孙胜
- 作品数：36 被引量：202H指数：7
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- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划北京市自然科学基金更多>>
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- 缺血(氧)细胞保护的机制与防治研究
- 刘秀华陈宜鸿李玉珍武旭东徐菲菲张振英孙胜祝晓梅刘凤英
- 缺血(氧)引起组织细胞坏死与凋亡，直接影响相应组织器官功能，是威胁人类健康的重要问题，阐明延缓细胞损伤(细胞保护)的机制将为提高缺血(氧)疾病救治和器官移植成功率提供新的思路。缺血预处理和缺血后处理是迄今最强的内源性细胞...
- 关键词：
- 关键词：器官移植细胞保护作用
- 缺氧预处理心肌组织蛋白质组双向凝胶电泳分析
- ＜正＞ [目的]分析缺氧预处理诱导的心肌组织与正常心肌组织蛋白质的差异表达.[方法]参照Sasak等人报道的方法复制大鼠缺氧预处理（HPC）模型。制备心肌组织二向电泳（2-DE）蛋白质样品,按照Sanchez等人改进的胶...
- 王彦珍孙胜蔡莉蓉徐菲菲刘秀华
- 文献传递
- 缺氧预处理诱导心肌细胞蛋白质组变化的初步研究被引量：21
- 2006年
- 缺氧预处理(hypoxiapreconditioning,HPC)可模拟缺血预处理(ischemicpreconditioning,IPC)对缺血/再灌注心肌的保护作用,涉及细胞内众多分子事件.本工作旨在采用双向电泳和质谱分析等蛋白质组分析技术,发现缺氧预处理后心肌细胞蛋白质整体表达上的变化,初步分析其与缺氧预处理心肌保护作用的关系.将原代培养的SD乳鼠心肌细胞分为2组(n=6):(1)缺氧预处理组(HPC):将细胞置缺氧仓内短暂缺氧20min进行缺氧预处理(HPC),制备心肌细胞蛋白提取物;(2)对照组(control):细胞置于培养箱内持续常氧孵育至实验结束,提取蛋白.采用双向凝胶电泳和图像扫描,经蛋白样本分离和考马斯亮蓝染色后比较分析,选取3个差异表达蛋白点进行胶内酶切、肽质量指纹图谱分析和数据库检索.双向电泳可分离约529±45个蛋白质,点匹配率约为78%±7.5%.18种蛋白质在HPC后发生明显表达差异,其中12种蛋白质表达降低,6种表达增高.经质谱分析鉴定出的3种蛋白质分别为myosinlightpolypeptide3,nucleosidediphosphatekinase(NDPK)和calreticulin(CRT).缺氧预处理引起心肌细胞蛋白质组变化,初步发现其中myosinlightpolypeptide3表达下调、nucleosidediphosphatekinase和calreticulin表达增加,可能通过调节心肌细胞的收缩性、激活G蛋白、调节细胞内Ca2+浓度而保护心肌.本工作通过研究缺氧预处理延迟保护过程中心肌内源性蛋白表达水平的变化,有助于从细胞水平探讨预处理延迟保护机制.
- 徐菲菲孙胜刘秀华
- 关键词：缺氧预处理心肌细胞蛋白质组双向电泳质谱
- 内质网应激相关的CHOP凋亡途径参与大鼠腹主动脉狭窄致心肌肥大
- 内质网应激(endoplasmic reticulum stress,ERS)是细胞对环境改变的适应性反应,但过度ERS可诱导细胞凋亡,C/EBP homologous protein(CHOP)是ERS相关凋亡途径中重...
- 张振英刘秀华孙胜荣飞郭晓笋
- 关键词：心肌肥大内质网应激凋亡CHOP
- 文献传递
- 大鼠腹主动脉狭窄高血压心肌肥厚模型的优化
- ＜正＞ 目的:优化大鼠腹主动脉狭窄高血压心肌肥厚模型的复制方法。方法:采用腹部左侧纵切口手术方法制备腹主动脉狭窄高血压心肌肥厚大鼠模型,动态监测大鼠尾动脉压,术后4周检测颈总动脉压、左心室内压,称重法测定心脏系数和心肌肥...
