崔颜宏
- 作品数：6 被引量：25H指数：3
- 供职机构：江苏大学基础医学与医学技术学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 纤维蛋白支架促进神经干细胞向神经元分化并抑制星形胶质细胞增生被引量：2
- 2010年
- 目的探讨纤维蛋白支架对神经干细胞和星形胶质细胞分化及增殖的影响。方法分别培养胚胎大鼠脊髓来源的神经干细胞和新生鼠脊髓神经胶质细胞,接种于纤维蛋白支架上,同时用多聚赖氨酸修饰的玻片作为对照。于体外培养不同时间后,用神经丝蛋白(NF200)对神经细胞进行免疫荧光染色,测量各复孔(n=4)内NF阳性细胞的突起长度,计算其平均值;用胶质纤维酸性蛋白(GFAP)对胶质细胞进行染色,各复孔(n=4)内统计5个不同视野的胶质细胞总数和GFAP阳性细胞数,计算GFAP阳性细胞相对数量的平均值。比较在纤维蛋白支架和玻片上神经干细胞分化、神经纤维延伸及神经胶质细胞增殖的差异。同时用免疫印迹技术对荧光染色结果进行验证。上述实验各重复3次。结果纤维蛋白支架组的NF阳性纤维明显长于对照组,GFAP阳性星形胶质细胞相对数量明显少于对照组,GFAP的表达水平明显低于对照组。结论纤维蛋白支架可促进神经干细胞向神经细胞分化,并有利于神经纤维的延伸而抑制星形胶质细胞的增殖和成熟。
- 崔颜宏王穆彬陈静陈谦孙湘兰龚爱华张志坚陈永昌姜平
- 关键词：纤维蛋白神经元星形胶质细胞免疫印迹法
- 纤维蛋白支架移植对大鼠脊髓损伤后神经再生和胶质瘢痕形成的影响被引量：6
- 2009年
- 观察纤维蛋白-纤粘连蛋白-层粘连蛋白复合支架移植对大鼠脊髓损伤后神经再生和胶质瘢痕形成的影响,评价该支架移植修复脊髓损伤的可行性。本研究将圆柱状复合支架移植入大鼠脊髓完全横断缺损部位,同时以该模型动物作为对照组。分别于术后4w、8w、12w对动物下肢运动功能进行BBB评分。然后取出支架/脊髓组织,用免疫荧光双标和免疫印迹技术分析损伤部位神经纤维再生和胶质细胞增生情况;并用透射电镜观察支架移植部位的组织学结构。结果显示:术后4～12w支架移植组动物BBB评分明显高于对照组(P<0.05)。于术后4w,移植组可见支架内有少量神经纤维,此后神经纤维逐渐增多,而胶质细胞增生不明显;对照组脊髓损伤局部可见坏死空洞,空洞周边胶质细胞增生明显。免疫印迹检测结果表明,移植组神经丝蛋白(NF-200)相对含量高于对照组;对照组胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的相对含量高于实验组。以上结果提示:纤维蛋白支架移植可促进大鼠脊髓损伤后神经再生,并抑制胶质瘢痕形成。纤维蛋白(原)作为生物材料用于构建修复脊髓损伤的组织工程支架具有良好的应用前景。
- 崔颜宏王穆彬陈静龚爱华步雪峰孙湘兰谷晓楚庄琴钱雷敏姜平张志坚
- 关键词：纤维蛋白纤粘连蛋白脊髓损伤神经丝胶质纤维酸性蛋白
- 不同培养代数大鼠骨髓基质细胞向神经元样细胞转分化能力的比较被引量：5
- 2009年
- 为确定诱导大鼠骨髓基质细胞(BMSCs)向神经元样细胞转分化的适宜培养代数,本研究比较了不同培养代数的BMSCs的转分化潜能。首先体外培养大鼠BMSCs并传代,于不同的培养代数利用碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、神经生长因子(NGF)、全反式维甲酸(RA)、音猬因子(Shh)诱导分化,随后运用免疫荧光法和免疫印迹法检测诱导细胞中的神经元样细胞。结果显示骨髓基质细胞体外培养1至3代时能够被诱导分化为神经元样细胞,培养至第7代时丧失转分化为神经元样细胞的潜能。上述结果提示:传代次数增多将引起BMSCs自发分化,使其向神经元样细胞转分化的能力下降,因而BMSCs培养至第3代时适宜进行诱导分化。
- 陈谦陈静崔颜宏庄琴胡萍萍龚爱华张志坚
- 关键词：骨髓基质细胞分化神经元样细胞传代
- NGF及其活化受体p-TrkA在人脑胶质瘤细胞株U251细胞周期中的多靶点分布模式被引量：10
- 2007年
