吴连连
- 作品数：11 被引量：17H指数：2
- 供职机构：徐州医科大学实验动物中心更多>>
- 发文基金：江苏省自然科学基金国家自然科学基金江苏省青年科技基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学更多>>
- 外源性胰岛素样生长因子-1对老年小鼠认知功能的影响被引量：7
- 2017年
- 目的探讨胰岛素样生长因子-1(IGF-1)对老年小鼠认知功能的影响机制。方法给予老年C57/BL6小鼠侧脑室注射IGF-1,Western blot检测胰岛素样生长因子-1受体(IGF-1R)蛋白的表达,5-溴脱氧尿嘧啶核苷(Brd U)荧光染色标记海马齿状回增殖的细胞,尼氏染色标记海马齿状回神经元,用Morris水迷宫实验和跳台实验评定老年小鼠学习记忆能力。结果 Western blot检测显示,IGF-1组老年小鼠海马中IGF-1R表达与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。Brd U染色结果显示,IGF-1组海马Brd U阳性细胞数与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。尼氏染色结果显示,IGF-1组神经元细胞数与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。水迷宫实验结果显示,经过训练后,IGF-1组老年小鼠的逃避潜伏期短于对照组,穿过平台的次数与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。跳台实验结果显示,与对照组比较,IGF-1组老年小鼠的基础错误次数减少,而潜伏期延长(P<0.05)。结论老年小鼠注射IGF-1后,其认知功能有一定改善,IGF-1可以提高老年小鼠认知功能。
- 吴连连袁红花朱孝荣
- 关键词：胰岛素样生长因子-1老年鼠5-溴脱氧尿嘧啶核苷水迷宫
- 牛皮蝇HA基因克隆及分泌型真核表达载体构建
- 为了构建牛皮蝇的皮蝇A (hyderminA,HA)基因的分泌型真核表达载体pEF1 α-HA-AcGFP,并在Cos7细胞中表达与鉴定,试验从牛皮蝇中提取RNA,反转录成cDNA,扩增出HA基因,并在HA序列的上游加一...
- 陈仁金胡安康王珍珍袁红花张腾业吴连连朱裕华朱孝荣
- 关键词：真核表达载体HA基因基因表达
- 针对HO-2基因的四种RNA干扰序列构建和效应观察
- 2015年
- 目的:构建和筛选出血红素氧合酶-2(HO-2)基因的RNA干扰载体,并观察其在小鼠脑血管内皮细胞中的表达情况。方法:根据小鼠HO-2基因的c DNA序列设计了4个HO-2基因干扰序列,克隆到干扰载体p GPU6-GFP-Neo上,利用电穿孔法将干扰载体对小鼠脑血管内皮细胞进行转染。Real-time PCR和Western Blot检测小鼠脑血管内皮细胞中HO-2的表达。结果:干扰载体显著抑制小鼠脑血管内皮细胞中HO-2的表达,其中干扰载体p GPU6-GFP-Neo-HO-2-mus-768对HO-2 mRNA的表达抑制达显著水平(P<0.01),蛋白的表达抑制达显著水平(P<0.05)。结论:成功构建并筛选了HO-2表达干扰载体,为下一步的HO-2基因的功能鉴定奠定了基础。
- 王珍珍张腾业陈仁金袁红花胡安康吴连连朱裕华朱孝荣
- 关键词：RNA干扰载体基因表达
- 兔病毒性出血症3C基因荧光表达载体的构建及其在293 T细胞中的表达
- 2016年
