌基因DAPK的表达异常与移行细胞癌的发生发展有重要联系,且基因启动子区CpG岛的异常甲基化在调节DAPK基因的表达中发挥重要作用。
- 胡礼炳王国民张利能查锡良
- 关键词：膀胱癌DNA甲基化启动子
- 蛋白质酪氨酸磷酸化在抗失巢凋亡的癌细胞中的失调变化被引量：3
- 2005年
- 失巢凋亡是细胞与细胞外基质脱离发生的一种特定的凋亡方式.癌细胞抗失巢凋亡或失巢生存能力可以使之在转移过程中生存.业已发现癌细胞失巢生存与PI3K-PKB/Akt、MAPK这两条重要信号途径有关,但是PI3K-PKB/Akt、MAPK通路的上游酪氨酸激酶途径还不甚清楚.为此设计了一种基于SH2-pTyr特异性结合特性的功能性筛选方法,以期发现癌细胞失巢生存相关的酪氨酸磷酸化蛋白质,为最终明确酪氨酸激酶途径提供有力的实验依据.实验发现,MDCK细胞悬浮培养后失巢凋亡,但癌细胞可以失巢生存.与这一现象相一致的是,悬浮培养后,MDCK细胞中一系列SH2结合的酪氨酸磷酸化蛋白质水平急剧下降,而癌细胞中蛋白质酪氨酸磷酸化水平并不呈锚着依赖性.细胞悬浮培养后,随着培养时间的延长,MDCK细胞中AblSSH2结合的靶蛋白酪氨酸磷酸化水平逐渐降低,在H460肺癌细胞中经过短暂下降后升高,H1792肺癌细胞随着培养时间的延长,AblSH2结合的靶蛋白酪氨酸磷酸化水平逐渐增加.FynSH2和CrkSH2结合的蛋白质分别为FAK和p130Cas,后者是重要的失巢生存信号.这些结果提示,酪氨酸磷酸化蛋白质可能赋予肺癌细胞失巢生存能力.结果也表明,功能性SH2筛查方法可以有效地发现肿瘤细胞中失巢生存相关的酪氨酸磷酸化蛋白质.
- 张利能查锡良查锡良
- 关键词：失巢凋亡酪氨酸磷酸化癌细胞
- 中药天癸方对雄激素致不孕大鼠下丘脑Leptin受体及神经肽Y mRNA的影响被引量：48
- 2000年
- 目的：从基因转录水平探讨中药天癸方对雄激素致不孕大鼠（ASR）肥胖及无排卵的影响。方法：采用α－32P标记瘦素（leptin）受体（OB－R）及神经肽Y（NPY）寡核苷酸探针原位杂交、放射自显影技术结合图像分析，观察中药治疗前后下丘脑弓状核（AR）两种物质mRNA的表达变化。结果：ASR中ARC的NPY基因表达水平明显增加（P＜0．01），OB－R基因表达水平明显降低（P＜0．01），ASR呈肥胖、无排卵状态。用中药天癸方治疗后，NPY基因表达下降，OB－R基因表达上升至正常大鼠水平。结论：ASR肥胖及无排卵可能与NPYmRNA过度表达、OB－RmRNA数目异常有关，中药可调节NPY和OB－RmRNA表达而发挥减肥及促排卵作用。
- 孙斐俞瑾张利能查锡良
- 关键词：不育症LEPTIN受体MRNA
