孙建民
- 作品数：10 被引量：33H指数：4
- 供职机构：军事医学科学院基础医学研究所更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划国家攀登计划国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- DNA免疫法制备抗人Flt3-ligand单克隆抗体及其鉴定被引量：1
- 2000年
- 孙建民毛宁刘荷中唐佩弦
- 关键词：DNA免疫单克隆抗体
- 无血清培养的HeLa MR细胞内Ig样蛋白的检测被引量：5
- 1998年
- 我们曾报道，在乳腺癌、肝癌等上皮性恶性肿瘤细胞（包括原代及传代细胞）内存在着一种抗原性相同的蛋白〔１〕，其分子结构与Ｉｇ很相似。为了排除培养基中牛血清Ｉｇ通过某种机制进入细胞内，与抗人Ｉｇ发生交叉反应可能性，我们以阳性度较高的ＨｅＬａＭＲ为对象，进行...
- 侯春梅邱晓彦孙建民沈继铭唐佩弦毛宁
- 关键词：无血清免疫组织化学
- IFN-γ对IL-2基因转染B16细胞治疗肿瘤的增强作用
- 1998年
- 本实验在完成ＩＬ－２基因转染瘤苗的基础上，探索了重组ＩＦＮ－γ对其效果的增强作用。结果表明，ＩＬ－２基因转染使Ｂ１６细胞成瘤性显著降低；小鼠经ＩＬ－２基因修饰的Ｂ１６细胞免疫后，对接种的亲代Ｂ１６细胞有保护作用；ＩＬ－２基因转染的Ｂ１６细胞对接种亲代Ｂ１６细胞的小鼠有一定的治疗作用，与重组ＩＦＮ－γ联合应用后，治疗作用加强。上述结果表明，佐以合适的重组细胞因子，有可能提高单基因转染瘤苗的作用。
- 欧阳为明毛宁侯春梅杨靖清孙建民周生
- 关键词：肿瘤IFN-Γ白细胞介素2基因转染
- B16细胞中FLT3表达的检测及FLT3-Ligand对B16细胞生长的抑制作用
- 1999年
- 目的：检测造血生长因子受体ＦＬＴ３ 在非造血来源的黑素瘤细胞系Ｂ１６ 中的表达，并研究其配基ＦＬＴ３－Ｌｉｇａｎｄ（ＦＬ）对Ｂ１６ 细胞的作用。方法：通过ＲＴ－ＰＣＲ检测Ｂ１６ 细胞中ＦＬＴ３ ｍ ＲＮＡ的表达，流式细胞仪检测ＦＬＴ３ 蛋白在Ｂ１６ 细胞表面的表达，在培养液中加入不同浓度的ＦＬ对Ｂ１６ 细胞进行培养。结果：ＦＬＴ３ 在Ｂ１６ 细胞中有ｍ ＲＮＡ 的表达，在Ｂ１６ 细胞表面有蛋白质的表达。ＦＬ对Ｂ１６ 细胞的生长有抑制作用，并且这种抑制作用是浓度依赖性的，在一定的浓度范围内随着ＦＬ浓度的增高而增强。结论：ＦＬＴ３ 的分布不仅仅局限于小鼠的造血系统和神经系统，也表达于上皮性的肿瘤细胞Ｂ１６ 中，并在其配基ＦＬ的作用下抑制Ｂ１６ 细胞的生长。
- 孙建民毛宁隋拥军刘荷中张双喜唐佩弦
- 关键词：黑素瘤造血生长因子B16细胞
- 应用绿色荧光蛋白研究外源基因在造血细胞的表达调控被引量：6
- 1999年
- 以增强型绿色荧光蛋白为报道分子,研究双基因逆转录病毒载体介导小鼠骨髓细胞的基因转移中,SV(simianvirus)40启动子和内部核糖体进入位点(internalribosomeentrysite,IRES)对双基因共表达的影响。构建双基因中间序列分别为SV40启动子和IRES的载体pLESN和pLEIN。经包装获得较高滴度的病毒上清,以共培养的方式感染5-氟尿嘧啶预刺激的小鼠骨髓细胞。流式细胞仪检测表明转染效率约25%,PCR证明EGFP基因整合至骨髓细胞基因组。半固体培养转基因细胞7d,LEIN组获得具有G418抗性的集落中98%表达绿色荧光,而LESN组54%。结果表明:在双基因逆转录病毒载体介导的小鼠骨髓细胞的基因转导中,IRES与内部SV40启动子相比,更能保证双基因的共同表达。
- 刘兵周生张双喜孙建民杨靖清于晓媅毛宁
- 关键词：绿色荧光蛋白外源基因造血细胞
- 内部核糖体进入位点介导多药耐药基因1在人CD34^+细胞中的表达
- 2001年
- 为了达到双耐药基因共转染以拓宽造血细胞耐药谱的目的 ,初步观察了内部核糖体进入位点 (IRES)介导多药耐药基因 1(MDR1)在人早期造血细胞中的表达效率。由脑心肌炎病毒IRES调控MDR1基因翻译的双耐药基因逆转录病毒载体 pSF DIM和相同启动子调控的MDR1单耐药基因逆转录病毒载体 pSF MDR1,包装后获得的双嗜性包装细胞PA317 pSF DIM和PA317 pSF MDR1病毒滴度分别为 8× 10 4 和 1.3× 10 5cfu ml。用其上清感染人脐血CD34+ 细胞 ,经FCM检测表明基因转导后单基因转导组和双基因转导组P gp表达均有提高 ,分别为2 8.82 %(荧光强度 2 5 .4 9)和 10 .92 %(荧光强度 9.4 8) ,但单基因转导组高于双基因转导组。因此 ,IRES成功地介导了MDR1基因在人早期造血细胞中的表达 ,为后续的试验奠定了一定的基础。但是 ,双基因转导组和单基因转导组MDR1表达差异的原因还需进一步研究。