- 王彦珍孙胜蔡莉蓉刘凤英刘秀华
- 文献传递
- 重组腺相关病毒为载体的心肌肌浆网钙离子ATP酶2a基因转导治疗慢性充血性心力衰竭:短期及中期作用(英文)被引量：1
- 2007年
- 背景:慢性充血性心力衰竭(CHF)时,心肌肌浆网钙离子ATP酶2a(sarcoplasmic reticulum Ca2+ ATPase,SERCA2a)的蛋白表达和活性均明显降低,这导致钙离子的调控异常和心脏收缩和舒张功能不全。目的:观察腺相关病毒为载体的SERCA2a基因转导对CHF大鼠的短期和中长期治疗作用,探讨其治疗心力衰竭的多种可能的机制。设计:随机对照设计。单位:解放军总医院老年心内科和病理生理研究室。方法:将雄性SD大鼠随机分为,假手术组,CHF组,CHF+GFP组和CHF+SERCA2a组4组,每组又分为基因转导10,30d2个时间点,后3组采用腹主动脉缩窄术建立CHF大鼠模型,手术后18～20周,造模成功的大鼠进行经腹心包腔内注射,CHF组注射500μL无菌生理盐水,CHF+GFP组和CHF+SERCA2a组分别注射等量携带GFP基因和SERCA2a基因的重组腺相关病毒。主要观察指标:①于基因转导后10,30d,检测大鼠的血流动力学参数,应用WesternBlot方法检测SERCA2a蛋白表达;改良的Jones法测定SERCA2a活性。②应用蛋白质组学研究技术分析比较基因转导30d组中CHF和CHF+SERCA2a亚组大鼠的心肌蛋白质组表达的差异。③应用电泳分离和定量的方法检测基因转导30d组的各亚组大鼠心肌肌球蛋白重链亚型的表达情况。结果:①SERCA2a蛋白表达和活性:CHF组和CHF+GFP组低于假手术组。基因转导10d后,CHF+SERCA2a组与CHF组比较,SERCA2a蛋白表达增加80.7%,活性增加89.9%,但低于假手术组水平;基因转导30d后,CHF+SERCA2a组SERCA2a蛋白表达和活性已经达到假手术组大鼠水平。②心脏功能:基因转导10d后,CHF+SERCA2a组血流动力学指标中左室舒张末压力明显下降,其他指标明显升高,但未完全达到对照大鼠的心功能水平;基因转导30d后心脏收缩和舒张功能进一步改善,各项指标与假手术组比较差异不显著。③心肌蛋白质组的研究发现,基因转导30d后,CHF+SERCA2a组多种能量代谢的酶表达明显增加。④凝�
- 惠海鹏李小鹰刘秀华鲁晓春杨伟孙胜
- 关键词：腺相关病毒基因疗法
- 大鼠腹主动脉狭窄高血压心肌肥厚模型的优化被引量：23
- 2004年
- 目的 :优化大鼠腹主动脉狭窄高血压心肌肥厚模型的复制方法。方法 :采用腹部左侧纵切口手术方法制备腹主动脉狭窄高血压心肌肥厚大鼠模型 ,动态监测大鼠尾动脉压 ,术后 4周检测颈总动脉压、左心室内压 ,称重法测定心脏系数和心肌肥大系数 ,并进行组织学观察。结果 :与假手术组比较 ,腹主动脉狭窄手术组大鼠 2周后尾动脉压升高 2 9% ,4周时颈动脉压和心室内压分别增加 2 8%和 36 % (均为P <0 .0 1) ,心脏指数和心肌肥大指数分别增大 0 .86和 0 .89(均为P <0 .0 1)。病理切片显示心肌细胞肥大。结论 :腹部左侧纵切口术式制备大鼠腹主动脉狭窄高血压心肌肥厚模型 ,方法简便可靠 ,重复性好 。
- 王彦珍孙胜蔡莉蓉刘凤英刘秀华
- 关键词：腹主动脉狭窄高血压心肌肥厚动物模型手术治疗
- 腺相关病毒介导心肌肌浆网钙离子ATP酶2a基因转导治疗充血性心力衰竭的机制探讨
- 本文采用重组腺相关病毒2作为载体,转导SERCA2a基因,研究了其对慢性心力衰竭大鼠的治疗作用，并研究了SERCA2a基因导入对心肌蛋白质组的影响，探讨了SERCA2a基因转导治疗心力衰竭的多种可能的机理。
- 惠海鹏李小鹰鲁晓春刘秀华孙胜刘涛
- 关键词：心力衰竭心衰治疗基因转导
- 文献传递
- 人尾加压素Ⅱ对大鼠脑微循环的影响被引量：5
- 2004年