- 目的：构建EGFP与3C融合表达的真核表达质粒，为研究RHDV 3C蛋白在病毒感染中的作用提供基础。方法 RHDV 3C基因的片段经过反转录成cDNA，纯化的PCR产物经EcoRⅠ和SalⅠ双酶切后克隆到pEG-FP－C1载体，构建EGFP与3C融合表达的真核表达质粒。 pEGFP－C1－3C真核表达载体转染293T细胞，24 h后荧光显微镜检测及Western blot检测EGFP－3C融合蛋白表达情况。结果24 h后荧光显微镜及Western blot检测表明RHDV 3 C基因全长编码序能够成功插入到pEGFP－C1载体。结论 EGFP－3 C融合表达质粒能够被成功构建，从而有助于探索RHDV 3C蛋白在RHDV感染过程中的功能，为深入探讨RHDV的防治提供基础。
- 刘鹏陈全刚袁红花张锦萍吴连连胡安康陈仁金朱孝荣
- 关键词：兔病毒性出血症病毒真核表达载体
- IGF-1通过PI3K/Akt信号通路诱导神经干细胞向神经元分化被引量：7
- 2014年
- 目的观察胰岛素样生长因子-1(IGF-1)对体外培养神经干细胞(NSCs)向神经元分化的影响,并探讨PI3K/Akt信号通路与之的关系。方法取新生C57BL/6J小鼠海马组织,分离、培养NSCs,将细胞团吹散,以1×104个/mL密度接种于24孔板,分别加入终浓度100 ng/mL的IGF-1和50μmol/L的PI3K/Akt通路特异抑制剂LY294002,根据处理的情况,将细胞分为IGF-1组、正常对照组、LY组和IGF-1+LY组。βⅢTubulin免疫荧光细胞化学染色法检测NSCs分化为神经元的情况,DAPI染核计细胞总数;p-Akt免疫荧光染色检测各组细胞Akt磷酸化的情况;Western blotting法检测Akt和p-Akt蛋白的表达量,并对各组进行比较。结果 IGF-1组NSCs向神经元分化的比率显著高于对照组、LY组和IGF-1+LY组(P均<0.05);免疫荧光染色结果显示,IGF-1组Akt磷酸化水平显著高于对照组、LY组和IGF-1+LY组(P均<0.05);Western blotting结果显示,IGF-1促进Akt磷酸化,LY294002抑制Akt的磷酸化。结论 IGF-1诱导Akt的磷酸化,从而激活PI3K/Akt信号通路,促进NSCs向神经元分化。
- 朱裕华袁红花吴连连胡安康陈仁金朱孝荣
- 关键词：胰岛素样生长因子1PI3KAKT信号通路神经干细胞分化
- HA蛋白多肽抗体的设计、制备与鉴定
- 2013年
- 利用人工合成的多肽制备HA的特异性多克隆抗体,以期用于HA基因的免疫调控机制研究。根据GenBank中报道的皮蝇素A(Hydermin A,HA)一级结构信息以及HA抗原生物学信息,获得三段序列特异性较高的多肽,采用9一氟甲氧羰基固相合成法获得多肽,采用HPLC和LC·MS测定合成多肽的浓度和分子量,试验表明目的多肽纯度达91.2%、目的多肽分子量为28kD。将多肽与KLH进行偶联,并用其免疫新西兰大白兔以获得抗血清和多克隆抗体。采用ELISA和Western blotting测定其效价和特异性,经ELISA检测表明抗血清可与Pep发生特异性免疫反应,经Western blotting试验表明抗血清和多克隆抗体可识别HA特异性条带,其相对分子量为28kD,与预测分子量相符。该抗体的制备为研究HA免疫调控机制提供了有用工具。
- 袁红花王珍珍陈仁金胡安康张腾业吴连连冀德君朱孝荣
- 关键词：HA多肽多克隆抗体
- 脑组织特异性表达胰岛素样生长因子-1转基因小鼠制备
- 2012年
- 目的制备脑组织特异性表达胰岛素样生长因子-1(Insulin-Like Growth Factors 1,IGF-1)转基因小鼠。方法采用精子为载体法进行基因转导,出生后小鼠PCR检测,建立转基因小鼠系,用Western blot和免疫荧光法分别检测转基因小鼠海马齿状回亚粒状区(subgranular zone,SGZ)IGF-1表达量和报告基因EGFP阳性细胞数。结果获得3只阳性小鼠,2只外源基因能稳定遗传,并建立了转基因小鼠系,转基因鼠SGZ区域IGF-1表达量显著高于正常鼠,EGFP也在此区域表达。结论成功制备IGF-1转基因小鼠。
