周立宏
- 作品数：14 被引量：10H指数：2
- 供职机构：吉林大学生命科学学院分子酶学工程教育部重点实验室更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金吉林省科技发展计划基金吉林省杰出青年科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学天文地球更多>>
- 抗Cyclin D1人源胞内单链抗体在肿瘤细胞中的表达及生物活性分析
- 细胞周期蛋白D1（Cyclin D1）是一类重要的细胞周期正性调控因子,它通过激活CDK4/6来推进细胞周期G1期到S期的演进。Cyclin D1在很多恶性肿瘤中呈过度表达,并与肿瘤的发生、恶性程度与患者的预后密切相关。...
- 周立宏
- 关键词：肿瘤基因治疗
- 文献传递
- 人细胞周期蛋白D1在大肠杆菌BL21中的表达及纯化被引量：2
- 2006年
- 将人细胞周期蛋白D1全长cDNA克隆入原核表达载体pET-28c(+)中,经酶切和测序鉴定正确的重组质粒转化E.coli BL21(DE3)后获得表达菌株.该菌株经IPTG诱导高效表达出带有组氨酸标签的以包涵体形式存在的融合蛋白,表达量占菌体总蛋白的23%.包涵体经洗涤和溶解,在变性条件下利用N i2+螯合柱纯化、尿素梯度复性后,得到纯度达98%以上的纯化蛋白.SDS-PAGE显示纯化蛋白的分子量约为43 000,W estern-blot分析表明,在相应分子量处有一特异性条带,说明成功表达和纯化重组人细胞周期蛋白D1.
- 李桂英邹德生周立宏曹玉华
- 关键词：包涵体融合蛋白蛋白质纯化大肠杆菌
- 特异性抗人cyclin D1人源单链抗体的筛选被引量：6
- 2006年
- 目的从噬菌体抗体库中筛选人源性抗人cyclinD1蛋白的单链抗体并进行鉴定。方法以原核表达并用Ni-NTA Agarose纯化的重组人cyclinD1蛋白为抗原,通过“吸附-洗脱-扩增”淘选过程从噬菌体抗体库中筛选特异性抗人cyclinD1蛋白的单链抗体,通过ELISA方法对获得抗体的特异性和结合活性进行分析鉴定。结果经过4轮筛选,获得7株能与人cyclinD1蛋白结合的阳性克隆,其中3株噬菌体的可溶性表达单链抗体能与人cyclinD1蛋白有特异性结合活性。结论利用噬菌体抗体库技术可以不经免疫过程制备出特异性的人源性抗人cyclinD1抗体。
- 李桂英朱迅周立宏邹德生郝东云田宇杜柏榕
- 关键词：噬菌体抗体库单链抗体
- 抗Cyclin D1胞内抗体与p16联合抑制乳腺癌细胞的增殖
- ＜正＞Cyclin D1的过量表达和p16的广泛失活,与肿瘤的发生和发展有着密切关系,是肿瘤基因治疗的靶点。胞内抗体技术是一项实现细胞内重要靶蛋白表型敲除的技术。为了实现高效抑制乳腺癌细胞增殖,本研究将抗Cyclin D...
