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黄病毒通用引物RT-PCR以及Real-Time PCR方法的建立并应用于蚊虫检测: 黄病毒科/(Family Flaviviridae/)共有70余种病毒,其中黄病毒属/(Genus Flavivirus/)日本脑炎病毒复合组/(Japanese encephalitis virus complex/)...; 周晓俊; 关键词：黄病毒属蚊虫 RT-PCR; 文献传递

检测蚊虫感染黄病毒属病毒Real-time PCR方法的建立被引量：8: 2008年; 目的建立SYBR Green Real-time PCR检测和筛选黄病毒属病毒方法。方法参照文献报道的通用引物,以JEV cDNA和DEN cDNA为模板,建立RT-PCR和SYBR Green Real-time PCR,检测和筛选黄病毒属病毒,并比较两者的敏感性。结果此黄病毒属引物适合两种反应体系,SYBR Green Real-time PCR方法的敏感性是RT-PCR方法的100倍,最低检出病毒浓度为0.5×10-2PFU/ml。结论建立的两种方法均可用于黄病毒属病毒检测,以SYBR Green Real-time PCR方法具有更高的敏感性,对于黄病毒属病毒初筛检测具有应用价值。; 周晓俊朱淮民邱璐; 关键词：RT-PCR SYBR REAL-TIME PCR

乙型脑炎病毒prM蛋白单克隆抗体的制备被引量：1: 2008年; 目的克隆日本乙型脑炎病毒（Japanese encephalitis virus，JEV）前膜蛋白（prM）编码基因，原核表达、纯化prM蛋白，以纯化产物为免疫原制备单克隆抗体（mAb）；方法从感染JEV病毒的鼠脑中克隆编码JEV prM蛋白的基因并将其克隆人原核表达载体pET32a，转化大肠埃希菌BL21（DE3）LysS后以IPTG诱导表达。表达产物经Ni-NTA纯化后进行SDS-PAGE分析。用纯化的蛋白免疫BALB／c小鼠，经细胞融合和亚克隆后筛选出能分泌识别prM蛋白的mAb的杂交瘤细胞株。用Western Blot和免疫组化方法检测单克隆抗体的特异性。结果从鼠脑中克隆出约500bp的JEV prM基因，将其克隆人原核表达载体中，在大肠埃希菌中获得了较好表达。纯化的prM蛋白免疫BALB／c小鼠，经传统细胞融合及筛选方法制备出单克隆抗体，抗体滴度为10^5。ELISA、Western Blot和免疫组化检测结果证实该株单抗具有较好的特异性。结论成功的表达和纯化了日本乙型脑炎病毒的prM蛋白，并完成了单克隆抗体的制备，为乙型脑炎病毒感染的早期诊断及预防的研究奠定了良好的基础。; 宁北芳朱淮民周晓俊曹毅周爱国; 关键词：脑炎病毒病毒包膜蛋白质类原核细胞抗体单克隆

蚊媒感染日本脑炎病毒复合组病毒检测技术研究进展被引量：1: 2007年; 近年来，日本脑炎病毒复合组病毒感染引起人类疾病的发病率在全球范围呈逐年上升趋势，已成为世界上分布广、发病率高、危害较大的一组虫媒病毒性疾病。检测蚊媒体内此类病毒将对虫媒病的预测和预警、及时采取防范措施具有重要意义。该文就近年来这方面的研究进展作一综述。; 周晓俊朱淮民

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周晓俊