- 目的 :探讨尾加压素II(UII)对于大鼠软脑膜微循环的影响。方法 :健康成年SD大鼠随机分为对照组、生理盐水 (NS)、UII(10 -7mol/L)、去甲肾上腺素 (NA ,10 -6mol/L)、UII(10 -7mol/L) +NA(10 -6mol/L)等五组 ,采用活体微循环观测技术观察大鼠软脑膜微血管内径、血流速度等微循环参数 ,采用激光多普勒血流量仪测定软脑膜血流量的变化。结果 :正常对照组软脑膜细动脉和细静脉血管内径分别为 (35 .4± 3.6 ) μm和 (40 .6± 8.5 ) μm ,UII组于滴加UII(10 -7mol/L)后即刻细动脉和细静脉出现收缩 ,1min时细动脉和细静脉收缩达到高峰 ,血管内径分别为 (2 5 .6± 3.4 ) μm和 (2 3.4± 3.3) μm (与正常对照组比较 ,P均 <0 .0 5 ) ;细动、静脉内血流速度无明显变化 (与正常对照组比较P均 >0 .0 5 ) ;软脑膜血流量于滴加UII(10 -7mol/L)后 1min开始升高 ,5min达到高峰 (3.5± 0 .4 )PU值 ,正常对照组 (2 .3± 0 .6 )PU值 (P <0 .0 5 )。结论 :UII可以使大鼠软脑膜微血管收缩 ,血流量增加。
- 刘秀华刘凤英蔡莉蓉孙胜田牛唐朝枢
- 关键词：尾加压素微循环血流量
- C/EBP同源蛋白介导的内质网应激相关凋亡途径参与腹主动脉狭窄致大鼠心肌肥厚被引量：14
- 2009年
- 内质网应激(endoplasmic reticulum stress,ERS)是细胞对环境改变的适应性反应,但过度ERS可诱导细胞凋亡。C/EBP同源蛋白(C/EBP homologous protein,CHOP)是ERS相关凋亡途径中重要的信号分子。本实验旨在探讨CHOP介导的ERS相关凋亡途径在大鼠腹主动脉狭窄致高血压心肌肥厚发生、发展中的作用。健康雄性Wistar大鼠85只,随机分为模型组(n=45)和对照组(n=40),模型组行腹主动脉狭窄术,对照组仅分离腹主动脉不行狭窄术,分别于术后1d、3d、7d、14d、28d时观察各组血流动力学变化,测定全心重/体重比(HW/BW)和左心室重/体重比(LVW/BW),RT-PCR技术检测左心室心肌组织ERS相关分子葡萄糖调节蛋白78(glucose-regulated protein78,GRP78)、钙网蛋白(calreticulin,CRT)和CHOPmRNA表达变化,Western blot分析GRP78、CRT、CHOP,以及凋亡相关蛋白Bax和Bcl-2表达变化。结果显示,腹主动脉狭窄可诱导大鼠心肌肥厚,与对照组比较,术后7d模型组大鼠血压升高,心功能代偿性增加,HW/BW和LVW/BW显著增加。模型组内质网分子伴侣CRTmRNA表达于术后1d即发生显著上调,较对照组增加136%(P<0.01),而蛋白在术后7d开始出现显著变化,较对照组升高69.2%(P<0.01);GRP78基因和蛋白表达均于术后7d显著增加,分别较对照组增加20%和186%(均P<0.01),在此后观察期间内CRT和GRP78mRNA和蛋白均持续高水平表达。相关分析显示左心室内压最大上升速率(+dp/dtmax)分别与CRT蛋白表达(r=0.780,P<0.01)和GRP78蛋白表达(r=0.694,P<0.01)显著正相关。长期ERS(14d)可触发CHOP凋亡途径,模型组大鼠心肌组织CHOP mRNA和蛋白表达均于术后14d显著上调,分别较对照组增加22.2%和76.0%(均P<0.01),同时促凋亡蛋白Bax表达增加(较对照组增加41.1%,P<0.01),而抗凋亡蛋白Bcl-2表达降低(较对照组降低25.5%,P<0.01);相关分析显示CHOP蛋白表达与Bax表达正相关(r=0.654,P<0.01),而与Bcl-2表达负相关(r=–0.671,P<0.01)。上述结果提示腹主
- 张振英刘秀华孙胜荣飞郭晓笋胡维诚
- 关键词：心肌肥厚内质网应激凋亡C/EBP同源蛋白