- 为了探讨神经生长因子(NGF)及其活化受体磷酸化的酪氨酸蛋白激酶A(p-TrkA)在人脑胶质瘤细胞株U251细胞周期中的多靶点分布模式及其生物学意义,采用免疫荧光双标记技术对处于细胞周期不同时相细胞内的NGF和p-TrkA的动态分布进行亚细胞定位,并观察了抗癌药物羟基脲、紫杉醇和秋水仙素及抗NGF-β中和血清对NGF和p-TrkA在细胞分布的影响;用免疫印迹技术检测细胞核和细胞质内NGF和p-TrkA的相对含量以及细胞培养液内的分泌性NGF。免疫荧光染色结果表明:分裂相细胞在重新贴壁生长6h后,NGF主要分布于核周区,p-TrkA主要定位于细胞膜;培养12h后,NGF和p-TrkA共同转位至细胞核内;在M期,NGF主要定位于中心体,p-TrkA主要定位于纺锤丝;用羟基脲将细胞阻滞于G1/S期后,NGF和p-TrkA主要积聚在细胞核内;用紫杉醇或秋水仙素处理后,NGF与γ-Tubulin仍然共定位于中心体,p-TrkA与α-Tubulin共定位于异形纺锤丝上或弥散分布于细胞质内。用兔抗人NGF-β抗血清中和培养基中分泌性的NGF后,细胞内NGF和p-TrkA免疫荧光强度明显减弱。免疫印迹结果显示:G1/S期细胞核内的NGF和p-TrkA蛋白条带明显浓于细胞质内的蛋白条带。上述结果提示:人脑胶质瘤U251细胞高表达NGF及其高亲和力受体TrkA,并将NGF分泌至细胞外;胞外NGF与细胞膜上TrkA结合后形成NGF/p-TrkA复合物内化入胞内;NGF/p-TrkA在细胞内的分布具有细胞周期性特征;NGF/p-TrkA可通过多靶点作用模式调控U251细胞的生物学行为。上述多靶点分布模式为研制NGF修饰的抗肿瘤靶向药物提供了细胞生物学基础。
- 张志坚杨勇于婷崔颜宏龚爱华孙湘兰步雪峰徐希明肖德生陈永昌
- 关键词：神经生长因子人脑胶质瘤细胞周期靶向药物
- 纤维蛋白支架对人嗅鞘细胞髓鞘形成相关蛋白表达的影响被引量：1
- 2009年
- 目的:探讨纤维蛋白支架对人嗅鞘细胞髓鞘相关蛋白表达的影响。方法:将体外培养的成人鼻粘膜嗅鞘细胞种植于纤维蛋白支架,用多聚赖氨酸修饰的玻片作为对照底物,培养14天后用扫描电镜观察细胞的形态学变化并对细胞内髓鞘形成相关蛋白2,3-环核苷3-磷酸二酯酶(2′,3′cyclic nucleotide 3′phosphodiesterase,CNPase)和髓鞘碱性蛋白(myelin basic protein,MBP)进行免疫荧光染色定位和免疫印迹半定量测定,分析纤维蛋白支架对人嗅鞘细胞CNPase和MBP表达的影响。结果:人嗅鞘细胞种植于纤维蛋白支架后,其形态为长条带状,细胞成束排列,方向一致。细胞内CNPase和MBP表达水平明显高于对照组。结论:纤维蛋白支架与人嗅鞘细胞具有很好的生物相容性并可促进细胞表达髓鞘相关蛋白CNPase和MBP;将该组织工程支架用于移植治疗脊髓损伤,有利于再生神经纤维的髓鞘形成。
- 陈静黄秋生窦毅宗海洋崔颜宏庄琴孙湘兰龚爱华张志坚
- 关键词：髓鞘碱性蛋白
- 再生丝素蛋白膜作为人嗅鞘细胞移植支架的研究被引量：1
- 2009年
- 探讨再生丝素蛋白膜对人嗅鞘细胞(hOECs)生物学特性的影响。人嗅鞘细胞接种在再生丝素蛋白膜上,取不同时相的细胞做下列实验。72 h固定,用免疫荧光染色技术观察人嗅鞘细胞的标志蛋白NT-3、S-100、GFAP、NGFRp75,用电子显微镜观察细胞在再生丝素蛋白膜上的生长状况;分别于48、72、96 h提取总蛋白,用免疫印迹法分析人嗅鞘细胞标志蛋白的表达情况;用MTT法分析细胞在再生丝素蛋白膜上的生长曲线。hOECs在再生丝素蛋白膜上能够很好地附着、铺展、生长,嗅鞘细胞的形态大多为梭形,嗅鞘细胞标志蛋白NT-3、NGFRp75、S-100及GFAP均呈免疫反应阳性,且免疫印迹结果与形态学结果一致;电镜结果显示,再生丝素蛋白膜的表面微纳结构适于细胞贴附、铺展;嗅鞘细胞在再生丝素蛋白膜上的生长曲线与培养板上无明显差异。再生丝素蛋白膜适合人嗅鞘细胞的贴附、增殖、生长,再生丝素蛋白膜与hOECs有较好的相容性,可以作为hOECs生长的候选组织工程支架用于修复神经损伤。
- 龚爱华陈静王穆彬杨勇陶燕崔颜宏张志坚李明忠杨吉成
- 关键词：神经损伤