- 吴连连袁红花朱孝荣
- 关键词：胰岛素样生长因子-1转基因小鼠
- 血红素氧合酶-2基因真核表达载体的构建
- 2014年
- 为构建血红素氧合酶-2(HO-2)真核表达载体pEF1α-HO-2-AcGFP,并观察其在小鼠脑血管内皮细胞中的表达情况。试验利用PCR技术从C57BL/6小鼠海马组织中扩增出HO-2基因cDNA序列,用双酶切法将此序列克隆到真核表达载体pEF1α-IRES-AcGFP上,构建HO-2的真核表达载体pEF1α-HO-2-AcGFP,重组载体经EcoRI和BamHI双酶切和测序鉴定。电穿孔法转染小鼠脑血管内皮细胞,48h后,实时定量PCR、Western blot检测HO-2在小鼠脑血管内皮细胞中mRNA和蛋白质水平的表达情况。结果表明,pEF1α-HO-2-AcGFP载体构建正确;重组载体转染小鼠脑血管内皮细胞后HO-2在mRNA水平表达量较空载体转染极显著增高(P<0.01),在蛋白水平表达量较空载体转染显著增高(P<0.05)。表明HO-2基因的真核表达载体pEF1α-HO-2-AcGFP构建成功,为进一步研究其机制和功能奠定了基础。
- 张腾业王珍珍陈仁金袁红花胡安康吴连连朱裕华冀德君朱孝荣
- 关键词：真核表达载体基因表达
- 牛皮蝇HA基因克隆及分泌型真核表达载体的构建
- 2014年
- 为了构建牛皮蝇的皮蝇素A(hypodermin A,HA)基因的分泌型真核表达载体pEF1α-HAAcGFP,并在Cos7细胞中表达与鉴定,试验从牛皮蝇中提取RNA,反转录成cDNA,扩增出HA基因,并在HA基因序列的上游加1段信号肽序列;通过双酶切将带有信号肽的HA基因序列克隆到真核表达载体pEF1α-IRES-AcGFP中,得到分泌型真核表达载体pEF1α-HA-AcGFP;再利用脂质体法转染Cos7细胞,并以RT-PCR和Western-blot技术在RNA和蛋白水平上检测HA基因是否在Cos7细胞中表达。结果表明:经双酶切及测序鉴定,分泌型真核表达载体pEF1α-HA-AcGFP构建成功;转染Cos7细胞后,在RNA和蛋白水平上能检测到HA基因的表达。说明成功构建了HA基因的分泌型真核表达载体PEF1α-HA-AcGFP。
- 陈仁金胡安康王珍珍袁红花张腾业吴连连朱裕华朱孝荣
- 关键词：牛皮蝇宿主真核表达载体HA基因基因表达
- 胰岛素样生长因子-1诱导新生小鼠海马源性神经干细胞增殖分化的研究被引量：1
- 2013年
- 目的探讨胰岛素样生长因子-1（IGF-1）对新生小鼠海马源性神经干细胞（NSCs）增殖和分化的影响。方法通过取新生C57BL／6J小鼠海马组织，机械分离，体外培养NSCs，特异性标志蛋白Nestin免疫荧光鉴定。在细胞培养液中加入100μg／L的IGF-1记为IGF-1组，同时设立正常细胞对照组。CCK-8试剂盒检测细胞增殖情况，GFAP、133Tubulin细胞免疫化学检测细胞分化情况。结果体外成功培养NSCs，特异性蛋白Nes-tin具有表达。IGF-1组NSCs较对照组增殖显著，且IGF-1组细胞具有显著的迁移和分化能力。细胞免疫荧光鉴定，IGF-1可促进细胞分化为星形胶质细胞和神经元（P〈0．05）。结论IGF-1能够促进体外培养的新生小鼠海马源性NSCs增殖，并诱导NSCs向星形胶质细胞和神经元分化。
- 朱裕华胡安康陈仁金吴连连袁红花朱孝荣
- 关键词：胰岛素样生长因子-1神经干细胞小鼠