- 陈勇杨丹周立宏曹玉华王媚娘李桂英
- 关键词：P16胞内抗体乳腺癌基因治疗
- 文献传递
- 内质网滞留型抗CyclinD1胞内抗体在HeLa细胞中的表达分析
- 2008年
- 目的构建内质网滞留型的抗CyclinD1胞内抗体并鉴定其在肿瘤细胞中的表达活性。方法利用PCR技术将细胞内质网滞留信号及E-tag检测标签引入抗CyclinD1人源单链抗体,获得抗CyclinD1胞内抗体(AD5E)基因片段,通过分子克隆技术,构建重组真核表达载体pcDNA3.1-AD5E,限制性内切酶分析及DNA测序验证其序列及读码框正确后,利用脂质体介导法转染HeLa细胞,RT-PCR和间接免疫荧光实验分析该胞内抗体在肿瘤细胞中的表达活性。结果限制性内切酶分析及DNA测序发现,正确引入细胞内质网滞留信号和E-tag检测标签序列,该胞内抗体片段为876bp。RT-PCR及免疫荧光实验结果显示,仅在转染胞内抗体基因的HeLa细胞中存在该胞内抗体的表达,并且主要分布在细胞质区域。结论我们成功构建了在肿瘤细胞中能够有效表达的内质网滞留型的抗CyclinD1胞内抗体。
- 周立宏朱迅田宇陈勇曹玉华冯晶李桂英
- 关键词：CYCLIND1胞内抗体肿瘤
- 内质网滞留型抗Cyclin D1胞内抗体的抑瘤效应分析
- Cyclin D1的过量表达与肿瘤的发生、发展及预后有着密切关系,是肿瘤基因治疗的靶点。胞内抗体技术是一项实现细胞内重要靶蛋白表型敲除的技术。本研究制备携带内质网滞留型抗Cyclin D1胞内抗体,并稳定转染MCF-7细...
- 武艳陈勇李函蔚周立宏曹玉华李桂英
- 关键词：胞内抗体乳腺癌基因治疗
- 文献传递
- 白乃庙金矿床地质特征及成矿远景预测
- 周立宏
- 内质网滞留型抗Cyclin D1胞内抗体的抑瘤效应分析
- 武艳陈勇李函蔚周立宏曹玉华李桂英
- 关键词：CYCLIND1胞内抗体乳腺癌基因治疗
- 抗CyclinD1人源单链抗体
- 本发明涉及一种抗CyclinD1人源单链抗体，一种单链抗体。是由IgK的前导肽、抗CyclinD1人源单链抗体、E－tag标签肽和内质网滞留肽KDEL基因编码序列组成，经可溶性表达、纯化及活性表征，其能够特异性结合Cyc...
- 李桂英朱迅周立宏邹德生曹玉华陈勇郝东云
- 文献传递
- 抗Cyclin D1胞内抗体AD5N基因真核表达载体的构建及其对乳腺癌细胞增殖的抑制作用被引量：3
- 2008年
- 目的:构建细胞核定位的抗Cyclin D1胞内抗体基因的真核表达载体并分析其对乳腺癌细胞增殖的抑制效应。方法:利用PCR技术和分子克隆技术,构建编码细胞核定位的抗Cyclin D1胞内抗体基因(AD5N)的真核表达载体pcDNA3.1-AD5N,利用脂质体介导法转染MCF-7细胞,RT-PCR、间接免疫荧光、Western blot和流式细胞术分析该胞内抗体基因AD5N在MCF-7细胞中的表达、定位及抑瘤效应。结果:经限制性内切酶分析及序列分析发现,成功构建编码细胞核定位的抗Cyclin D1胞内抗体(AD5N)基因的真核表达载体pcDNA3.1-AD5N,基因片段为855 bp,编码285个氨基酸,分子量约为30 kD。RT-PCR、免疫荧光及Western blot实验结果显示,仅在转染胞内抗体基因的MCF-7细胞中存在该胞内抗体的表达,并且主要分布在细胞核区域。与野生型MCF-7细胞和转染空质粒的细胞相比,在MCF-7/pcDNA3.1-AD5N细胞中AD5N的表达可明显抑制MCF-7细胞增殖,显著诱导细胞凋亡(P<0.01),使G0-G1期细胞周期指数增高12.64%,S期指数下降15.22%,凋亡细胞指数上升9.15%。结论:细胞核定位的抗Cyclin D1胞内抗体AD5N基因的表达,可有效抑制乳腺癌细胞的增殖,阻滞细胞周期进展,并诱导细胞凋亡。
- 周立宏朱迅曹玉华王磊陈勇杜柏榕李桂英
- 关键词：CYCLIN胞内抗体核定位乳腺癌