- 朱馥丽潘凌亚张毅孙建民刘荷中毛宁
- 关键词：内部核糖体进入位点多药耐药基因1肿瘤化疗骨髓抑制造血细胞CD34^+细胞
- 雌激素受体基因多态性与绝经后干眼症的相关性的研究被引量：13
- 2006年
- 目的:研究雌激素受体(estrogen receptor,ER)基因多态性与绝经后干眼症的相关性。方法:收集绝经后干眼症患者65例及正常对照73例血液标本,提取基因组DNA,用聚合酶链反应方法检测ER基因的XbaⅠ和PvuⅡ酶切多态性并进行统计学分析。结果:干眼症患者与正常人比较,ER基因的PvuⅡ酶切多态性存在显著性差异(P<0.05),而ER基因的XbaⅠ酶切多态性没有明显差异(P>0.05)。结论:ER基因的PvuⅡ酶切多态性与绝经后干眼症发病存在相关性,不同个体的基因差异可能影响干眼症的发生。
- 何燕玲黎晓新鲍永珍孙建民刘金荣
- 关键词：雌激素受体基因多态性干眼症绝经
- 应用IRES序列研究人FL与Tpo基因在转染HFCL细胞中的表达被引量：5
- 1999年
- 目的 探讨应用内部核糖体进入位点（ＩＲＥＳ）序列对逆转录病毒介导的人Ｆｌｔ３ 配基（ＦＬ）与血小板生成素（Ｔｐｏ） 基因在骨髓基质细胞系ＨＦＣＬ中的表达。方法 利用基因重组技术将ＩＲＥＳ序列与ＦＬ和Ｔｐｏ 基因构建到逆转录病毒载体中，脂质体法将重组质粒ｐＬＦＴＳＮ 和空载体ｐＬＸＳＮ转染ＰＡ３１７细胞，经Ｇ４１８ 筛选。用抗性克隆培养上清感染ＨＦＣＬ细胞，ＲＴＰＣＲ和基因组ＤＮＡＰＣＲ分析ｍＲＮＡ的表达及基因组整合情况，ＣＦＵＧＭ 集落法和Ｔｐｏ 依赖株法测定生物学活性。结果 成功构建出含ＩＲＥＳ序列的ＦＬ与Ｔｐｏ 基因逆转录病毒载体，ｍＲＮＡ水平及基因组中整合有ＦＬ与Ｔｐｏ 基因，生物学活性测定表明转染的骨髓基质细胞同时分泌ＦＬ与Ｔｐｏ。结论 ＩＲＥＳ序列调控ＦＬ与Ｔｐｏ 双基因在骨髓基质细胞中同时独立表达，为进一步研究转基因骨髓基质细胞对造血调控的影响奠定了基础。
- 张毅唐佩弦李秀森江飞子孙建民毛宁
- 关键词：细胞株PDGF
- FL在CHOdhfr细胞中的表达及其单克隆抗体的制备
- 该研究利用来自于病毒的内部核糖体进入位点序列(IRES)的双基因共表达特性构建了双基因共表达载体pIRES1dhfr,将报道基因增强型绿色荧光蛋白(EGFP)插入载体的多克隆位点,然后转染CHOdhfr细胞,经过氨甲喋(...
- 孙建民
- 关键词：FL单克隆抗体EGFP
- 文献传递
- 裂变中子诱导小鼠胸腺细胞凋亡的时间效应及其分子机制初探被引量：3
- 2000年
- 目的 :以60 Coγ射线为参比射线 ,研究裂变中子诱导小鼠胸腺细胞凋亡的时间效应 ,并初步探讨其分子机制。方法 :用形态学观察、DNA电泳、流式细胞仪 (FCM )分析及二苯胺 (DPA)法检测细胞凋亡 ;用斑点杂交方法检测 p53与bcl 2的基因表达。 结果 :小鼠经裂变中子 2 .5Gy照射后 2～ 2 4h ,在各时间点上均检测到胸腺细胞DNA梯状条带 ,利用光镜与电镜观察到具有典型凋亡特征的胸腺细胞 ;以DPA法、FCM分析与形态观察计数测定的结果 ,绘制时间效应曲线 ,发现胸腺细胞凋亡比例随着照射时间的延长而增加 ,在 6h前上升较快 ,8～ 10h达到峰值 ,12h后开始下降 ,2 4h较 4～ 12h明显降低 (P <0 .0 5) ,但略高于正常水平。γ射线 5.0Gy照射后 ,胸腺细胞凋亡比例随时间的变化规律与之相似 ,但在 6h之前增加较缓 ;此外 ,在照后 2 4h检测不到DNA梯状条带。裂变中子 2 .5Gy照射后 ,小鼠胸腺细胞 p53基因表达水平在 2、4、12、2 4h均比未照射组有显著增加 (P <0 .0 5或P <0 .0 1) ;bcl 2基因表达水平均比未照射组明显降低 (P <0 .0 1)。结论 :裂变中子 2 .5Gy照射小鼠可诱导其胸腺细胞凋亡 ,且与γ射线 5.0Gy照射有类似的时相性 ,但裂变中子诱导的胸腺细胞凋亡比γ射线增加快、持续时间长 。
- 苑宾孙建民侯春梅刘洪涛薛文成李梁王宝勤
- 关键词：裂变中子胸腺细胞细胞凋亡斑点杂交
